血清总胆汁酸TBA测定.doc

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1、血清总胆汁酸TBA测定1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。2 实验原理 胆汁酸被3-羟甾醇脱氢酶（3-HSD）以及-硫代烟酰尿嘧啶二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性氧化，生成3-酮类固醇以及-硫代烟酰尿嘧啶二核苷酸还原型（Thio-NADH）。此外，生成的3-酮类固醇在3-羟甾醇脱氢酶及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）存在下，生成胆汁酸及氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）。在上述循环酶反应过程中，还原型-硫代烟酰尿嘧啶二核苷酸（Thio-NADH）的生成量与样本中被放大的微量胆汁酸浓度成正比。通过在405nm处测定固定时间内吸光度的变化值，即可测

2、得样本中总胆汁酸的浓度。3 标本：3.1 病人准备：标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会升高，应注意采血时间。3.2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。应使用新鲜标本。标本需避光保存。3.3 标本存放 4保存可稳定7天，-20保存可稳定3个月。3.4 标本运输 常温条件下避光保存运输。3.5 标本拒收标准 细菌污染的标本。4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司TBA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1） -硫代烟酰尿嘧啶二核苷酸（氧化型） 952.9mg/L Good，s缓冲液 试剂2（R2）

3、 -还原型辅酶I 6.1g/L 3-羟甾醇脱氢酶 12500U/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。4.1.3 试剂稳定性与贮存：在28避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。 试剂启用后，在210避光的条件下可稳定30天。4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.1.5 注意事项：不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的TBA校准品对自动分析仪进行校准。4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。5 仪器 AU2700

4、生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。7 质量控制 在每一

5、批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。8 计算方法 以TBA复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mol/L报告。9 参考值范围 成年人： 10mol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。我室的参考范围:0-10mol/L10 临床意义 当患有肝脏疾病和胆酸吸收受阻时，进入血中的胆酸增加。在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌疾病时，总胆汁酸都有不同程度的升高。另外，总胆汁酸升高还见于胆汁淤积、胆管阻塞、胆囊炎等慢

6、性疾病。11 操作性能11.1试剂空白吸光度：0.60A。 11.2线性范围：200mol/L10%，线性相关系数（r）0.990。 11.3准确度：用相对偏差（RE%）表示测定结果的不准确度，相对偏差（RE%）10%。 11.4精密度：(1)批内精密度：变异系数（CV%）5%；(2)批间精密度：相对极差（%）10%。 12 超出范围结果处理 本法的检测范围为1200mol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1:4稀释，重新测定，结果乘以5。13 病危报警值的处理 无警告/危急值14 方法局限性14.1测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的控制

7、。 14.2鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、胆酸钠、乳酸脱氢酶等可使测定结果产生假性增高。 14.3胆固醇测定试剂与脂肪酶测定试剂可对测定结果产生干扰，测定过程中应分开。 14.4胆红素浓度20mg/dL、血红蛋白浓度5g/L、抗坏血酸浓度50mg/dL、血脂浓度1500mg/dL，对测定无影响。 15 补救措施 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。16 参考文献16.1叶应妩，王毓山，申子瑜主编全国临床检验操作规程中华人民共和国卫生部医政司编(第四版)16.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版16.3府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版16.4试剂说明书