2022年生物培养基验证方案 .pdf

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1、第 1 页 共 8 页生物培养基验证方案1. 验证目的：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基适合于细菌， 真菌的无菌检查，营养琼脂培养基、 玫瑰红钠琼脂培养基的微生物限度检查。特制定本验证方案。2. 参照标准：2010版中国药典3. 验证项目：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基灵敏度检查。4. 验证小组5.试验材料：4.1. 被验证培养基：品名：硫乙醇酸盐流体培养基规格：批号：生产厂家：品名：改良马丁培养基规格：批号：生产厂家：品名：营养琼脂培养基规格：批号：生产厂家：品名：玫瑰红钠琼脂培养基规格：批号：生产厂家：姓名部门职责质保部负责对

2、验证进行总结和评价批准方案及报告质保部负责制定确认方案及报告的编制质保部负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠质保部负责实验中所用检测设备的检定和校准名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 8 页 - - - - - - - - - 第 2 页 共 8 页4.2. 仪器设备：BSC-1000-A2 生物安全柜YXQ.SG41.280 压力蒸汽灭菌器SW-CJ-1F 净化工作台HNZ-1-1F 净化工作台HN303-4 电热恒温培养箱250B 数显生化培养箱M

3、J-160B 霉菌培养箱4.3. 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液5 培养基的灵敏度检查1.菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5 代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代） ，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。大肠埃希菌(Escherichia coli)CMCC(B) 44 102 大肠埃希菌(Escherichia coli)CMCC(B) 44 102 金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus aureus)CMCC(B) 26 003铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)CMCC(B) 10 104枯草芽孢杆菌(Bacil

4、lus subtilis )CMCC(B) 63 501生孢梭菌(Clostridium sporogenes)CMCC(B) 64 941 白色念珠菌(Candida albicans)CMCC(F) 98 001名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 8 页 - - - - - - - - - 第 3 页 共 8 页黑曲霉(Aspergillus niger )CMCC(F) 98 003 2.菌液制备1）.金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌菌液的制备接

5、种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，3035培养 1824 小时，上述培养物采用液体培养物直接稀释法或细菌标准浓度比浊法，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于 100 cfu（/50100cfu）的菌悬液（一般稀释至10-7） 。菌数测定采用营养琼脂培养基平皿法。2）.枯草芽孢杆菌菌液的制备接种枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤，3035培养 1824 小时，上述培养物采用液体培养物直接稀释法或细菌标准浓度比浊法，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数小于 100 cfu （/50100cfu）的菌悬液（一般稀释至10-5）

6、。菌数测定采用营养琼脂培养基平皿法。3）.生孢梭菌菌液的制备接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中,3035培养1824 小时，采用液体培养物直接稀释法或细菌标准浓度比浊法，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于 100 cfu （/50100cfu）的菌悬液。菌数测定用硫乙醇酸盐流体培养基试管法。4）.白色念珠菌菌液的制备接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基,2328培养 2448小时，上述培养物采用液体培养物直接稀释法或细菌标准浓度比浊法，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于 100 cfu （/50100cfu）的菌悬液（一般稀释至 10-6） 。菌

7、数测定用玫瑰红钠琼脂培养基平皿法。5）.黑曲霉菌液的制备接种黑曲霉的新鲜培养物于改良马丁琼脂斜面培养基上,2328培养57 天至大量孢子产生，加入35mL 含 0.05%(ml/ml)聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液， 将孢子洗脱。 然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内， 采用细菌标准浓度比浊法，用含 0.05%(ml/ml)聚山梨酯 80的 0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - -

8、 - - - 第 3 页，共 8 页 - - - - - - - - - 第 4 页 共 8 页孢子数小于 100 cfu（/50100cfu）的孢子悬液。孢子数测定用玫瑰红钠培养基平皿法。菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在28，可在24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在28，在验证过的贮存期内使用。6 . 培养基的适用性检查：取大肠埃希菌， 金黄色葡萄球菌， 枯草芽孢杆菌各 50100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基， 每株试验菌平行制备2 个平皿，混匀，凝固，置 3035培养 3 天，计数；取白色念珠菌，黑曲霉各50100cfu，分别注入无菌平皿中，

9、立即倾注玫瑰红纳琼脂培养基， 每株试验菌平行制备2 个平皿，混匀，凝固，置 2328培养 5 天，计数；结果判定：若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的 70%， 且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。7 . 灵敏度试验：取每管装量为 12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基9 支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌， 铜绿假单胞菌， 枯草芽孢杆菌， 生孢梭菌各两支， 另一支不接种作为空白作照， 培养 3 天，取每管装量为 9ml 的改良马丁培养基5 支，分别接种小于 100cfu 的白色念珠菌，黑曲酶各2 支，另一支不接种作为空白对照，培养

10、 5 天，逐日观察结果。结果判断： 空白对照管应无菌生长， 若加菌的培养基管菌生长良好，判断培养基的灵敏度检查符合规定。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 4 页，共 8 页 - - - - - - - - - 第 5 页 共 8 页表 1 培养基的无菌性检查表验 证日期：检验人：复核人：日期：培养基名称培养皿培养时间（天）备注1 2 3 营养琼脂培养基1 2 3 4 5 玫瑰红纳琼脂培养基培养皿培养时间（天）1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 结论名师资料总结 -

11、- -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 5 页，共 8 页 - - - - - - - - - 第 6 页 共 8 页表 2 培养基的无菌性检查表验证日期：验证人：复核人 ：日期 ：培养基名称管数培养时间（天）备注1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 硫乙醇酸盐流体培养基（3035）1 2 3 4 5 改良马丁培养基（2328）1 2 3 4 5 结论名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名

12、师精心整理 - - - - - - - 第 6 页，共 8 页 - - - - - - - - - 第 7 页 共 8 页表 3 培养基适用性检查表验证日期：菌种类型培养皿营养琼脂培养基3035培养 3 天验证用培养基对照培养基验证用培养基 /对照培养基结论大肠埃希菌1 2 金黄色葡萄球菌1 2 枯草芽孢杆菌1 2 空白对照1 菌种类型培养皿玫瑰红纳琼脂培养基2328培养 5 天验证用培养基对照培养基验证用培养基 /对照培养基结论白色念珠菌1 2 黑曲霉1 2 空白对照结论：备注：验证人：复核人：日期：名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - -

13、 - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 7 页，共 8 页 - - - - - - - - - 第 8 页 共 8 页表 4 培养基灵敏度检查表硫乙醇酸盐流体培养基批号：改良马丁培养基批号：验证日期：菌种类型培养基装量（ ml）培养基管硫乙醇酸盐流体培养基（天）结论1 2 3 金黄色葡萄球菌12 1 12 2 枯草芽孢杆菌12 1 12 2 铜绿假单胞菌12 1 12 2 空白对照12 1 菌种类型培养基装量（ ml）培养基管改良马丁培养基（天）结论1 2 3 4 5 白色念珠菌9 1 9 2 空白对照9 1 验证人：复核人：日期：注： “+”为生长，“-”为不生长名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 8 页，共 8 页 - - - - - - - - -