丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书.doc

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1、丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书1、 目的：规范丙型肝炎病毒IgG抗体测定的标准操作程序，确保丙型肝炎病毒IgG 抗体测定的结果准确有效。2、 适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的丙型肝炎病毒 IgG抗体。三、临床意义 丙型肝炎是一种广泛流行的病毒性疾病，据 WHO调查，全世界估计有1.7 亿人感染丙型肝炎病毒 (HCV)，在不同的国家慢性丙型肝炎病毒感染的流行 病学统计是在 0.520，我国一般人群抗 HCV阳性率为3.2。而急性 丙型肝炎绝大多数都会形成有慢性感染的过程，慢性丙型肝炎病毒感染是肝 硬化和肝癌的主要原因之一1,2。 丙型肝炎的诊断

2、有赖于 HCV抗体的血清学检定及病毒学检测。HCV抗体 阳性代表机体对病毒感染的应答，一般在感染 12月后出现抗体，急性和 慢性丙型肝炎的区别在于 HCV核心 IgG量的差异，慢性病人的 IgG抗体水 平比急性的要高些，并且通常有更长的免疫活性。通过自然恢复或经治疗清 除病毒的急性丙型肝炎患者，IgG会在几年之后消失或低于检测下限而无法 检出3。临床上也应注意到一些血液透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病 患者可出现抗-HCV假阳性，可以采用抗-HCV RIBA或HCV RNA检测确认，有 助于确诊这些患者是否合并感染HCV。四、方法原理 本试剂盒采用间接法原理进行检测。以HCV抗原包被磁微粒，

3、辣根过氧 化物酶标记的抗人IgG制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原抗体酶标 记抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HCV IgG抗体 的含量成正比。五、标本的采集与处理 5. 1. 采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。 5.2. 样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。 5.3. 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。 5.4. 样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本 放置在28的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20以下， 避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。六、标

4、本拒收标准 1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明 七、仪器与材料 7.1.仪器： 适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。 7.2.试剂：AutoLumo A2000专用丙型肝炎病毒IgG抗体试剂 7.2.1.试剂准备：本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。 7.2.2.试剂盒于28储存，有效期12个月。 7.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。 7.2.4.试剂盒开启使用后，28保存可使用1个月。 7.2.5.试剂盒可适应1周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，避免重压，防止雨雪淋湿和阳光曝晒。 7.2.6.试剂机载稳定性 7.2.6.1.试剂包（磁微粒混悬

5、液、酶结合物、样品稀释液）竖直向上存放，在210环境下冷藏保存2小时后，才可上机使用。首次使用后，机载或在210环境下稳定期为28天。 7.2.6.2.校准品开瓶后保存于28，稳定期可维持1个月；若需使用更长 时间，应根据需要进行分装，于-20冻存（可以保存2个月），但应避免反复冻融。 7.2.6.3.试剂在28保存可稳定至标签上所标示的有效期。 7.3.质控液：推荐使用安图配套质控品或第三方质控品BioRAD QC八、检验方法 8.1.消耗品检查： 8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。 8.1.2.参考相应的仪器系统操作说明。 8.2.试剂包装载： 8.2.1.试剂包首次上机前

6、，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成分，避免产生气泡。不要倒转已经打开的试剂包。 8.2.2.仪器通过扫描试剂包条码自动获得测试所需的参数。 8.2.3.如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。 8.2.4.参考相应的仪器系统操作说明。 8.3.测试： 8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为10l。 8.3.2.装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。 8.3.3.选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。 8.3.4.参考相应的仪器系统操作说明。 8.4. 定Cutoff值 8.4.1. 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。 8.4.2.如果特殊

