尿酸对脑缺血缺氧损伤的保护作用医学硕士毕业答辩论文.doc

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1、分类号：R361学校代码： 10438密 级： 学 号： 硕士学位论文题目HIF-1、VEGF、uPA在胶质瘤中的表达及其与血管生成的关系院、系（所）临 床 学 院专业外 科 学学位类型医 学 专 业 学 位申 请 人 导师 教授 教授 论文起止日期: 2012年03月-2013年04月1分类号：R361学校代码： 10438密 级： 学 号： 硕士学位论文题目HIF-1、VEGF、uPA在胶质瘤中的表达及其与血管生成的关系院、系（所）临 床 学 院专业外 科 学学位类型医 学 科 学 学 位申 请 人 导师 教授 教授 论文起止日期: 2012年03月-2013年04月22 学位论文原创性声

2、明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中依法引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其它学位申请的论文或成果。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本人按照学校规定的方式，对因学位论文不当取得学位而给学校造成的名誉损害进行公开道歉；4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：_ 签字日期： 年 月 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解潍坊医学院有关保留、使用学位论文的规定，同意学校

3、保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权潍坊医学院可以将本学位论文全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用该学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为潍坊医学院。保密论文解密后仍适用于本声明。论文作者签名：_ 日期： 年 月 日导 师 签 名：_ 日期： 年 月 日（本声明的版权归潍坊医学院所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用）目 录一、中文摘要1二、英文摘要4三、符号说明7四、正 文（一）前 言8（二）材料和方法10（三）结 果17（四）讨 论20（

4、五）结 论28五、附图表29六、参考文献37七、文献综述42八、致 谢59九、攻读学位期间撰写的论文60尿酸对脑缺血缺氧损伤的保护作用 中文摘要目的：尿酸不仅是嘌呤代谢的最终产物，而且还是一种还原性物质，参与氧化还原反应，是一种强抗氧化剂。本实验通过给缺血缺氧脑损伤的新生大鼠腹腔注射尿酸，探讨尿酸对新生大鼠脑缺血缺氧损伤的神经保护作用，从而为临床新生儿缺血缺氧性脑病提供安全、有效、可行的新治疗方法，降低临床新生儿的罹患率、致残率和死亡率。方法：参照Rice-Vannucci模型,建立新生大鼠脑缺血缺氧模型,实验分为三组，正常对照组(Control)、新生大鼠脑缺血缺氧模型组(HI)、尿酸治疗组

5、(UA)。通过观察不同组新生大鼠脑组织含水量变化、氯化2、3、5三苯基四氮唑（2、3、5-triphenyltetrazolium chloride）TTC染色、HE染色 、Nissl染色，从形态学上评价尿酸对新生大鼠脑缺血缺氧引起的脑梗死的神经保护作用。 结果：一.尿酸对脑组织形态学变化的影响1.脑组织含水量：正常对照组的平均含水量是0.820.08，HI组的平均含水量是0.880.10，UA组的平均含水量是0.840.15。HI组新生大鼠脑组织含水量显著高于正常组（P0.01）, UA组新生大鼠脑组织含水量比HI组明显降低（P0.05）。2.氯化2，3，5-三苯基四氮唑（TTC）染色：各组

6、新生大鼠在脑缺血24小时进行TTC染色，结果显示正常组脑组织无梗死，HI组脑组织梗死体积百分比为40.373.25%，UA组脑组织梗死体积百分比为30.071.52%，UA组脑组织梗死体积百分比显著低于HI组，差异具有统计学意义（P0.01）。而正常对照组与UA组相比脑组织梗死体积百分比仍有显著差别（P0.01）。 3.HE染色：正常对照组脑组织结构完整,神经元清晰,HI组脑组织结构紊乱，大片的神经元变性、坏死和凋亡。UA组较HI组神经元分布规则，细胞皱缩不明显、细胞核浓缩和神经元数量减少。UA组与HI组相比，神经元形态存在明显差别。结论：1.尿酸用药后可降低新生大鼠脑缺血缺氧损伤程度，对脑组

