色谱柱选择与维护ppt课件.ppt

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1、 色谱柱的选择与维护色谱柱的选择与维护 魏少勇魏少勇 15920467889我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 色谱柱的选择与维护色谱柱的选择与维护公司简介公司简介如何选择色谱柱如何选择色谱柱A、固定相的选择、固定相的选择B、PH的选择的选择如何维护色谱柱如何维护色谱柱中国全权总代理中国全权总代理我们的宗旨我们的宗旨: 以最真诚和迅速的态度替用户提以最真诚和迅速的态度替用户提供优质服务供优质服务,解决分析的问题和需要解决分析的问题和需要2004 Labvision HPLC Column Re

2、port2004年一月到六月年一月到六月Labvision调查美国调查美国1200实验室结果实验室结果使用柱子数量的比例使用柱子数量的比例Phenomenex25%W22.5%A7.7%S7.6%其他其他 5% 以下以下理想的柱子理想的柱子如何得到最理想的分析结果如何得到最理想的分析结果Ginseng RootColumn:Luna 5 m C18 / ODS (2)Dimensions:150 x 4.6 mm IDElution Type:GradientEluent A: Acetonitrile/water (15:85)Eluent B: Acetonitrile/water (80

3、:20) Flow Rate:1.5 mL/minTemperature:25 CDetection: UV-Vis Abs. Variable Wave. 205 nm App ID 1125Basic Drugs at Neutral pH疏水性的比较疏水性的比较0.0002.0004.0006.0008.00010.000k butylbenzeneSynergiHydro-RPLunaC18(2)SynergiMax-RPLuna C8(2)Luna C5Luna Phe-HexJupiter C18SynergiPolar-RPProdigyPhenylJupiter C4LunaC

4、yanoLunaAminoC18 phasesC8 phase300 C18 phaseColumns: Luna 5m C18(2)YMC-Pack 5m Pro C18Synergi 4m Polar-RP (Ether-linked Phenyl)150 x4.6mmMobile phase: 75:25 Methanol:waterFlow rate:1 mL/minComponents: 1. Estrone2. EstradiolOHHHOHCH3HEstradiolOHHHOCH3HEstronemi n12345mA U02 55 07 51 0 01 2 51 5 01 7

5、5mi n12345mA U02 55 07 51 0 01 2 51 5 01 7 52 0 0mi n12345mA U02 04 06 08 01 0 0Luna C18(2)Synergi Polar-RPYMC-Pack Pro C181+21+212OHHHOHCH3HEstradiolOHHHOCH3HEstroneSynergi Max-RP - C12Max-RP - C12Synergi Hydro-RP - C18Hydro-RP - C18Synergi Fusion-RP C18Fusion-RP C18Synergi Polar-RP PhenylPolar-RP

6、PhenylLinear Velocity (mm/sec)Plate Height (H)5 43 Flow Rate (mL/min)Pressure Drop (Bar)higher efficiencieslower backpressuresSynergiSynergi Hydro-RP VS. Luna C18(2)Synergi Hydro-RPMobile Phase:A: 20mM KH2PO4, pH 4.6B: AcetonitrileGradient: A/B (95:5) to A/B (65:35) in 15 minFlow rate: 1.5 mL/minSam

7、ple:1. Morphine2. Hydromorphone3. Codeine4. Nalorphine5. OxycodoneSynergi Hydro-RPmin02468101214mAU 0100200300400500 VWD1 A, Wavelength=210 nm (S:HPCHEM1DATASW1003TEST0034.D)min02468101214mAU 050100150200250300350 VWD1 A, Wavelength=210 nm (S:HPCHEM1DATASW1003FUSI0046.D)Running ConditionsMobile phas

8、e: 75:25 20mM Potassium phosphate pH 2.5: AcetonitrileFlow rate: 1.5 ml/minTemperature: AmbientDetection: 210nmInjection: 1. Maleic acid2. Chlorpheniramine 3. Triprolidine 4. Diphenhydramine Synergi Fusion-RP 4 80一般的 C18柱极性增大极性增大疏水性减少疏水性减少min02468101214mAU 020406080 VWD1 A, Wavelength=230 nm (F:PHEN

9、1575HPCHEM2DATASW0503CARLO071.D)min02468101214mAU 020406080 VWD1 A, Wavelength=230 nm (F:PHEN1575HPCHEM2DATASW0503CARLO087.D)min02468101214mAU 020406080 VWD1 A, Wavelength=230 nm (F:PHEN1575HPCHEM2DATASW0503CARLO088.D)Synergi Fusion-RPAvg symm: 0.91Synergi Max-RPAvg symm: 0.77Luna C18(2)Avg symm: 0.

