单方及复方中草药对丁鱥部分免疫和生理指标的影响毕业论文.doc

《单方及复方中草药对丁鱥部分免疫和生理指标的影响毕业论文.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《单方及复方中草药对丁鱥部分免疫和生理指标的影响毕业论文.doc（24页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、天津农学院毕 业 论 文中文题目: 单方及复方中草药对丁鱥部分免疫和生理指标的影响英文题目: Effects of Individual Herbs and Herb Combinationson Part of Immunological and Physiological Parameters of Tinca tinca L. 学生姓名 学 院 水产学院 专业班级 2005级水产养殖学专业2班 指导教师 成绩评定 2009年6月目录1前言12试验材料与方法22.1 试验材料22.1.1 试验鱼22.1.2基础饵料与中草药22.1.3试验仪器与设备22.1.4试验试剂32.2 试验方法52

2、.2.1 试验饵料的制备52.2.2 试验鱼分组、养殖与组织样品的提取52.2.3 样品的测定52.2.4 数据处理与统计分析93结果与分析93.1 SOD的测定结果93.2 MDA的测定结果133.3 CAT的测定结果163.4 LSZ的测定结果203.5 细胞吞噬指数的测定结果243.6 ACP的测定结果253.7 ALP的测定结果293.8 GPT、GOP的测定结果334讨论344.1 丁鱥各组织中各项抗氧化及免疫指标活性比较344.2 不同中草药对丁鱥抗氧化能力的影响354.3 不同中草药对丁鱥其他免疫指标的影响364.4 试验方法讨论385结论39参考文献40致谢44附录1相关英文文

3、献附录2英文文献中文译文摘要本试验以丁鱥（Tinca tinca L.）为试验对象，采用单因子浓度梯度法。饲料中分别添加2、5、8浓度的贯众、白芍、射干及5浓度的鱼欢、肝太乐、三黄粉，投喂7天后测定体内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、溶菌酶（LSZ）、细胞吞噬指数、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（ALP）、谷丙转氨酶（GPT）及谷草转氨酶（GOT）的活性含量，探讨中草药对丁鱥抗氧化体系、部分生理指标及免疫机能的影响。结果表明，各中草药组均对丁鱥鱼的抗氧化及免疫系统起积极作用。其中2白芍组与2射干组作用效果相对较显著；投喂贯众组后机体SOD活性与MDA含量均有

4、所提高，但SOD的增幅高于MDA，5贯众组作用效果较好；三种复方中草药对抗氧化及免疫系统的作用效果相近，均起增益效果。因此，贯众、白芍、射干、鱼欢、肝太乐及三黄粉可作为免疫增强剂。关键词: 中草药；丁鱥；非特异性免疫；抗氧化ABSTRACTIn this experiment, Tinca tinca L. was used as the trial animal, and the single-factor concentration gradient method was adopted. The Tinca tinca L. were fed diets containing four

5、doses of crassirhizoma, peony and Rhizoma Belamcandae (0, 2, 5 and 8) and two doses of YuHuan, GanTaiLe and SanHuangFen (0 and 5) for 7 days. The contents of superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA), catalase (CAT), lysozyme (LSZ), cell phagocytic index, acid phosphatase (ACP), alkaline pho

6、sphatase(ALP), glutamic- pyruvic transaminase(GPT) and glutamic oxaloacetic transaminase (GOT) were determined in order to discuss the effect of Chinese herbs in antioxidation system, some physiological parameters and immune function of Tinca tinca L. The results showed that all Chinese herbs played

7、 a positive role on the antioxidant and immune system of Tinca tinca L. The effect of 2 paeony group and 2 Rhizoma Belamcandae group were relatively significant. SOD activity and MDA content of crassirhizoma group were enhanced at the same time, but the increasing in SOD was higher than in MDA, 5 cr

8、assirhizoma group had the better effect. The effect of three herb combinations on the anti-oxidant and immune system was similar. Therefore, the crassirhizoma, peony, Rhizoma Belamcandae, YuHuan, GanTaiLe and SanHuangFen can be used as the immunostimulants.Key words: Chinese herbs; Tinca tinca L.; n

