植物组织中无机磷含量的测定.doc

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1、Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date植物组织中无机磷含量的测定植物组织中无机磷含量的测定目的意义 磷参与植物体内多种代谢，促进碳水化合物的合成、转化和运输，施磷对提高作物产量和品质有明显的效果。通过本实验掌握植物体内磷含量测定的方法及其原理。一、实验原理测定磷含量的方法主要有磷钼蓝比色法(适宜含磷量较低)和钒钼黄比色法(适宜含磷量较高)等。可直接用于植物组织可溶性磷的测定。如用于植物材料全磷含量测定，需

2、将材料用浓H2SO4 H202消煮转化为可溶性磷。 1磷钼蓝比色法 在适宜的酸性条件下，磷酸能与钼酸铵作用形成磷钼酸按，并被抗坏血酸或氯化亚锡等还原剂还原，生成蓝色的磷钼蓝，并在650 nm处有最大吸收蜂，其颜色深浅与含磷量成正比，可直接比色测定。2钒钼黄比色法 待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸，溶液黄色的深浅与磷酸含量成正比，生成物在440nm波长有吸收高峰。可用比色法定量磷。此法的优点是黄色稳定，对显色条件要求不十分严格，操作简便，干扰物少，灵敏度较低，工作范围随选用的吸收波长而异。选用波长（nm） 400nm 440nm 470nm 490nm 测磷工作范围（mg/g

3、） 0.75-5.5 2.0-15 4-7 7-20二、材料、设备及试剂 1材科 玉米、接骨木、瓜类、葡萄等幼苗；各种植物的根、茎、叶、种子及全株过60-80目筛干粉。 2设备 电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、容量瓶、刻度试管、漏斗、小纸等。 3试剂 (1)2.5钼酸铵溶液 称取(NH4)2MoO4鸣25g用蒸馏水溶解并定容至1000ml。 (2)10mg/L磷标准液 精确称取烘至恒重的分析纯KH2PO4 0.4398g加蒸馏水溶解定容至1000m1，摇匀；取此液10ml定容至100ml即为10mg/L磷标准液。(3)10抗坏血酸溶液（现用现配)。 (4)定磷试剂 按下列顺序及比例将各试剂混

4、合即成。蒸馏水、6mol/L硫酸、2.5钼酸铵、10抗坏血酸按2:1:1:1(体积比)混合，贮于棕色瓶内。若变为棕黄色即不能使用。 (5)钒钼酸铵试剂A液：25g(NH4)6MO7O244H2O(钼酸铵)溶于400ml水。B液：1.25g偏钒酸铵溶于300ml沸水冷却后加入250ml浓HNO3将A液缓缓倾入B液中，搅匀定容1000m1，贮于棕色瓶中。(7)6mol/L Na0H 称24gNa0H溶于100ml水。(8)0.2二硝基酚指示剂 0.2g 2,6二硝基酚(或2,4二硝基酚)溶于100ml水。(9)50mg/L磷标难液 称0.2197g经烘干的分析纯KH2PO4溶于400ml水加入25

5、ml，3mol/LH2SO4定容1000m1，此液可久贮。三、操作方法1磷钼蓝比色法(1)样品制备 取作物组织(叶、叶鞘或茎等)用组织捣碎机或研钵制成匀浆，定容，过滤(必要时可用活性炭脱色)，滤液备用。伤流液可直接测定。(2)标难曲线制作及样品测定 取6支试管，分别编号为o。5，按下表顺序加入磷标准液及其他试剂，以制作标准曲线。另取1支试管编号为6，作为样品管，按下表加人各试剂。并将各管充分摇匀，在45水浴中保温25min，以空白作对照，在分光光度计650nm处测定吸光度。以吸光度值为纵坐标，磷含量为横坐标，绘制标准曲线。并根据6号管的吸光度值，从标准曲线上查出测定液中磷含量。表一 磷钼蓝比色

6、法测磷反应体系项目管号0123456各管含磷量（g）0246810x10mg/L磷标准液（ml）00.20.40.60.81.0样品0.2蒸馏水（ml）3.02.82.62.42.22.02.8定磷试剂（ml）3.03.03.03.03.03.03.0吸光度值（A650）2钒钼黄比色法(1)样品制备(参见磷钼蓝比色法)。(2)样品测定：吸待测液5-10ml于容量瓶，加2滴二硝基酚指示剂，加6mol/LNaaOH中和至刚呈黄色，加10ml钒钼酸铵试剂，用蒸馏水定容，在440nm处比色，以空白溶液调零。(3)标准曲线制作：50ml容量瓶8个，编号07，准确吸50mg/L磷贮备标液0、1、2.5、5、7.5、10、15ml分别加入各瓶，按步骤(2)加入各试剂显色，即得：0、1.0、5、5.0、7.5、10、15磷的标准色阶，测定A440。以吸光度为纵坐标，磷标准浓度为横坐标，绘制工作曲线。四、实验结果按计算公式计算样品中磷的百分含量。样品含磷量()mxV/V1W10-4mx：标准曲线查出测定液中磷含量(g)V：样品提取液总体积(ml)V1：用于测定的样品液(ml) ：w：样品鲜重或干重(g)10-4：样品含磷量(g/g)换算成百分含量应乘系数-