血清乙型肝炎病毒表面抗原检测作业指导书.doc

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1、血清乙型肝炎病毒表面抗原检测作业指导书（ELISA）1. 原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗（HBsAg）。2. 标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。3. 标本储存：2-8保存不应超过1周，-20不应超过3个月，-70长期保存，应避免反复冻融。4. 标本运输：密封，室温运输。5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6. 试剂6

2、.1 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。6.5 试剂储存条件及有效期：2-8避光保存，有效期9个月。7. 仪器设备7.1 仪器名称：自动酶标仪7.2 仪器厂家：KHB7.3 仪器型号：ST3608. 操作步骤8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（

3、如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50ml于相应孔中。8.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ml，轻拍混匀。8.6 温育：置37温育60分钟，室温平衡5分钟。8.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。8.8 显色：每孔加入底物A、B各50ml，轻拍混匀，置37暗处15分钟。8.9 终止：每孔加终止液50ml，混匀。8.10测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需

4、设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。9. 结果判断与分析9.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD值N2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。9.2 结果判定：样品OD值S/C.O=1者为HBsAg阳性样品OD值S/C.O1者为HBsAg阴性10. 质量控制每次试验用含2ng/mlHBsAg的质控血清同步检测，以S/CO值绘制质控图，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11. 参考范围：阴性12. 临床意义：在血清中HBsAg的存在表明有急性乙肝

5、或慢性乙肝或为无症状携带者。13. 操作性能：灵敏度为ng/ml，特异性高。14. 方法局限性14.1. 对于病毒复制较强的病人，病毒量较大，出现HOOK现象，造成假阴性，须将病人血清进行稀释后再重新试验。14.2. 如出现跳孔现象可能造成假阳性。14.3. 样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。15. 注意事项15.1. 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。15.2. 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。15.3. 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去12滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿

6、将试剂滴在孔壁上。15.4. 所有样品都应按传染源处理。15.5. 封口膜使用说明15.5.1. 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。15.5.2. 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。15.6. 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）410-412页。18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。