7、织具有神经保护作用。2.尿酸的神经保护作用是通过抗氧化抗凋亡机制来实现的。关键词：尿酸、脑缺血缺氧、神经保护作用、三硝基酪氨酸、凋亡NEUROPROTECTIVE EFFECTS OF URIC ACID IN A NEONATAL HYPOXIC ISCHEMIC RAT MODELPostgraduateLi yiSpecialityPathology and PathophysiologySupervisor Professor Lu yiyiABSTRACTObjective: Uric acid is not only the terminal product of purine m

8、etabolism, but also is a powerful antioxidant involved in redox reactions. The present study aimed to Methods: The model used in this study was based on the Rice-Vannucci model. Unsexed 7-day-old (day 0, day of birth) rat pups were randomly assigned to the Results: 1. Uric acid on the morphological

9、changes of brain tissue (1).Brain water content *The brain water content in each group was detected 24 h after HI. The average brain water content in the control group, HI group and UA treated group was 0.820.08, 0.880.01 and 0.840.05, respectively, implying significantly decreased cerebral edema af

10、ter UA treatment (P0.01 vs. HI group).Conclusion: 1.These findings demonstrated that uric acid could exert neuroprotective effects against neonatal hypoxia-ischemia injury. 2. Uric acid could exert neuroprotective effects by suppressing oxidative stress and subsequent neuronal apoptosis. Keywords: u

11、ric acid, brain hypoxic-ischemia, neuroprotective effects, 3-nitrotyrosine, apoptosis 符 号 说 明英文缩写英文全称中文全称HIhypoxic ischemia缺血缺氧HIEhypoxic ischemia encephalopathy缺血缺氧脑病HIBDhypoxic ischemia brain damage缺血缺氧性脑损伤ROSreactive oxygen specie 活性氧RNSreactive nitrogen species活性氮FRfree radical自由基TTC2,3,5-triphe

12、nyltetrazolium chloride Hematoxylin eosin氯化2，3，5-三苯基四氮唑HEHematoxylin eosin苏木素Nissltoluidine blue甲苯胺蓝TUNELterminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labelingTDT介导的生物素dUTPNOCaspase-3nitric oxideCyteine aspartate specific proteinase-3一氧化氮半胱胺酸蛋白酶蛋白-3Caspase-9Cyteine aspartate specific

13、proteinase-9半胱胺酸蛋白酶蛋白-9ANOVAanalysis of variance方差分析O2superoxide radicals超氧阴离子1O2singlet oxygen单线态氧H2O2hydrogen peroxide 过氧化氢OHhydroxyl radical 羟基ONOOperoxynitrite亚硝酸盐UAuric acid尿酸XDHxanthine dehydrogenase黄嘌呤脱氢酶XOxanthine oxidase黄嘌呤氧化酶SODsuperoxide dismutase超氧化物歧化酶前 言新生儿时期是一个特殊而危险的时期，因为许多疾病和损伤都可能发生在

14、此阶段,比如新生儿脑血管疾病：新生儿脑病、局灶性脑缺血或全脑缺血等，常致患侧脑组织供血不足，引起新生儿脑缺血缺氧，能量代谢紊乱以及脑神经元损伤。新生儿缺血缺氧性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE）是新生儿期常见疾病，是导致儿童神经系统损伤和婴儿死亡的主要原因之一,尽管目前社会对新生儿的密切关注和护理较以前明显改善，但是与新生儿脑损伤有关的患病率却未得到根本改善1。除了一些已知的原因之外,在发育的脑中还有许多未知的触发神经元死亡的原因2。目前随着社会、情感、医疗、经济一系列难题的出现,新生儿缺血缺氧脑病已经成为临床上日益增长的卫生难题。材料与方法一 实

15、验材料1.主要仪器和器材250-500透明动物加压仓上海701所杨园医用氧舱厂501型超级数显恒温水浴上海浦东跃欣科学仪器厂SW-CJ-IF型超净工作台德国Leica公司Leica020-519.010 光学显微镜德国Leica公司5810 R 低温高速离心机德国Eppendorf公司摄像及FR-988生物显微图像分析系统上海复日科技有限公司Smart Scape 2002生物图像分析软件 上海复日公司MTFG-A 通风柜 深圳医疗器械公司微量可调移液器 法国Gilson公司THZ-C 恒温振荡器 江苏太仓市实验设备厂MLS-3020 高压蒸汽消毒锅 日本三洋电器公司EL800 酶联免疫检测仪

