戊型肝炎病毒IgM抗体定量测定作业指导书.doc

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1、戊型肝炎病毒IgM抗体定量测定作业指导书1. 项目中英文名称：戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒(磁微粒化学发光法) HEV IgM CLIA Microparticles2.实验原理与方法：2.1原理：采用捕获法原理进行检测。用抗人IgM抗体包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HEV抗原制备酶结合物。通过免疫反应形成固相二抗-抗体-酶标抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HEV IgM抗体的含量成正比。2.2方法：捕获法3.标本的要求： 3.1. 应用正确医用技术收集血清或血浆样本。血浆样本推荐使用EDTA、肝素、枸橼酸钠抗凝管采集。3.2. 样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果

2、，应离心除去。3.3. 严重溶血、脂血或浑浊的样本不能用于测定。3.4. 样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在28的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应离心提取血清或血浆后冻存于-20以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。4仪器： 适用于AutoLumo A2000系列发光仪。5.试剂厂家及名称：郑州安图生物工程股份有限公司6.操作步骤：6.1、消耗品检查： 根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。 参考相应的仪器系统操作说明。6.2、试剂包装载： 试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成分，避免产生气泡。不要倒转已经打开的试

3、剂包。 仪器通过扫描试剂包条码自动获取测试所需的参数。 如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。 参考相应的仪器系统操作说明。6.3、测试： 将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为10l。 装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。 选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。 参考相应的仪器系统操作说明。6.4、定Cutoff值 仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。 如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。 将阴阳性对照转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。 装载样本架，在仪器软件界面中输入Cutoff值信息。 选择“运行”开始测试，生成Cutoff值。 C

4、utoff值有效期为28天。 参考相应的仪器系统操作说明。 出现以下情况需要重新生成Cutoff值：1) 质控结果经重复测定后仍然超出范围；2) 试剂盒或发光底物液的批号更改；3) 超出Cutoff值有效期限；4) 仪器重要部件更换或维修。6.5、质控： 使用至少两个分析物水平的质控品进行质控。 出现以下情况需要进行质控：1) 测试试剂盒使用超过24小时；2) 更换新的试剂盒；3) 重新生成Cutoff值；4) 停机。 各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保合适的测试性能。 质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。6.6、稀释 使用手工稀释或仪器自动稀释功能。

5、 手工稀释使用系统通用样本稀释液进行稀释，将得到的检测结果乘以稀释倍数计算最终结果。 选择仪器自动稀释功能，可以得到准确的检测结果，参考相应的仪器系统操作说明以及帮助系统。6.7、测试步骤1）在反应容器（以下简称“孔”）中依次加入阳性对照3孔（用于定Cutoff值），阴性对照2孔，各110l/孔；其余孔中每孔分别加入100l样品稀释液和10l样本。2）每孔分别加入磁微粒混悬液20l。3）混匀后37温育15分钟。4）洗液洗涤5次。5）每孔分别加入酶结合物50l。6）混匀后37温育17分钟。7）洗液洗涤5次。8）每孔加入发光底物A和发光底物B各50l。9）混匀后15分钟检测发光强度。7.参考值7.

6、1. Cut off值=阳性对照孔平均发光值*0.15；7.2. 阳性对照孔平均发光值/阴性对照孔平均发光值大于10；7.3. 阳性对照各孔相对发光强度CV%不超过10%（如CV%超过10%，则删除不平行点直到CV%小于10%或重新实验）。7.4. S/CO=待测样本发光值/ Cutoff值；S/CO1.00时，结果判为阳性；S/CO1.00时，结果判为阴性。8检验结果的解释：8.1. 用本试剂盒检测结果为临界值附近等可疑样本，建议重新测定，动态观察。8.2. 由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果不应直接相互比

7、较，以免造成错误的医学解释，建议实验室在发检测报告中注明所用试剂特征。系列监测时，如果改变试剂类型，则应进行额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值。9. 检验方法的局限性：9.1 本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床诊治的唯一依据，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查、治疗反应及流行病学等信息综合考虑。9.2 样本中的异嗜性抗体或类风湿因子可能会干扰检测结果，必须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。9.3 严重溶血、脂血、黄疸或浑浊的样本可能会造成不正确的检测结果。9.4 感染初期，病原体特异性IgM抗体未产生或滴度很低会导致阴

8、性结果，如怀疑有病原体感染，应提示患者在714天内复查，抽取第二份样本，并和第一份样本在同条件下同时检测，以确定是否有初次感染的血清转化或病原体特异IgM滴度明显升高。9.5 高滴度病原体特异性IgG抗体会与特异性IgM抗体竞争抗原结合部位，会使检测的敏感性降低，IgM结果可能会出现假性低值或阴性结果。9.6 免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，如人类免疫缺陷病毒（HIV）感染患者或器官移植后接受免疫抑制治疗的患者，其血清学IgM抗体检测的参考价值有限，可能会导致错误的医学解释。10.注意事项：10.1. 操作前仔细阅读使用说明书，严格按照试剂盒说明书进行试验操作。10.2. 避免在恶劣的环

9、境（如含有84消毒液、次氯酸钠、酸碱或乙醛等高浓度腐蚀性气体及灰尘的环境）条件下进行试验。10.3. 加样前应保证磁微粒混悬液充分混匀，无肉眼可见沉淀。10.4. 微量移液器吸嘴不可混用，以免交叉污染。10.5. 样本中若存在沉淀物、悬浮物等可见杂质会影响试验结果，此类样本不得使用。10.6. 加入底物前，反应容器内的磁微粒必须震荡散开。10.7. 试剂盒含有潜在污染物组份，处理试剂和样本时需戴一次性手套，操作后应彻底洗手。所有样本及使用后的试剂盒应视为潜在的传染性物质，废弃处理时，按照当地政府和有关国家规定进行。10.8. 试剂需在有效期内使用。剩余试剂要及时密封，放置28条件下贮存。10.

10、9. 加入发光底物后要避光反应，强光可能影响结果测定。10.10. 使用仪器自动操作，测试样本需考虑样本容器死体积，具体参考相应的仪器系统操作说明。10.11. 本产品仅用于体外诊断。11.临床意义：戊型肝炎病毒（HEV）为单股正链RNA病毒，呈球形、直径2734nm无囊膜，核衣壳呈二十面体立体对称。潜伏期为211周，平均6周。HEV主要侵犯青壮年，65%以上发生于1619岁年龄组，儿童感染表现亚临床型较多，成人感染多表现为临床型。孕妇感染HEV病情较重，易发生肝功能衰竭，尤其妊娠晚期病死率高，可见流产与死胎，其原因可能与血清免疫球蛋白水平低下有关。HBsAg阳性者重叠感染HEV，病情加重，易发展为急性重型肝炎。戊型肝炎病毒的抗体分为IgM、IgA和IgG。三种抗体出现和消失的次序依次为IgM、IgA、IgG；IgM在感染早期即可检出，在临床症状刚出现时，IgM即开始升高，第二周达高峰，12个月后滴度明显下降。HEV IgM的出现与临床症状及生化指标异常的时间相一致，是感染早期较好的检测指标1；抗HEV-IgM阳性或抗HEV-IgG由阴转阳，或滴度4倍以上升高是急性戊型病毒性肝炎的血清学检测诊断标准2