食品中细菌总数的测定ppt课件.ppt

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1、三、实验方法三、实验方法1、检验程序、检验程序菌落总数检验程序菌落总数检验程序：检样检样做成几个适当倍数的稀释液做成几个适当倍数的稀释液选择选择2-32-3个适宜稀释度个适宜稀释度各以各以1ml1ml之量分别入灭菌平皿内之量分别入灭菌平皿内每皿内加入每皿内加入46460 0C C适量营养适量营养琼脂琼脂菌落数菌落数报告报告2、检样稀释及培养检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样）以无菌操作，将检样25g（或（或25ml）剪碎以后，放）剪碎以后，放于含有于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充（瓶

2、内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min100000r/min的速度处理的速度处理1min，做成，做成1：10的的均匀稀释液。均匀稀释液。（2）用）用1ml灭菌吸管吸取灭菌吸管吸取1：10稀释液稀释液1ml，沿管壁徐徐，沿管壁徐徐注入含有注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混

3、合均匀，做成匀，做成1：100的稀释液。的稀释液。（3）另取）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支支1ml灭菌吸管。灭菌吸管。（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择选择23个适宜稀释度，分别在作个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。个稀释度作两个平皿。（5）稀释液移入平皿后，应

4、及时将凉至）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培营养琼脂培养基养基可放置在（可放置在（461）0C）水浴锅内保温）水浴锅内保温注入平皿注入平皿15ml20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（）等琼脂凝固后，翻转平板，置（361）0C恒温箱恒温箱内培养（内培养（482）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得即得1g（1mL）样品所含菌落总数。）样品所含菌

5、落总数。 3、菌落计算方法、菌落计算方法（1）菌落计数方法）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。度的各平板平均菌落总数。（2）菌落计数的报告）菌落计数的报告平板菌落数的选择平板菌落数的选择 选取菌落数在选取菌落数在3030300300之间的平板作为菌落总数测定标之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较

6、大片状菌落生长时，则不宜采用，而应其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘即可计算半个平板后乘2 2以代表全皿菌落数。平皿内如有链以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作

7、为一个菌落计。条链作为一个菌落计。 稀释度的选择稀释度的选择 应选择平均菌落数在应选择平均菌落数在3030300300之间的稀释度，乘以稀之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在3030300300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于或等于2 2，应报告其平均数；若大于，应报告其平均数；若大于2 2则报告其中较小的数则报告其中较小的数字。字。 若所有稀释度平均菌落数均大于若所有稀释度平均菌落数均大于300300，则应按稀释度，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数

8、报告之。最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于若所有稀释度的平均菌落数均小于3030，则应按稀释度，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1 1乘以最低稀乘以最低稀释倍数报告之。释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均不在若所有稀释度的平均菌落数均不在3030300300之间，其之间，其中一部分大于中一部分大于300300或小于或小于3030时，则以最接近时，则以最接近3030或或300300的平均的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。菌落数乘以稀释倍数报告之。菌落数的报告菌落数的报告 菌落数在菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于以内时，按其实有数报告，大于100时，时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指的指数来表示。数来表示。思考题及实验作业思考题及实验作业