9、on-specific immunity; antioxidation单方及复方中草药对丁鱥部分免疫和生理指标的影响本论文受天津市高等学校科技发展基金“丁鱥人工配合饲料的研究”项目的支持（项目编号：20062D24） 1 前言近年来，随着水产饲料添加剂的大规模使用以及渔业生产的日益发展，我国水产品数量日益增长。养殖密度不断加大引发养殖水体恶化、水产动物病害增多。在疾病防治中，抗生素、促生长剂等化学合成类药物目前使用较多，但是其易引发水产动物的耐药性，并且若药物残留超标也会对人类造成危害。接种疫苗是预防病害公认的有效措施，但是由于疫苗具有特异性，具体操作局限性很大。因此，新型安全的药物饲料添加剂

10、的研制和使用就显得日趋重要1。中草药作为饲料添加剂是如今研究水产动物免疫和疾病的一大方向。中草药饲料添加剂是由不同性味功能的中草药，依据中兽医药学和现代营养学理论配制而成的2。我国中草药历史悠久，资源丰富。作为一种绿色添加剂，其作用范围广，副作用、抗药性小，对人体也有益。据中药大辞典记载，我国中草药的品种已达5700多种，居世界之首，其中有200多种植物性药物有很好的免疫作用3。中草药中多糖、皂甙、生物碱、有机酸、挥发油这些成分具有免疫调节作用，其主要通过激活网状内皮系统和补体、激活巨噬细胞和T、B淋巴细胞和诱生多种细胞因子等途径4。这些优点是抗生素等药物所无法比拟的。但是对中草药免疫功能的评

11、价也不能孤立的进行，应根据水产动物的具体条件状况，从体液免疫和细胞免疫两个方面综合考虑。鱼类的体液免疫系统还包括特异性免疫(主要由抗体分子参与)和非特异性免疫(主要由体液因子参与)两个部分5。由于鱼类的特异性免疫系统成熟较晚，因此非特异性防御机制在防止感染中扮演着重要角色6。目前有关中草药对鱼类免疫能力影响的研究比较多。在鲤鱼、大黄鱼、rockfish Sebastes schlegel及尼罗罗非鱼中有过相关报道7-10。阮国良等11研究表明，通过投喂添加了茯苓、黄芪及五加皮的饲料，黄鳝血液白细胞的吞噬活性、血清的溶菌酶活性和超氧化物歧化酶活性显著提高。Jang等12报道用甘草酸体外处理虹鳟能

12、增强其巨噬细胞呼吸爆炸活性。王吉桥等13用添加了金银花等中草药的复方制剂饲喂牙鲆，结果发现牙鲆血清中溶菌酶及超氧化物歧化酶活性均显著提高。JIA-SHI ZHU等14曾对中草药冬虫夏草进行过化学、药理学及毒理学方面的研究，得出冬虫夏草具有抗氧化、抗衰老及降血脂等作用。Valentina Razmovski-Naumovski等15曾研究过中药绞股蓝的药物动力学及毒理学，并发现绞股蓝也有一定清除自由基的能力。丁鱥（Tinca tinca L.），隶属于鲤科、雅罗鱼亚科、丁鱥属。原产于欧洲，我国仅分布于新疆额尔齐斯河和乌伦古河流域，杂食偏动物食性。丁鱥鱼对环境和温度的适应性较强，能耐低氧，适合进行

13、高密度大规模的工厂化养殖16。通过投喂贯众、白芍、射干三种单方中草药及鱼欢、肝太乐、三黄粉三种复方中草药后，测定丁鱥血浆、肝脏、头肾、脾脏、鳃丝及肌肉中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、溶菌酶（LSZ）、细胞吞噬指数、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（ALP）、谷丙转氨酶（GPT）及谷草转氨酶（GOT）活性含量的变化情况，从而探讨中草药对丁鱥抗氧化体系以及非特异性免疫系统的影响，进而筛选出能对丁鱥鱼的抗氧化、免疫系统起积极作用的中草药添加剂，为丁鱥鱼的疾病防治提供参考依据。2 试验材料与方法2.1 试验材料2.1.1试验鱼 本试验鱼于2008年7月18日购自天津

14、市天祥水产养殖有限公司，运至天津农学院天津市鲤鱼良种场。进行消毒处理后，置于暂养水箱中暂养，待其适应环境后，测量体长并称量体重。丁鱥个体平均体长为17.471.54 cm，平均体重为0.164 0.037 kg。2.1.2基础饵料与中草药丁鱥基础饲料购自天津市大洋饲料有限公司，为鲤鱼鱼种配合饲料，CP 32%，置干燥阴凉处。贯众、白芍、射干三种单方中草药购自天津市药材公司，鱼欢（主要成分为黄芪、连翘、金银花）、肝太乐（主要成分为当归、川断、栀子）、三黄粉（主要成分为黄芩、黄柏、大黄）三种复方中草药取自天津农学院水产科学系，将中草药装于封口塑料袋中以备用。2.1.3 试验仪器与设备高压蒸汽灭菌锅