7、情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。 8.4.3.将阴阳性对照转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。 8.4.4. 装载样本架，在仪器软件界面中输入Cutoff值信息。 8.4.5. 选择“运行”开始测试，生成Cutoff值。 8.4.6.Cutoff值有效期为28天。 8.4.7. 参考相应的仪器系统操作说明。 8.4.8.出现以下情况需要重新生成Cutoff值： 8.4.8.1. 质控结果经重复测定后仍然超出范围； 8.4.8.2.试剂盒或发光底物液的批号更改； 8.4.8.3.超出Cutoff值有效期限； 8.4.8.4.仪器重要部件更换或维修。 8.5. 质控： 8.5.1. 使

8、用至少两个分析物水平的质控品进行质控。 8.5.2. 出现以下情况需要进行质控： 8.5.2.1.测试试剂盒使用超过24小时； 8.5.2.2. 更换新的试剂盒； 8.5.2.3.重新生成Cutoff值； 8.5.2.4.停机。 8.5.3.各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确 保合适的测试性能。 8.5.4.质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。九、参考范围9.1. Cutoff值=阳性对照孔平均发光值*0.4。仪器操作时，自动计算并保 存每批试剂的Cutoff值。 9.2. 待测样本发光值Cutoff值时，检测呈阴性反应。9.3. 待测样本发光值Cuto

9、ff值时，检测呈阳性反应，建议动态观察或用 其他方法复查。 9.4. 有效性判断：阳性对照孔平均发光值/阴性对照孔平均发光值应大于 10,否则应重新试验。十、检验结果的解释 10.1.检测为阴性的样本，提示未感染或未产生足以检测到的抗体。 10.2.阳性判断值附近的可疑样本，建议重新测定，动态观察。10.3.由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本 进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果不应 直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实验室在发给临床医生 的检测报告注明所用试剂特征。系列监测中如果改变试剂类型，则应进 行额外的连续性检测并与原有试剂结果

10、进行平行比较以重新确定基线 值。十一、检验方法的局限性 11.1. 本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床诊治的唯一依据，对 患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查、治疗 反应及流行病学等信息综合考虑。 11.2.本品用于血清或血浆样本的测定，用于其他体液样本测定的可靠性尚 未得到充分确认。 11.3.样本中的异嗜性抗体或类风湿因子可能会干扰检测结果，必须结合患 者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。 11.4.免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，如人类免疫缺陷病毒 （HIV）感染患者或器官移植后接受免疫抑制治疗的患者，其血清学抗 体检测的参考价值有限，可能会导

11、致错误的医学解释。 11.5.发生严重溶血、脂血、浑浊或被微生物严重污染的样本用于测定可能 会造成不正确的结果，避免使用此类样本。十二、产品性能特征 12.1.阴性符合率：符合中国食品药品检定研究院阴性参考品的要求； 12.2.阳性符合率：符合中国食品药品检定研究院阳性参考品的要求； 12.3.精密性：符合中国食品药品检定研究院精密性参考品的要求； 12.4.最低检出限：符合中国食品药品检定研究院灵敏度参考品的要求； 12.5.干扰物质：5mg/mL血红蛋白、0.4mg/mL胆红素和50mg/mL甘油三酯对本 试剂盒检测结果无显著影响；甲肝抗体、乙肝表面抗体、戊肝抗体、HIV、 梅毒、ANA、

12、类风湿因子、EB病毒、TOX、RV、CMV、HSV1以及HSV2抗体 阳性样本对检测结果无显著影响。 12.6.抗凝剂的影响：使用EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝剂对检测结果无显著影 响。 12.7.合率100% ，阴性符合率：99.71%，总符合率：99.81%。 十三、参考文献1. SARRAZIN C.Diagnosis of hepatitis C:update 2001J Journal of Gastroenterology and Hepatology,2004.19:S88-S93.2. 中华医学会肝病学分会、传染病与寄生虫病学分会.丙型肝炎防治指南J.中华肝脏杂志.2004.12:194-1983. NIKOLAEVA LI,BLOKHINA NP,TSURIKOVA NN,etal.Virus specific antibody titres in different phases of hepatitis C virus infectionJ. Viral Hepat,2002,9:429-437