免疫球蛋白IgM测定.doc

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1、免疫球蛋白IgM测定1检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。2原理 免疫透射比浊法 抗免疫球蛋白M抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。3标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.3 8h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置150C200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4 试剂4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgM试剂盒,国械注进201424

2、05056YZB/GER 5724-2014）4.1.1 试剂组成 R1:TRIS 缓冲液：20 mmol/l，pH 8.0；氯化钠：200 mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。 R2:抗人免疫球蛋白M抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20 mmol/l；氯化钠：150 mmol/L；防腐剂4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8C下保存期限：见试剂标签上的有效期。 机上稳定期：90天。4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgM校准品对自动分析仪进行校准4.3 质控品：使

3、用正常值、病理值复合控制品。5 仪器 AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TB

4、A-120生化分析仪操作规程。7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。8 计算方法 以IgM复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以g/l报告。9 参考值成人0.4-2.3 g/L(40-230 mg/dL；0.4-2.4 umol/L)儿童及青少年0-1岁0.00-1.45 g/L(0-145 mg/dL；0.00-1.49 umol/L)1-3岁0.19-1.46 g/L(19-146 mg/dL；0.19-1.50 umol/L)4-6岁0.24-2.

5、10 g/L(24-210 mg/dL；0.25-2.16 umol/L)7-9岁0.31-2.08 g/L(31-208 mg/dL；0.32-2.14 umol/L)10-11岁0.31-1.79 g/L(31-179 mg/dL；0.32-1.84umol/L)12-13岁0.35-2.39 g/L(35-239 mg/dL；0.36-2.46 umol/L)14-15岁0.15-1.88 g/L(15-188 mg/dL；0.15-1.94 umol/L)16-19岁0.23-2.59 g/L(23-259 mg/dL；0.24-2.67 umol/L) 我室的参考范围:0.35-2.

6、6 g/l10 临床意义:正常的IgM由10个重链和10 个或轻链组成，IgM分子中的或轻链总是相等的。还有1个J 链将所有的链连接在一起，简言之，IgM与IgG相比，是五聚体的结构。IgM的相对分子量为900000，在免疫球蛋白中最大，但其只占血浆免疫球蛋白的6。 在感染后，IgM是最早出现的特异性抗体，能激活补体系统协助杀灭细菌。但是和IgG 相比，在感染控制后IgM水平就会较快地下降。临床上比较IgG及IgM的滴度来鉴别急性与慢性感染。如以IgM为主，感染是急性的；以IgG为主，感染为慢性的（如：风疹、病毒性肝炎）。 多克隆IgM水平升高见于病毒、细菌、和寄生虫感染，肝病，类风湿性关节炎

7、，硬皮病，胆囊纤维化，和海洛因吸毒等。单克隆IgM水平升高见于Waldenstrom 巨球蛋白血症。IgM流失增加见于肠道病和烧伤的蛋白流失。IgM的合成减低见于获得性及先天性免疫缺陷综合征。11 操作性能11.1 线性范围：0.25-6.5 g/l11.2精密度 采用内部协议重复检测人样本和质控品（n=21），结果如下： 标准应用（IGM-2）样本批内精密度批间精密度均值变异系数%均值变异系数%g/Lumol/Lg/Lumol/L低值质控0.750.771.811.091.122.00高值质控1.241.281.312.562.642.08人血清 5.405.560.815.265.421.

8、54 敏感应用（IGMP2）样本批内精密度批间精密度均值变异系数%均值变异系数%g/Lumol/Lg/Lumol/L高值质控0.0340.0353.850.0340.0351.99低值质控0.7610.7840.510.7460.7680.49人血清 1.3831.4240.501.3971.4390.3412 超出范围结果处理 本法线性上限为6.5 g/l。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9氯化钠溶液作1：4稀释，重新测定，结果乘以5。13 病危报警值的处理 无警告/危急值14 方法局限性14.1准则：回收率在初始值10%的范围内。14.2标准应用（IGM-2） 14.2.1黄疸：I指

9、数达到60（近似结合和非结合胆红素的浓度为60 mg/dL 或1026 mol/L）时，未出现明显干扰。14.2.2溶血：H指数达到1000（近似血红蛋白浓度为：621 umol/L（1000 mg/dL）时未出现明显干扰。14.2.3脂血（脂肪乳剂Intralipid）：L 指数达到3000时未出现明显干扰。L指数（相当于浊度）和甘油三酯浓度之间的相关性较差。14.2.4多克隆样本中由于抗原过剩可能造成错误的低值在浓度达到230 g/L（23000 mg/dL；236.9 umol/L）时。14.2.5免疫球蛋白A,G,M之间没有交叉反应。14.3敏感应用（IGMP2）：14.3.1黄疸：I

10、指数达到60（近似结合和非结合胆红素的浓度为60 mg/dL 或1026 mol/L）时，未出现明显干扰。14.3.2溶血：H指数达到1000（近似血红蛋白浓度为：621 umol/L（1000 mg/dL）时未出现明显干扰。14.3.3 脂血（脂肪乳剂Intralipid）：L 指数达到3000时未出现明显干扰。L指数（相当于浊度）和甘油三酯浓度之间的相关性较差。14.3.4多克隆样本中由于抗原过剩可能造成错误的低值在浓度达到30 g/L（3000 mg/dL；187.5 umol/L）时。14.3.5免疫球蛋白A,G,M之间没有交叉反应。14.3.6联合其他比浊方法测定时，由于个体样本特性的差异（可使用电泳评估），本测试尚不能为单克隆-球蛋白病病人提供准确结果。15 补救措施 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。16 参考文献：16.1叶应妩，王毓山，申子瑜主编全国临床检验操作规程中华人民共和国卫生部医政司编(第四版)16.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版16.3府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版16.4试剂说明书