15、（MLS-3020，日本三洋有限公司）；超净工作台（HS-1300-U，苏净集团安泰公司）；生化培养箱（BINDER-52）；光照培养箱（HPG-280B，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司）；电子分析天平（Sartorius，BS210S，北京赛多利斯天平有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（GZX-9240MBE，上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；低温高速离心机（Microfuge 22R Centrifuge，美国Beckman公司）；紫外可见分光光度计（KNS752UV，To-1901天津喀纳斯光学分析仪器有限公司）；水浴锅（HH-6，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；恒温摇床（KYC-10

16、B，上海福玛试验设备有限公司）；电动匀浆器（DY89-，宁波新芝生物科技股份有限公司）；显微镜（13395H2X，Leica）。2.1.4 试验试剂2.1.4.1 蛋白质含量测定所需试剂牛血清白蛋白标准品（北京鼎国生物技术有限责任公司，批号：84E103100）；考玛斯亮蓝G-250（北京博大泰克生物基因技术有限责任公司）；95%乙醇（天津市北方天医化学试剂厂，批号：070321）；磷酸（天津市化学试剂批发公司，批号：20081118）。2.1.4.2 SOD活性测定所需试剂硝酸四氮唑蓝（NBT，北京鼎国生物技术有限责任公司，批号：DH213-4）；核黄素（天津市光复精细化工研究所，批号：20

17、080407）；SOD标准品（Sigma，批号：074H7175）；2.1.4.3 MDA含量测定所需试剂2-硫代芭芘妥酸（TBA，国药集团化学试剂有限公司，批号：20070612）；三氯乙酸（上海凌峰化学试剂有限公司，批号：050614）；1,1,3,3-四乙氧基丙烷（Sigama-Aldrich，批号：CH-9471）。2.1.4.4 CAT活性测定所需试剂过氧化氢（H2O2,天津市申泰化学试剂有限公司，批号：080430）；钼酸铵（天津市化学试剂四厂，批号：20060816）；2.1.4.5 LSZ活性测定所需试剂溶壁微球菌（由天津科技大学生物工程学院赠送）；溶菌酶标准品（北京鼎国生物技

18、术有限责任公司，批号：DH187-3）；蛋白胨（天津市英博生化试剂有限公司，批号：060629）；酵母浸膏（天津市英博生化试剂有限公司，批号：060219）；营养琼脂（天津市英博生化试剂有限公司，批号：031209）。2.1.4.6 ACP活性测定所需试剂-萘酚磷酸钠（天津Alfa Aesar化学有限公司，批号：D3999A）；固红TR（Sigma Aldrich，批号：24123JB）；柠檬酸（天津市化学试剂三厂，批号：030414）；柠檬酸钠（天津市化学试剂三厂，批号：20070618）；乙酸钠（NaAc，天津市化学试剂三厂，批号：20071009）；冰乙酸（HAc，天津市北方化玻购销中心

19、，批号：20040627）。2.1.4.7 ALP活性测定所需试剂4-氨基安替比林（天津市福晨化学试剂厂，批号：20050615）；磷酸苯二钠（上海天莲精细化工有限公司，批号：2006-10-28-69）；铁氰化钾（沈阳市试剂一厂，批号：20070103）；硼酸（天津市北方天医化学试剂厂，批号：20050912）；酚标准液（北京鼎国生物技术有限责任公司，批号：DH240-1）。2.1.4.8 GPT、GOT活性测定所需试剂DL-天门冬氨酸（solarbio，批号：Cat.No.A0012）；DL-丙氨酸（上海化学试剂有限公司，批号：20021009）；-酮戊二酸（国药集团化学试剂有限公司，批号