10、82 Running ConditionsMobile phase: A: 25mM Tris pH 9 B:ACNGradient:40%-70% B in 15 minutesFlow rate: 1.0 ml/minDetection: 230nmComponents: 1. Scopolamine, LogP = 2. Lidocaine, LogP = 2.443. Noscapine, LogP = 1.97NOCH3OOOHOONOOHHOOOSiCH3CH3OSiOSiOOSiOOHOHLunaPhenyl-HexylGreen Tea(绿茶)Column: Luna 5u P

11、henyl-HexylDimensions: 250 x 4.6mmMobile Phase A:0.2% Acetic acid in Water/Acetonitrile (91:9)B:Water/Acetonitrile (20:80)Gradient: 100%A to t=25min, (68:32) t=25min to t=35min, hold 100%B for 10 min.Flow Rate: 1ml/minTemperature: 350CApp ID 14436IBUPROFENCH3CH3CH3COOHINDOMETHACINNOCH3COOHColumns: L

12、una 5m C18(2) 150 x4.6mmLuna5m Phenyl-Hexyl 150 x4.6mmSynergi 4m Polar-RP150 x4.6mmMobile phase:50:50 Acetonitrile:20mM Potassium phosphate pH 2.5Flow rate:1.0 mL/minComponents:Acidic, aromatic compounds 1. Indoprofen2. Ethyl paraben3. Naproxen4. Diflunisal5. Indomethacin6. Ibuprofenm in1234567m A U

13、05 01 0 01 5 02 0 02 5 0min1234567mAU020406080100120140min1234567mAU020406080100120140C18(2)Phenyl-HexylPolar-RP当选择流动相的当选择流动相的pH时时,我们必需考虑我们必需考虑到到pH对分析物和柱子两者的影响对分析物和柱子两者的影响pH对分析物的影响对分析物的影响多数硅胶柱没法于高多数硅胶柱没法于高pH条件下稳定条件下稳定,所以所以一般分析碱性化合物时一般分析碱性化合物时,会选择于会选择于pH1.5-3下进行分析下进行分析.在此在此pH条件下条件下,硅胶表面的游硅胶表面的游离离Si-O

14、-H会保持中性会保持中性,减少离子间的二极反减少离子间的二极反应应,因而减少峰拖尾因而减少峰拖尾,峰型较好峰型较好但是在低但是在低pH条件下条件下,碱性化合物的极性增碱性化合物的极性增加加,疏水性减少疏水性减少,如果要增加峰保留时间如果要增加峰保留时间,流流动相的有机溶剂比率必需减少动相的有机溶剂比率必需减少在高在高pH条件下条件下,碱性化合物可以保持中性碱性化合物可以保持中性,疏水性疏水性因而增加因而增加,但是如果峰保留时间太长但是如果峰保留时间太长,可以将流动可以将流动相的有机溶剂比率增加相的有机溶剂比率增加,以缩短保留时间以缩短保留时间.增加选增加选择分析条件的弹性择分析条件的弹性流动相

15、的有机溶剂比率增加流动相的有机溶剂比率增加,以缩短保留时间外以缩短保留时间外,并可以增进峰型并可以增进峰型(尖尖)Particle Technology Polymer Silica TwinpH 1 12 StabilitypKapKa C18 phasePhenyl phase固定相的影响固定相的影响Hydrophobicity RankingPhase Description & Column FingerprintSorbent Characteristics & Application Use选择柱子的绝佳参考资料选择柱子的绝佳参考资料方法开发的绝佳参考资料方法开发的绝佳参考资料5%

16、 原理原理 C18 柱的基本冲洗方法柱的基本冲洗方法使用柱体积使用柱体积10倍的以下溶液冲洗倍的以下溶液冲洗,以以0.1-0.2ml/min流速流速95/5 = 水水:乙晴乙晴5/95=水水:乙晴乙晴梯度冲洗梯度冲洗-于分析结束后由于分析结束后由5%乙晴增加到乙晴增加到95%乙晴乙晴保护柱套和柱芯保护柱套和柱芯一般的保护柱有何缺点一般的保护柱有何缺点我们的保护柱套有何不同我们的保护柱套有何不同我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物柱子产品种类多柱子产品种类多,可选择性广可选择性广柱子重复性好柱子重

17、复性好,可同时提供不同批次柱子分析可同时提供不同批次柱子分析每支柱子一律单独品管测试每支柱子一律单独品管测试,保证质量保证质量我们有保证退货政策我们有保证退货政策密切和用户合作密切和用户合作,迅速解答客户问题迅速解答客户问题,增进效率增进效率色譜柱是我们的生命色譜柱是我们的生命,我们必需比仪器厂家做的更好我们必需比仪器厂家做的更好于多数欧美国家销售第一于多数欧美国家销售第一,世界认可世界认可,有利出口检验有利出口检验会根据客户需要会根据客户需要,选择最适当的柱子选择最适当的柱子可以有条件的试用可以有条件的试用价位合理价位合理广州总部广州总部: 020-38785061/62/63 上海代表处上

18、海代表处: 021-51611275/76北京代表处：北京代表处：010-64468935/36成都代表处：成都代表处：028-85194097/79华中办事处：华中办事处：027-87668497网站网站: ; 谢谢谢谢 YMC Pack is a trademark of YMC, Inc. Xterra is a registered trademark of Waters Corporation. Synergi, Gemini, Luna, Prodigy and Jupiter are trademarks of Phenomenex Inc. Polar-RP is a registered trademark of Phenomenex,Inc. Phenomenex is in no way affiliated with YMC Inc. or Waters Corp.