生化分析仪检测原理ppt课件.ppt
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1、临床生化检验反应原理及报告审核检验科检验科 黄小虎黄小虎我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物全自动生化分析仪全自动生化分析仪我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物生化分析仪特点优点亮点亮点自动化机械化的仪器设备模仿 代替手工操作提高了工作效率 减少了主观误差灵敏 准确 快速 标准化我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里
2、边有一个活的生物生化分析仪分类1按结构原理分管道连续流动式分立式常用离心式干片式急诊常用2按测定速度分小型中型大型超大型(模块式)3按自动化程度分半自动全自动我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物2004 生化分析仪主要构成生化分析仪主要构成加样系统供排水系统构成比色系统光源 比色杯 单色器 检测器数据处理系统样品转盘 试剂仓 取样装置我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物基本原理临床生化分析仪最常使
3、用的是分光光度法分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法。 我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物组成我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物光吸收曲线溶液对不同波长光的吸收程度,通常用光吸收曲线来描述。溶液对不同波长光的吸收程度,通常用光吸收曲线来描述。 在分光光度法中, 以吸光度为纵坐标, 以波长为横坐标作图可得光吸收曲线。 浓度不同的同种
4、溶液, 在该种曲线中其最大吸收波长相同,相应的吸光度大小则不同,同一波长下摩尔吸数相同。我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物Lambert-Beer(朗伯-比尔)定律当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时,样品对光的吸光度与样品的浓度及厚度成正比 A=kcbA-吸光度 k-吸光系数 c-溶液浓度 b-液层厚度我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物吸光系数定义:吸光物质在单位浓度及单位厚度时测得的吸光
5、度。K值的大小取决于吸光物质的性质、入射光波长、溶液温度和溶剂性质等,与溶液浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因溶液浓度所采用的单位的不同而异。 我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物讨 论:1.Lamber-Beer定律的适用条件(前提):入射光为单色光溶液是均匀,无散射溶液2.该定律适用于固体、液体和气体样品3.在同一波长下,各组分吸光度具有加和性,如果 溶液中同时存在两种或两种以上的吸光性物质 ,则测得的该溶液的吸光度等于溶液中各吸光性 物质吸光度的总和,即: A(a+b+c)AaAbAc应
6、用:多组分测定我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物定量分析方法(1) 标准曲线法 (2) 标准溶液对比法(3) 吸光系数法我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物标准曲线法最经典方法前提:固定仪器和固定条件 A= K*BC 过程:配置标准溶液系列 分别测定 A 得CA曲线 样品 测定A样 查得C样我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜
7、测没有错:表里边有一个活的生物标准溶液对比法在相同的条件下,配制浓度为cs的标准溶液和浓度为cx的样品溶液,在最大吸收波长处,分别测定二者的吸光度值为As、Ax ,依据朗伯-比尔定律得: As=Kbcs Ax=Kbcx 则: cx = cs*Ax /AssCiCCX我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物吸光系数法吸光系数法又称绝对法,是直接利用朗伯-比尔定律的数学表达式AKbc进行计算的定量分析方法。在手册中查出待测物质在最大吸收波长 处的吸光系数 或 ,并在相同条件下测量样品溶液的吸光度A,则其
8、浓度为: AcLLEA%1cm1max%1cm1E或我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物检测方法1.终点法 2.固定时间法3.连续监测法 我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物 终点法 终点分析法是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小,对物质进行定量的一类分析方法。反应混合物进行一定时间反应后,达到平衡终点,即在显色反应处于稳定阶段时,监测其颜色对光的吸收强度,以此计算待测
9、物浓度。终点时间的确认:一、根据时间-吸光度曲线 如:Trinder(偶联终点比色法)反应测尿酸,反应曲线上3-5分钟时其A趋向稳定,故可将5分钟作为反应终点。二、根据被测物反应终点,结合干扰物的反应情况来确定 如:溴甲酚绿法测血清白蛋白 我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物分 类终点法: 一点终点法 二点终点法 免疫比浊法 双波长法我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物一点终点法一点终点法在时间-
10、吸光度曲线上吸光度不再改变时,选择一个时间点测定吸光度值。通常在反应终点附近连续读两个吸光度,求出两点的平均值,并根据两点的差值判断反应是否达到平衡。我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物一点终点法的设置:以R和S混合之前的空气空白、水空白或试剂空白的吸光度值为测定计算基点,以反应达到平衡的吸光度读数减去空白读数,校准曲线通过零点且成直线,对于反应速度比较快的实验多用。 多见于单试剂项目,如:总蛋白,白蛋白等。我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感
11、到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物2022-8-121Am T(时间)(时间)AS+R(吸光度)吸光度)一点终点法反应曲线 计算公式: C=(Am-Ab)*KAm-终点读数点的吸光 Ab-试剂空白吸光度 K-校正系数我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物TP反应曲线蛋白质+Cu2+Cu-蛋白质络合物 550nm处吸收峰我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物二点终点法第二试剂加入以前,选择
12、某一点读取吸光度Am,经过一定时间后反应达终点后测第二个吸光度值An,利用两吸光度之差计算结果。第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与样品的非特异性反应有关,相当于样品空白,可有效的消除样品自身的吸光度,如溶血,黄疸,脂血等的干扰。我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物AnTAR2AmS+R1(吸光度)吸光度)(时间)(时间)两点终点两点终点样本空白样本空白=S+R1S+R1+R2(体积校正因子)(体积校正因子)k0 计算公式计算公式 C=(An-KC=(An-K0 0* *Am)Am)* *K K
13、 我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物CRE反应曲线肌酐在一系列酶的作用下生成H2O2,H2O2和4-氨基氨替比林反应生成红色醌类物质,在540nm处有吸收峰。我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物Mg反应曲线在碱性溶液中,Mg与二甲苯胺蓝形成重氮盐类的紫色复合物,Mg2+浓度可由二甲苯胺蓝吸光度的下降,通过光度测定法来测定。我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里
14、呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物免疫比浊法 通过物质对光的散射或透射来测定物质含量的 方法: 散射比浊:特定蛋白分析仪 透射比浊:自动生化分析仪 通常作两点终点法分析,多采用多点校准。 应用:用Ab测定Ag(主要为微量蛋白:IG、 C、APOA1/B、ASO、RF、CRP等),要求Ab过量,此时Ag-Ab复合物的生成量随Ag的增加而递增,光散/透射强度与抗原量成正比。我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物免疫比浊法优点: 方法简便 结果准确 可用于自动化仪器检测缺点:
15、抗体用量大 达平衡时间长我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物双波长法 消除样品中对测定有干扰的物质的影响; 在试样中含有两个组分a和b时,若要测定组分b,组分a有干扰,应设法消除组分a的吸收干扰。首先选择待测组分b的最大吸收波长1作为测量波长,然后用作图的方法选择参比波长2 ,使组分a在这两个波长处的吸光度相等。 试样溶液在2和1两个波长处的吸光度之差,只与待测组分的浓度成正比,而与干扰组分的浓度无关我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,
16、证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物干扰物质1.脂血:吸收光谱300-600nm呈下降趋势2.Hb:350nm、400nm、540nm、580nm 吸收峰3.胆红素:300-500nm有吸收峰 可见它们的吸收峰都较宽,且同测定波长有重叠现象。我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生物双波长法双波长测定优点 : 消除噪音干扰 减少杂散光影响 减少样品本身光吸收的干扰 我吓了一跳,蝎子是多么丑恶和恐怖的东西,为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢?但是我也感到愉快,证实我的猜测没有错:表里边有一个活的生
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