20、：W20061025）；2,4-二硝基苯肼（DNPH）； 丙酮酸钠（天津市光复精细化工研究所，批号：20071022）；2.1.4.9 细胞吞噬指数测定所需试剂枯草芽孢杆菌（由天津农学院农学系实验室赠送）；Gimesa；甘油（天津市北方天医化学试剂厂，批号：20080222）；甲醇（天津市化学试剂二厂，批号：850723）。2.1.4.10 其他常用试剂HCl（批号：20060818）；KCl（批号：20070406）；乙二胺四乙酸（EDTA，批号：20070418）天津市化学试剂三厂；NaOH（批号：20050902）；KH2PO4（批号：080304）；Na2CO3（批号：20071111

21、）天津市北方天医化学试剂厂；Na2HPO4（批号：20080428）；NaH2PO4（批号：20080615）；NaCl（批号：20081205）天津市江天化工技术有限公司；H2SO4（天津市赢达稀贵化学试剂厂，批号：050512）。2.2 试验方法2.2.1 试验饵料的制备 贯众、白芍、射干三种单方中草药分别按2、5、8拌入饲料制粒，复方中草药添加量为5，以不添加中草药组作为对照。2.2.2 试验鱼分组、养殖与组织样品的提取丁鱥经过暂养、测量外部指标后，从中选出健康的390尾进行分组。每种浓度梯度设三组平行，共39组，每组10尾。投饲率为3%-4%，每天换水1/3-1/2，水温控制在28.5

22、1，每天投喂三次。饲养7天后，测定每尾丁鱥的体长、体高及体重。抽血时先用肝素润湿离心管及注射器，再从丁鱥尾柄腹侧处取血，4 1476 g离心10 min后吸取血浆，置干净离心管中于-80冰箱中保存备用。抽血后进行解剖，分别取其肝脏、脾脏、头肾、鳃丝及肌肉，装入封口塑料袋后置于-80冰箱中保存备用。组织测定前用电动匀浆机（DY89-）研磨（1000 rpm），将匀浆液倒入离心管中，于4 13282 g离心30 min后吸取上清液进行各指标的测定。血浆取出融化后可直接测定。2.2.3 样品的测定 本试验共测定十个指标，SOD、MDA及CAT为抗氧化指标，LSZ、细胞吞噬指数、ACP、ALP、GPT

23、及GOT等为其他非特异性免疫及生理指标。2.2.3.1 蛋白质含量测定蛋白质含量采用考马斯亮蓝G-250法17。取浓度为0、0.02、0.04、0.06、0.08、1.00 mg/mL的牛血清白蛋白溶液各1 mL，分别放入6个试管中，再加入5 mL考马斯亮蓝G-250试剂，充分混匀，放置两分钟后用分光光度计在波长为595 nm条件下进行比色。以吸光度为X值，蛋白质浓度为Y值拟合求回归方程。取样品5 L，加入dH2O 0.995 mL，方法同上，测得吸光度值。将吸光光度值代入回归方程，计算出样品的蛋白质含量。2.2.3.2 SOD活性测定SOD采用NBT-核黄素还原法18。取浓度为0、0.3、0

24、.6、0.9、1.5、2.4、3.0 U/mL的SOD标准品溶液各2 mL，分别放入7个试管中，加入2 mL NBT，混匀，于25保温15 min后加入1 mL核黄素，置25光照培养箱中准确光照20 min后拿出，置暗处暗反应15 min后用分光光度计在波长为560 nm条件下进行比色。以吸光度为X值，SOD标准品的浓度为Y值拟合求回归方程。取血浆和肌肉样品25 L，鳃丝样品15 L，肝脏、头肾及脾脏样品5 L，各加入缓冲液补足体积至1 mL，加入1 mL NBT，混匀，于25保温15 min后加入0.5 mL核黄素，方法同上，测得吸光度值。将吸光光度值代入回归方程，计算出样品的SOD活性（U

25、/mL），再除以样品的蛋白质含量，得出单位蛋白质下SOD活性。2.2.3.3 MDA含量测定MDA采用TBA比色法19。取浓度为0、0.3125、0.625、1.25、2.5、5.0 nL/mL的1,1,3,3-四乙氧基丙烷各1 mL，分别放入6个试管中，加入1 mL TBA，3 mL三氯乙酸，混匀后置于95水浴锅中水浴30 min，取出后在830 g条件下离心10 min，吸取离心后上清液，用分光光度计在波长为532 nm条件下进行比色。以吸光度为X值，1,1,3,3-四乙氧基丙烷的浓度为Y值拟合求回归方程。取血浆和鳃丝样品100 L，肝脏和肌肉样品300 L，头肾和脾脏样品30 L，各加入

