梅毒螺旋体抗体定量测定作业指导书.doc

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1、梅毒螺旋体抗体定量测定作业指导书1、 目的：规范梅毒螺旋体抗体测定的标准操作程序，确保梅毒螺旋体抗体测定的结果准确 有效。二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的梅毒螺旋体抗体。三、临床意义 梅毒是梅毒螺旋体（Treponema pallidum，TP）引起的一种性传播疾病1，人是梅毒螺旋体的唯一宿主。梅毒具有较强的传染性和慢性复杂的病理，它几乎可以引起全身所有系统的组织和脏器的损害及病变2，导致功能失常，组织破坏，乃至死亡。2009年，梅毒报告病例数在我国甲乙类传染病报告中居第三位3，其病程漫长，危害严重，早期侵犯生殖器和皮肤，晚期侵犯全身各器官，尤其是

2、心血管和中枢神经系统4。TP不仅严重损害成人身体的健康，同时还可由母体经胎盘垂直传播给胎儿，侵犯胎儿肝、脾、肾上腺、牙齿、骨骼、眼及脑神经等全身器官系统，引起早产、流产、死胎、畸胎、或胎传梅毒儿（又称先天性梅毒）4，严重影响出生人口质量。梅毒螺旋体抗体是梅毒感染人体后由免疫系统产生的特异性抗体，是梅毒感染的特异性指标。四、方法原理 本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。用TP抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记TP抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原-抗体-抗原-酶复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与TP抗体的含量成正比。五、标本的采集与处理 5. 1.采用正确医用技术收集血清样本（

3、详见标准血液标本前处理流程）。 5.2.样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。 5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。 5.4.样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在28的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。六、标本拒收标准 1）严重溶血、脂血 2）标本标识不明 七、仪器与材料 7.1.仪器：适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。 7.2.试剂：AutoLumo A2000专用梅毒螺旋体抗体试剂 7.2.1.试剂准备

4、：本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。 7.2.2.试剂盒于28储存，有效期12个月。 7.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。 7.2.4.试剂盒开启使用后，28保存可使用1个月。 7.2.5.试剂盒可适应1周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，避免重压，防止雨雪淋湿和阳光曝晒。 7.2.6.试剂机载稳定性 7.2.6.1.试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物、样品稀释液）竖直向上存放，在210环境下冷藏保存2小时后，才可上机使用。首次使用后，机载或在210环境下稳定期为28天。 7.2.6.2.校准品开瓶后保存于28，稳定期可维持1个月；若需使用更长 时间，应根据需要进行分装，于-20冻存

5、（可以保存2个月），但应避免反复冻融。 7.2.6.3.试剂在28保存可稳定至标签上所标示的有效期。 7.3.质控液：推荐使用安图配套质控品或第三方质控品BioRAD QC八、检验方法 8.1.消耗品检查： 8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。 8.1.2.参考相应的仪器系统操作说明。 8.2.试剂包装载： 8.2.1.试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成分，避免产生气泡。不要倒转已经打开的试剂包。 8.2.2.仪器通过扫描试剂包条码自动获得测试所需的参数。 8.2.3.如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。 8.2.4.参考相应的仪器系统操作说明。

6、 8.3.测试： 8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为50l。 8.3.2.装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。 8.3.3.选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。 8.3.4.参考相应的仪器系统操作说明。 8.4.定Cutoff值： 8.4.1.仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。 8.4.2.如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。 8.4.3.将阴阳性对照转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。 8.4.4.装载样本架，在仪器软件界面中输入Cutoff值信息。 8.4.5.选择“运行”开始测试，生成Cutoff值。 8.4.6.Cuto

7、ff值有效期为28天。 8.4.7.参考相应的仪器系统操作说明。 8.4.8.出现以下情况需要重新生成Cutoff值： 8.4.8.1.质控结果经重复测定后仍然超出范围； 8.4.8.2. 试剂盒或发光底物液的批号更改； 8.4.8.3.超出Cutoff值有效期限； 8.4.8.4.仪器重要部件更换或维修。 8.5.质控： 8.5.1.使用包含至少两个分析物水平的质控品进行质控。 8.5.2.出现以下情况需要进行质控： 8.5.2.1.测试试剂盒使用超过24小时； 8.5.2.2.更换新的试剂盒； 8.5.2.3.重新生成Cutoff值； 8.5.2.4.停机。 8.5.3.各实验室需根据自身

8、情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保合适的测试性能。 8.5.4.质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。九、参考范围9.1. Cutoff值=阳性对照孔平均发光值*0.2。仪器操作时，自动计算并保存每批试剂的 Cutoff值。 9.2. 待测样本发光值Cutoff值时，检测呈阴性反应。 9.3. 待测样本发光值Cutoff值时，检测呈阳性反应。 9.4. 有效性判断：阳性对照孔平均发光值/阴性性对照孔平均发光值应大于20,否则应重 新试十、检验结果的解释 10.1.检测为阴性的样本，提示未感染或未产生足够可以检测到的抗体。 10.2.参考值附近的可疑样本，建议重新测定、动态

9、观察或用其它方法进行检测。10.3.由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测 可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果不应直接相互比较，以 免造成错误的医学解释，建议实验室在发给临床医生的检测报告注明所用试剂特 征。系列监测中如果改变试剂类型，则应进行额外的连续性检测并与原有试剂结 果进行平行比较以重新确定基线值。十一、检验方法的局限性 11.1.本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床诊治的唯一依据，对患者的临床 管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查、治疗反应及流行病学等信息 综合考虑。 11.2.严重溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的结

10、果。 11.3.免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，如人类免疫缺陷病毒（HIV）感染 患者或器官移植 后接受免疫抑制治疗的患者，其血清学抗体检测的参考价值 有限，可能会导致错误的医学解释。 十二、产品性能特征 12.1.阴性符合率：符合中国食品药品检定研究院阴性参考品的要求； 12.2.阳性符合率：符合中国食品药品检定研究院阳性参考品的要求； 12.3.精密性：符合中国食品药品检定研究院精密性参考品的要求； 12.4.最低检出限：符合中国食品药品检定研究院最低检出限参考品的要求； 12.5.干扰物质：500mg/dl血红蛋白、20mg/dl胆红素和3g/dl甘油三酯对本试剂盒检测 结果无显著

11、影响；HAV IgG抗体、HBsAb、HCV IgG抗体、HEV IgG抗体、HIV 抗体、ANA、类风湿因子、EB病毒IgG抗体、TORCH IgG抗体、TORCH IgM抗 体阳性样本对检测结果无显著影响； 12.6.抗凝剂的影响：使用EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝剂对检测结果无显著影响； 12.7.方法学对比：与SFDA批准上市的试剂盒对比检测1020份临床样本，阳性符合率 为99.72%，阴性符合率为99.55%，总体符合率：99.61%。 十三、参考文献1. Antonella Marangoni，Alessandra Moroni, SilviaAccardo,et al.Laboratory Diagnosis of Syphilis With Automated ImmunoassaysJ. Journal of Clinical Laboratory Analysis,2009,23:1-62. 龙振华.血清学与临床.中华内科杂志，1994,33(7):438-439.3. 中华人民共和国卫生部.中国预防与控制梅毒规划(2010-2020年)M.20104. 严加林.梅毒螺旋体Gpd重组蛋白的表达、纯化及免疫活性研究D.衡阳:南华大学,2006.