16、 美国Biokit公司EL800 Bioelisa Reader 美国Bio-Tek InstrumentsPOLARstar microplate reader 德国BMG公司DL-360超声波仪 浙江石浦海天电子仪器厂Milli-Q 去离子水制备仪 美国Millipor有限公司AB 104-N 精密电子天平 美国Mettler Toled有限公司Delta 320 电子PH计美国Mettler Toled有限公司电子天平上海第一天平厂电子摇床上海离心机研究所THZ-C恒温振荡器 江苏太仓市实验设备厂水浴锅上海医疗器械七厂Incucell 55型温箱 德国Incucell有限公司DK-8A型

17、电热恒温水槽上海精宏实验设备有限公司DK-8D型电热恒温水槽 上海精宏实验设备有限公司超低温冰箱美国公司LKB-型超薄切片机德国Leica公司CM1900恒温冷冻切片机 德国Leica公司微波炉Galanz公司-70冷柜 Harris Manufacturing公司干热消毒柜Stuart Scientific2.试剂及药品尿酸 美国Sigma公司一氧化氮检测试剂盒碧云天生物技术研究所甲苯胺蓝 中国医药集团上海化学试剂公司In Situ Cell Death Detection Kit瑞士Roche公司Caspase-3/CPP32 Fluorometric Assay Kit 美国Bio Vi

18、sion公司Ant-nitrotyrosine:兔抗鼠美国Upstate公司TTC 中国医药集团上海化学试剂公司多聚甲醛中国医药集团上海化学试剂公司NaCl 上海生化试剂一厂NaH2PO4.2H2O上海生化试剂一厂Na2HPO4.12H2O 上海生化试剂一厂考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒南京建成生物科技公司蛋白酶抑制剂 康成生物有限公司甲醛 中国医药集团上海化学试剂公司二甲苯 中国医药集团上海化学试剂公司中性树胶 中国医药集团上海化学试剂公司乙醚 中国医药集团上海化学试剂公司30%H2O2 中国医药集团上海化学试剂公司无水乙醇中国医药集团上海化学试剂公司工业氮气工业氧气 上海江南气体公司上海江南气体

19、公司 3.主要试剂的配制（1）0.9%生理盐水NaCl ddH2O 混匀后高温高压消毒备用9g1000 ml（2）0.2M PBS (PH7.4) NaH2PO4.2H2O Na2HPO4.12H2O 加入ddH2O定容至1000 ml5.6 g61.6 g（3）1% TTC TTC 0.2M PBS 即配即用，避光保存0.5 g50 ml（4）尿酸 尿酸 0.9%生理盐水 溶解后振荡，用时振荡0.3 g10 ml（5）4%中性甲醛 40%甲醛 0.2M PBS 加入ddH2O定容至100ml10ml50ml（6）0.01M PBS(PH7.4) Na2HPO4.12H2O NaH2PO4.2

20、H2O NaCl 加入ddH2O定容至1000 ml2.90 g0.2964 g9 g（7）1mol/l MgCl2溶液 MgCl2 加入ddH2O定容至100ml高温灭菌，室温储存20.33 g(8)TSM1溶液Tris-base NaCl 1mol/l MgCl2溶液 加入双蒸水400ml使其完全溶解用适量浓HCl调pH至8.0后定容至500 ml6.057 g2.922 g5 ml(9) TSM2溶液Tris-base NaCl 1mol/l MgCl2溶液 加入双蒸水400ml使其完全溶解用适量浓HCl调pH至9.5后定容至500 ml6.057 g2.922 g25 ml（10）1%

21、甲苯胺蓝 甲苯胺蓝 蒸馏水 混匀器上混匀1 g100 ml（11）甲醇过氧化氢 36%乙酸 无水乙醇 30%过氧化氢 0.01M PBS 7.5 ml15 ml1 ml至30 ml（12）10PBS(pH7.4) NaCl KCl Na2HPO4.12H2O NaH2PO4.2H2O 加入双蒸水定容至100ml，过滤除菌分装保存于-208.0 g4.0 g3.48 g0.2 g（13）考马斯亮蓝蛋白贮备液（100T） 临用时按所需量用蒸馏水1:4稀释（即5倍稀释），配成应用液（现用现配）。4保存。（14）一氧化氮标准品NaNO2在1 ml中取50 ml,用0.9%的生理盐水稀释标准品。二 实验