26、dH2O补足体积至0.5 mL，加入0.5 mL TBA，1.5 mL三氯乙酸，方法同上，测得吸光度值。将吸光光度值代入回归方程，计算出样品的MDA含量（nL/mL），再除以样品的蛋白质含量，得出单位蛋白质下的MDA含量。2.2.3.4 CAT活性测定CAT采用钼酸铵快速简便法20，具体方法见参考文献。各组织加样量为：肌肉500 L，血浆和鳃丝100 L，头肾30 L，肝脏25 L、脾脏20 L。CAT活性单位定义：在25条件下，酶活性以每毫克蛋白使反应体系在360 nm波长吸收峰的下降值表示。CAT活性= CPr：样品蛋白质浓度(g/mL)依上述公式计算得出单位蛋白质下的CAT活性。2.2.

27、3.5 LSZ活性测定LSZ采用杯碟法21。将溶壁微球菌在固体培养基上纯化、培养，接着用接种环挑取单一菌落置100 mL液体培养基中，置水浴摇床中37培养24 h后吸取1 mL菌液加入另一含有99 mL液体培养基中，继续培养16-18 h后取出，并稀释成透光率为35%-40%的菌液。吸取此菌液300 L，均匀涂布在固体培养基上，在培养基上等间距放置7 mm滤纸片，向滤纸片中心滴加浓度分别为600、1200、1800、3600、4800 U/mL的溶菌酶标准品溶液7 L，置37培养箱中倒置培养24 h后拿出，以产生抑菌圈的直径为X值，溶菌酶标准品的浓度的对数为Y值拟合求回归方程。样品测定时取7

28、L样品滴加在滤纸片上，方法同上，测量得抑菌圈直径。将抑菌圈直径代入回归方程，计算出样品的LSZ活性（U/mL），再除以样品的蛋白质含量，得出单位蛋白质下的LSZ活性。2.2.3.6 细胞吞噬指数的测定细胞吞噬指数采用Gimesa染色法21 。取加入枯草芽孢杆菌的血液40 L置干净载玻片上进行血涂片制作，经风干后用Gimesa染色。在显微镜下，计数每100个白细胞中吞噬细菌的细胞数，及每个白细胞吞噬细菌的个数。按下式计算吞噬百分比（phagocytosis percentage，PP）和吞噬指数（phagocytic index，PI）。吞噬百分比(PP)=100个白细胞中参与吞噬的细胞数/10

29、0100%吞噬指数(PI)=被吞噬的细菌数/吞噬细菌的细胞数2.2.3.7 ACP活性测定ACP采用比色法22。ACP基质液的配制：称取-萘酚磷酸钠79 mg，固红TR 44 mg，柠檬酸0.58 g，柠檬酸钠1.47 g，溶于80 mL dH2O中，用5 mol/L 醋酸盐缓冲液调pH至5.00.2，用dH2O定容于100 mL容量瓶中。现用现配。取血浆和肌肉样品15 L，肝脏和鳃丝样品7 L，头肾和脾样品3 L，加入3 mL事先预温至30的基质液中，在30水浴锅中准确反应5 min后拿出，用分光光度计在波长为405 nm条件下进行比色，测定吸光值ACP1后，再置30水浴锅中准确反应5 mi

30、n，拿出测定吸光值ACP2，相减之差依据以下公式计算得出ACP活性（U/L），再除以样品的蛋白质含量，得出单位蛋白质下的ACP活性。ACP活性单位定义：30，1 min生成1 mol -萘酚为1个单位。ACP活性U/L= m为-萘酚与固红TR反应形成偶氮化合物的毫摩尔吸光系数，值为12.8，P为1 cm光径，TV为反应液总量，SV为样本用量。2.2.3.8 ALP活性测定ALP采用比色法22。分别取浓度为0.05 mg/mL的酚标准应用液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分别放入6个试管中，加入dH2O补足体积至1.1 mL，其对应相当于金氏单位0、10、20、30、40、50

31、。加入1 mL碳酸盐缓冲液，3 mL铁氰化钾，充分混匀后用分光光度计在波长为510 nm条件下进行比色。以吸光度为X值，金氏单位为Y值拟合求回归方程。取肌肉样品100 L，血浆样品50 L，鳃丝样品5 L，肝脏和头肾样品2.5 L，脾脏样品1.5 L，加入dH2O补足体积至0.05 mL。再加入30预温过的碳酸盐缓冲液0.5 mL及ALP基质液0.5 mL后于30水浴锅中准确反应15 min后，取出加入1.5 mL铁氰化钾，对照管测定时样品液最后加入，方法同上，测得样品管吸光度值ALP2和对照管吸光度值ALP1，将吸光光度值之差代入回归方程，计算出样品的ALP活性（金氏单位/mL），再除以样品

