乙型肝炎病毒e抗体定量测定作业指导书.doc

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1、乙型肝炎病毒e抗体定量测定作业指导书1、 目的：规范乙型肝炎病毒e抗体测定的标准操作程序，确保乙型肝炎病毒e抗体 测定的结果准确有效。2、 适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒 e抗体。三、临床意义 乙型肝炎病毒（HBV）属嗜肝DNA病毒科, 具有明显的种属及嗜肝特性 （尽管其亦可感染肝以外的组织、器官或细胞，如脾、睾丸、人外周血单个 核细胞等），可致持续性病毒感染。HBV的感染导致血浆中出现特异性的乙 肝病毒e抗体及其它一系列特异性的血清学标志物。e抗体是乙型肝炎病毒 e抗体的简称（抗-HBe），它是由e抗原刺激人体免疫系统产生出来的特异 性

2、抗体，这种特异的e抗体能够和e抗原结合。四、方法原理 本产品采用竞争法原理进行检测。用e抗体和e抗原包被磁微粒，用辣 根过氧化物酶标记e抗体制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体-抗原-酶标抗 体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与e抗体的含量成反 比。五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样 本，离心前样本应37孵育至少1h；对于使用促凝管采血的样本，离心 前样本应37孵育至少0.5h，离心条件10000g/min，10min；对于使用 抗凝管采血的样本，离心条件10000g/min，10min。抗凝管推荐使用肝 素钠作为抗凝剂，避免

3、使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样 本未变质方可使用。 5.3. 溶血或脂血的样本不能用于测定。5.4. 样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样 本放置在28的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于 -20以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。六、标本拒收标准 1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明 七、仪器与材料 7.1.仪器：适用于AutoLumo A2000化学发光检测仪。 7.2.试剂：AutoLumo A2000专用乙型肝炎病毒e抗体试剂 7.2.1.试剂准备：本试剂为即用型

4、试剂，可以直接放在仪器上。 7.2.2.试剂盒于28储存，有效期12个月。 7.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。 7.2.4.试剂盒开启使用后，28保存可使用1个月。 7.2.5.试剂盒可适应1周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，避免重压，防止雨雪淋湿和阳光曝晒。 7.2.6.试剂机载稳定性 7.2.6.1. 试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物）竖直向上存放， 在2 10C环境下冷藏保存2小时后，才可上机使 用。首次使用后，机载或在2 10C 环境下稳定期 为28天。 7.2.6.2.阴阳性对照开瓶后保存于28C，稳定期可维持1个 月；若需使用更长时间，应根据需要进行分装，于 -20冻存（

5、可以保存2个月），但应避免反复冻融。 7.2.6.3.试剂在2 8C保存可稳定至标签上所标示的有效 期。 7.3.质控液：推荐使用安图配套质控品或第三方质控品BioRAD QC八、检验方法 8.1.消耗品检查： 8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。 8.1.2.参考相应的仪器系统操作说明。 8.2.试剂包装载： 8.2.1.试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成 份，避免产生气泡。不要倒转已经打开的试剂包。 8.2.2.仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。 8.2.3. 如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。 8.2.4.参考相应的仪器系统操

6、作说明。 8.3.测试： 8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为50l。 8.3.2.装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。 8.3.3.选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。 8.3.4.参考相应的仪器系统操作说明。 8.4.定Cutoff值 8.4.1.仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。 8.4.2.如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。 8.4.3.将阴阳性对照转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。 8.4.4.装载样本架，在仪器软件界面中输入Cutoff值信息。 8.4.5. 选择“运行”开始测试，生成Cutoff值。 8.4.6.

7、Cutoff值有效期为28天。 8.4.7.参考相应的仪器系统操作说明。 8.4.8.出现以下情况需要重新生成Cutoff值： 8.4.8.1.质控结果经重复测定后仍然超出范围； 8.4.8.2.试剂盒或发光底物液的批号更改； 8.4.8.3.超出Cutoff值有效期限； 8.4.8.4. 仪器重要部件更换或维修。 8.5.质控： 8.5.1.使用至少两个分析物水平的质控品进行质控。 8.5.2. 出现以下情况需要进行质控： 8.5.2.1.测试试剂盒使用超过24小时； 8.5.2.2.更换新的试剂盒； 8.5.2.3.重新生成Cutoff值； 8.5.2.4停机。 8.5.3.各实验室需根据

8、自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确 保合适的测试性能。 8.5.4.质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。 8.6.结果计算： Cutoff值=阴性对照平均发光值*0.4 有效性判断： 8.6.1. 阴性对照孔平均发光值/阳性对照孔平均发光值大于3； 8.6.2.阴性对照各孔相对发光强度CV%不超过10%（如CV%超过 10%，则删除不平行点直到CV%小于10%或重新实验）。九、参考范围 S/CO=待测样本发光值/ Cutoff值； 当S/CO1.00时，结果判为阴性；S/CO1.00时，结果判为阳性。10、 检验结果的解释 10.1.用本试剂盒检测结果COI为0.80

9、1.20的弱反应性可疑样本，建议复 孔重新测定，如果双孔复查COI均大于1.00，结果判为阴性，如果单 孔或复孔测定不大于1.00，结果判为阳性，同时建议动态观察。 10.2.由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本 进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果不应 直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实验室在检测报告中注 明所用试剂特征。系列监测中，如果改变试剂类型，则应进行额外的连 续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值。十一、检验方法的局限性 11.1.本试剂盒仅作为诊断的辅助手段之一，临床诊断应与临床检查、病史 及其他检测相结合。

10、 11.2.样本中的异嗜性抗体或类风湿因子会干扰检测结果。此类样本不适 合用本试剂盒进行检测。 11.3.溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。 十二、产品性能特征 12.1. 符合率：与SFDA批准的试剂平行检测1024份临床样本，阴性符合率 98.98%，阳性符合率98.8%，总符合率98.93%。 12.2. 最低检出限：检定系列国家最低检出限参考品或经国家参考品标化的企 业最低检出限参考品，结果符合相应参考品的要求。 12.3. 精密性：10孔平行检测0.5 PEI U/ml样本，CV%10.0%；10孔平行 检测5 PEI U/ml样本，CV%20.0%。 12.4. 分

11、析特异性：与抗-HIV（1+2）、抗-HCV、抗-HAV等病毒性抗体无交 叉反应。1.25mg/ml血红蛋白、200mg/L胆红素、20g/L甘油三酯和 500mg/dl胆固醇对检测结果无干扰。 十三、参考文献 1.Lok ASE, McMahon BJ. AASLD practice guidelines：chronic hepatitis B. Hepatology, 2004, 34: 1225-1241. 2.Lavanchy D. Hepatitis B virus epidemiology, disease burden, treatment, and current and emerging prevention and control measures. J Viral Hepat, 2004, 11: 97-107. 3.巴德年,1998年.当代免疫学技术与应用.北京医科大学中国协和医科大学联 合出版社. 4.陶义训, 1997年第二版,免疫学与免疫学检验.人民卫生出版社. 5.中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会. 病毒性肝炎防治方案. 中华传染病杂志, 2001, 19:56-62.