微生物检验实验室链球菌属标准操作规程.doc

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1、微生物检验实验室链球菌属标准操作规程1. 概述链球菌是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。该菌属种类繁多，目前临床上仍延用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G群），或根据溶血现象（溶血、溶血或草绿色溶血、溶血或不溶血）进行分类。2.标本类型血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。3.鉴定3.1 形态与染色：革兰阳性球菌，固体培养基上单个或成双排列，较少呈链状排列；肉汤培养基中呈长链排列；从脓液、尿液和痰液等标本直接涂片镜检，呈单个、成双或短链排列。3.2 培养特性：在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：a溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；B溶血周围有明显较大的

2、完全透明环；。溶血（不溶血）无异常变化。周围有灰绿色的狭窄溶血环；肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色溶血环。3.3 生化反应：触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。肺炎链球菌分解菊糖，胆汁溶菌试验阳性，Optochin试验敏（抑菌环14mm）。3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征：革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小、可出现：a溶血、B溶血或不溶血，触酶试验阴性。3.4.2根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群：A群链球菌（化脓性链球菌）：溶血，杆菌肽敏感。B群链球菌（无乳链球菌）：溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验

3、阳性。C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：CAMP试验、马尿酸钠、65g/L氯化钠耐盐试验均为阴性，杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。D群非肠球菌（马肠链球菌、牛链球菌、变形链球菌等）：胆汁七叶苷试验阳性，65g/L氯化钠耐盐试验为阴性。D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌和坚忍肠球菌等）：胆汁七叶苷、65g/L氯化钠耐盐试验阳性，45生长。现归属于肠球菌属。C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。非B溶血链球菌的鉴别见表5-34表5-34 非B溶血链球菌的鉴定菌 名 Optochin试验 胆汁溶菌试验 胆汁七叶苷试验肺炎链球菌 + + -牛链球菌 - - +其他草绿色链球菌群

4、- - -3.5 操作步骤3.5.1 涂片染色 观察菌落特征，在血平板上挑取可以菌落，涂片染色镜检。3.5.2触酶试验 阳性参见触酶试验标准操作规程3.5.3鉴定 从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。4.药敏 参见药物敏感性试验标准操作规程及CLSI M100-S20最新版本文件.5.质量控制参见质量控制程序6.检验结果解释与分析6.1 草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分，通常不致病，只有但草绿色链球菌出现在血液中等无菌体液中时，鉴定才有意义。6.2 如果检测出链球菌对青霉素敏感，同时该菌被认为对氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林、头孢克洛、头

5、孢唑林、头孢地尼、头孢曲松、头孢吡肟、头孢布坦、头孢唑肟、头孢噻肟等头孢类敏感，则不必进行上述抗生素的药敏试验。如果检出肺炎链球菌苯唑西林抑菌圈19mm，应检测青霉素、头孢噻肟和头孢曲松的MIC浓度，可能发生青霉素耐药或中介现象。如果检出菌对红霉素敏感或耐药，则提示该菌对克拉霉素、阿奇霉素、地红霉素敏感或耐药。近年来青霉素耐药肺炎链球菌（PRSP）及多重耐药（MDRSP）菌株的增加，给临床治疗带来一定的困难。7.临床意义A群链球菌（化脓性链球菌）临床上常引起痈、蜂窝织炎、急性咽炎、丹毒、脓疱疮、猩红热、医源性伤口感染和产后感染等。此外，A群链球菌感染后也可发生急性风湿热和急性肾小球肾炎等严重变

6、态反应性并发症。无乳链球菌正常寄居于妇女阴道和人体肠道，带菌率可达30%左右，此菌可引起新生儿感染。肺炎链球菌存在正常人群的口腔、鼻咽部、属正常菌群，可引起大叶性肺炎或支气管炎。草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分，通常不致病，只有但草绿色链球菌出现在血液中等无菌体液中时，鉴定才有意义。8. 鉴定流程 触酶试验-菌落观察：灰暗色、扁平、干燥，溶血或不溶血涂片染色：G+球菌，单个、成双或短链排列溶血溶血溶血其他链球菌+CAMP-+Optochin试验-+胆汁溶菌试验-无乳链球菌肺炎链球菌杆菌肽敏感PYR阳性血清学分型牛链球菌及其他化脓链球菌 参考文献1 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL23；2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南.20082 周庭银编著. 临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20073 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，20064 MurrayPR.Manual O/F Clinical Mircrobilogy.9th ed.Washington:ASM Press,20075 ISO 15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则.2007编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人：