32、的蛋白质含量，得出单位蛋白质下的ALP活性。ALP活性单位定义：30，100 mL血清与底物作用15 min，产生1 mg酚为1金氏单位。2.2.3.9 GPT、GOT活性测定GPT、GOT均采用比色法22。GPT基质液的配制：称取DL-丙氨酸1.79 g和-酮戊二酸29.2 mg，溶于50 mL磷酸盐缓冲液中，用1 mol/L NaOH溶液（约0.5 mL）校正pH至7.4，再用磷酸盐缓冲液定容于100 mL容量瓶中。现用现配。GOT基质液的配制：准确称取DL-门冬氨酸2.66 g和-酮戊二酸29.2 mg，加入1 mol/L NaOH 20.5 mL溶解，加入磷酸盐缓冲液，校正pH至7.4

33、后，用磷酸盐缓冲液定容于100 mL容量瓶中。现用现配。取浓度为0、0.2、0.4、0.6、0.8 mmol/L的丙酮酸标准液0.5 mL，分别放入5 个试管中，其对应相当于GPT卡门单位0、28、57、97、150，相当于GOT卡门单位0、24、61、114、190。加入0.5 mL DNPH，混匀，分别置30水浴锅中准确反应20 min、60 min后，加入5 mL NaOH，用分光光度计在波长为505 nm条件下比色。以吸光度为X值，卡门单位为Y值拟合求回归方程。取肝脏样品2.5 L，加PBS补足至0.1 mL，测定管加入0.5 mL GPT、GOT基质液，混匀后置30水浴锅中30 mi

34、n后，加入0.5 mL DNPH，混匀后分别置30水浴锅中准确反应20 min、60 min，取出，加入5 mL NaOH。对照管先加入DNPH后加入基质液，其他步骤和测定管一致，测得样品管吸光度值GPT2、GOT2和对照管吸光度值GPT1、GOT1后，将吸光光度值之差代入回归方程，并计算出样品的GPT与GOT活性（卡门单位/mL），再除以样品的蛋白质含量，得出单位蛋白质下的GPT与GOT活性。GPT、GOT活性单位定义：本法单位用试验方法和卡门分光光度法（速率法）作对比求得值。卡门单位定义为：1 mL血清，反应液总量3 mL，340 nm波长，25，1 min内生成的丙酮酸使NADH氧化成N

35、AD+而使吸光度每下降0.001为一个单位。2.2.4 数据处理与统计分析 所有数据均用Excel 2003及SPSS13.0进行分析处理。利用Excel软件制作各指标的标准曲线，并利用标曲计算得出各样品中对应指标的活性含量。利用SPSS软件进行方差分析。3 结果与分析3.1 SOD的测定结果根据SOD标准曲线方程（Y=8.16771-49.14433X+76.02233X2，r2=0.9678）求出对照组和试验组各样品中SOD活性。结果见表1、图1-5。对照组中各组织SOD活性由高到低依次为肝脏头肾鳃脾脏肌肉血浆，其中肝脏SOD活性极显著大于其他各组织（P0.01），头肾及鳃SOD活性显著大

36、于血浆（P0.05）。从图1中可以看出，贯众组血浆与鳃SOD活性变化不大。与对照组相比，2贯众组对头肾、脾及肌肉中的SOD活性作用较明显，分别提高了207.21%（P0.05）、180.85%（P0.05）；5贯众组中脾SOD活性极显著提高（P0.01）；8图1 不同浓度贯众对丁鱥SOD活性的影响表1 中草药对丁鱥组织SOD活性的影响 单位：U/mg血浆肝脏头肾脾脏鳃肌肉SDSDSDSDSDSD2贯众0.450.26AB23.37.40D31.4927.06AB*9.023.80CDE9.902.47CD11.881.71A5贯众0.791.01AB29.554.05BCD12.838.26C

37、DE13.6310.63BC*9.401.91CDE0.780.23C8贯众0.480.39B41.846.64B4.262.45E10.885.73CDE8.371.38DEF0.900.16C2白芍0.810.46AB42.028.76B23.637.26BCD11.303.44CD8.781.96DE10.240.93AB5白芍0.740.75AB38.487.76B23.1718.04BCD11.286.16CD2.230.87G10.231.67AB8白芍0.820.52AB36.1811.76BC5.292.21E5.622.30DEF3.230.85FG13.571.40A*2射

38、干0.750.70AB31.6212.78BCD9.553.53DE13.2912.54BC*17.345.19A*9.078.02AB5射干1.451.38A35.9812.33BCD12.21.70CDE1.250.55F18.299.75A*9.677.23AB8射干1.261.14AB24.676.47CD4.591.64E1.520.20F10.873.58BCD7.717.50ABC5鱼欢0.930.84AB35.874.40BCD7.122.38DE19.134.17AB*3.821.40EFG0.810.01C5肝太乐0.770.67AB39.6919.91B27.2825.6

39、0BC21.876.33A*16.215.82AB5.880.15ABC5三黄粉0.730.74AB54.9317.24A*46.6430.38A*4.261.58EF14.834.61ABC8.630.55ABC对照组0.430.22B32.1812.13BCD10.256.19DE4.441.31EF9.209.47DE4.233.20BC注：表中字母不同表示差异显著（P0.05），“*”该组代表与对照组相比差异极显著（P0.05）、145.05%（P0.05）。2贯众组中头肾与肌肉SOD活性显著高于5与8组（P0.05），而8贯众组中肝SOD活性显著强于2与5组（P0.05）、130.5

40、4%（P0.05）、154.50%（P0.05）；5白芍组中肝、头肾、脾及肌肉SOD活性分别提高了19.58%（P0.05）、126.05%（P0.05）、154.05%（P0.05）；8白芍组中肌肉SOD活性极明显提高（P0.01），为对照组的3.2倍，而5与8白芍组中鳃SOD活性显著降低（P0.05）。8白芍组中头肾SOD活性明显低于2与5组（P0.05）。图2 不同浓度白芍对丁鱥SOD活性的影响图3 不同浓度射干对丁鱥SOD活性的影响4 讨论4.1 丁鱥各组织中各项抗氧化及免疫指标活性比较通过分析比较丁鱥对照组中6个组织各指标后可以看出，肝脏SOD、CAT活性最高，而MDA含量较低，LS

41、Z活性较高，说明肝脏在丁鱥抗氧化及免疫系统中起着很重要的作用，肝脏中GPT比GOT活性高。头肾SOD、CAT活性也比较高，且其LSZ与ACP活性最高，ALP活性居中，说明其对丁鱥的免疫抗病能力也起重要作用。黄峰等23通过测定得出异育银鲫中头肾LSZ活性最高，而在肝胰脏中存在着最多的超氧化物歧化酶，马维波在测定香鱼各组织免疫指标活性含量后也得出头肾LSZ活性最高、肝脏SOD与CAT活性最高的结论24，这些与本试验所得出的肝脏与头肾是丁鱥主要抗氧化及免疫器官的结果相符。张永安及孙德文等25,26认为鱼体中最重要的三个免疫器官为胸腺、肾脏与脾脏，本试验结果表明肝脏除了作为解毒器官外，在丁鱥的非特异性

42、免疫中也起着很重要的作用。鳃丝中各指标活性含量适中，比肝脏和头肾低，但比脾脏和血浆高，说明其在机体免疫应答中起着辅助支持的作用。脾脏中ALP活性最高，但LSZ活性最低。王宏田27通过对牙鲆免疫系统和抗病力的研究也得出脾脏中LSZ活性较低的结论。这表明脾脏在丁鱥非特异性免疫中不起主要作用。血浆中ACP与ALP活性很低，MDA含量仅高于肝脏，说明其脂质过氧化程度较低，机体处于较健康状态。肌肉中各指标活性含量均较低，说明肌肉在丁鱥抗氧化及非特异性免疫方面作用不大。4.2 不同中草药对丁鱥抗氧化能力的影响机体的抗氧化体系是一个相互关联的复杂的系统。本试验测定SOD、MDA及CAT，旨在从自由基的角度探讨中草药对丁鱥抗氧化能力的影响。在正常生理情况下，机体自由基的产生与清除维持在一个正常的生理水平上，处于动态平衡之中28。当受到外界刺激或细菌侵染时机体会产生应激反应，导致