22、方法1.1 实验材料与动物分组:氧舱购于上海701研究所杨园医用氧舱厂。尿酸购于美国Sigma公司。动物分组:健康Sprague-Dawley（SD）新生7天大鼠45只,雌雄不拘，体重14-18g，由上海第二军医大学实验动物中心提供，母鼠喂养。动物室温度控制在22-28C，动物按体重采用随机数字法随机分为三组：正常对照组（control）组（n=15）;缺血缺氧模型组（HI）（n=15）;尿酸治疗组（UA） (n=15).1.2 新生大鼠脑缺血缺氧模型的制作方法：参照Rice-Vannucci15-16模型，7天龄新生Sprague-Dawley大鼠，术前分组，乙醚吸入麻醉后仰卧位，下以保温床

23、垫维持肛温在（37.50.5）C，75%酒精消毒皮肤，行颈部正中切口，长0.5cm左右，分离皮下脂肪，于胸锁乳突肌内侧深部游离左侧颈总动脉,用5-0号丝线双道结扎，缝合伤口后再次消毒皮肤,，整个手术过程于3-5分钟内完成，术中用明胶海绵止血。术后休息30分钟送入笼中，母鼠喂养1小时，然后将其置于37C有机玻璃缺氧舱内通以8%氮氧混合气体，缺氧时间90分钟，实验结束后尿酸治疗组新生鼠即刻腹腔注射尿酸（62.5mg/kg）,然后将模型组和尿酸治疗组新生鼠放回鼠笼内母鼠喂养。1.3 脑组织含水量测定：术后24小时过量麻醉下快速断头取脑,去除嗅球与延髓,在精确电子秤上称重,然后置于55-60C的烤箱内

24、干燥48小时后再次称重。脑含水量采用Ellis公式计算：脑含水量%=（湿重干重）/湿重100%1.4 TTC染色：术后24小时，用乙醚吸入深度麻醉，断头取脑，将脑组织置于0C的冰生理盐水中10分钟，由前极向后每隔2mm冠状切片，置于2%TTC磷酸盐缓冲液（0.2M，PH=7.4）中，于37C避光孵育15分钟，PBS漂洗后置于4福尔马林溶液中24小时，拍照，采用ImageJ软件测定正常及梗死体积，计算梗塞百分比。TTC染色后正常组织为红色，梗死组织显示白色。1.5 HE染色：术后24小时动物深度麻醉，断头取脑，于4%多聚甲醛溶液内固定48小时行石蜡包埋、4 m冠状切片；50C烤片，20-30分钟

25、；脱蜡：二甲苯5分钟，二甲苯5分钟；水合：无水乙醇2分钟,95%乙醇1-2分钟，85%乙醇1-2分钟，75%乙醇1-2分钟，自来水冲洗5分钟；染色：苏木素3分钟，自来水5分钟，1%盐酸酒精20秒，自来水1分钟，伊红30秒-1分钟，75%乙醇20秒,85%乙醇20秒，95%乙醇1分钟，无水乙醇2分钟；封片：二甲苯2分钟，二甲苯2分钟,二甲苯2分钟，37C烘干，中性树胶封片。显微镜下观察新生大鼠损伤侧脑皮层和海马情况。1.6 Nissl染色：术后24小时动物深度麻醉下剪开右心耳，经左心室先灌注0.9%生理盐水40ml，再灌注4%多聚甲醛60ml，断头取脑，于4%多聚甲醛溶液内固定48小时行石蜡包埋

26、、4 m冠状切片，二甲苯脱蜡，酒精脱苯至蒸馏水漂洗,放入经预热至50C的1%甲苯胺蓝水溶液中,于56C温箱中染色30分钟，蒸馏水漂洗；70%酒精漂洗约1分钟；95%酒精分化；显微镜下计数新生大鼠损伤侧脑皮层和海马存活神经元。1.13统计学处理：实验结果用SPSS11.0统计软件分析，数据均采用S表示，组间差异用单因素方差分析，差异显著者用SNK-q检验进行比较。P0.05为差异有统计学意义。结 果1. 新生大鼠脑缺血缺氧模型的成功率本实验中新生大鼠脑缺血缺氧模型是否成功是根据TTC染色来判断的。TTC是呼吸链中吡啶一核苷结构酶系统的质子受体,是脂溶性光敏感的复合物,与活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢

27、酶反应,生成红色的甲月赞,用来表示细胞的活力。脑组织缺血缺氧后脱氢酶活性下降,不能反应,故不会产生变化而呈现苍白色。用TTC染色作为脑梗塞标本的大体形态观察,具有快速、直观、清晰确定梗塞范围的优点。本实验造模后肉眼观察到新生大鼠向身体右侧转圈、严重缺血缺氧者右侧肢体瘫痪,呈跌倒状。脑组织取材后TTC染色示有白色梗死区域，梗死体积与缺血缺氧严重度成正比，代表造模成功。本实验造模成功率达90%,出舱后死亡率接近0%，尿酸用药后死亡率为0%。2. 尿酸对新生大鼠缺血缺氧脑损伤模型脑组织含水量的影响正常组新鲜脑组织肉眼观：血管网清晰，无水肿，结构完整均匀，烘烤后脑组织皱缩，计算平均含水量为0.820.

28、08；HI组损伤侧脑组织肉眼观：无或有少量血管网,高度水肿膨胀,颜色苍白,烘烤后计算平均含水量是0.880.10,UA组损伤侧脑组织肉眼观：血管明显比HI组多，但密集度比正常组少，水肿比HI组明显减轻，颜色苍白度减弱，平均含水量是0.840.15。HI组新生鼠脑组织含水量显著高于正常组（*P0.01），UA组比HI组脑组织含水量减少,差异有统计学意义（#P0.05）。（见图1） 讨 论本实验基于Rice-Vannucci模型建立新生大鼠脑缺血缺氧模型，探讨尿酸对新生儿缺血缺氧的神经保护作用。结果显示：新生7天小鼠缺血缺氧后，给予尿酸治疗能显著缓解脑水肿、减少脑梗死体积，Nissl染色显示存活细

29、胞数量显著增加，Tunel染色显示凋亡细胞显著减少。此外，缺血缺氧后氧化代谢产物三硝基酪氨酸及NO含量显著降低, caspase-3的活性受抑制。上述结果显示，损伤后即刻腹腔给予尿酸对新生鼠缺血缺氧损伤具有一定程度神经保护作用。本研究应用7天龄新生大鼠是因为7天龄新生大鼠的脑发育阶段与32-34周胎儿、新生儿相似。自从Rice（1981）成功建立HIBD模型后,该模型被广泛应用于新生儿HIE疾病的实验研究中。该模型重复性好,操作简便,创伤小,无术后并发症,减轻了手术因素对模型的影响。而本实验该模型是否成功是根据TTC染色来判断的。TTC是一种白色粉状结晶,水溶液是一种无色溶液,它是呼吸链中吡啶

30、一核苷结构酶系统的质子受体，是脂溶性光敏感的复合物，与活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲月赞，用来表示细胞的活力。脑组织缺血缺氧后脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化而呈现苍白色。用TTC染色作为脑梗塞标本的大体形态观察，具有快速、直观、清晰确定梗塞范围的优点。目前随着分子生物学和免疫学等学科的发展及科研技术的进步,对新生儿缺血缺氧性脑病的病理生理机制有了更深入的研究,发现脑缺血缺氧后引起能量代谢衰竭、脑血管自动调节机制受损而导致谷氨酸在神经细胞的过量堆积。此时,病理变化主要为：继发性能量衰竭、继发性钙内流，加重神经元损伤;氧自由基大量生成，脑组织局部的过度炎症反应等最终导致细

31、胞死亡。目前有国内外研究表明：自由基增多、炎症反应、兴奋性神经递质释放、钙超载、内皮细胞损伤、细胞凋亡增加等多种因素均参与了新生儿缺血缺氧损伤。其中,自由基增多引起生物大分子氧化损伤是十分重要的启动因素,在新生儿缺血缺氧中起到了重要作用。自由基的产生自由基是含有未成对电子的原子、原子团或分子。大脑代谢旺盛，需要消耗机体20%的氧，在细胞氧化磷酸化过程中约有1%3%的高能电子溢出线粒体电子传递链而与氧反应生成氧自由基，这是在机体清除范围之内的，脑缺血时,细胞内Ca2+和Na+异常增多，导致大量的电子（超过5%）溢出线粒体电子呼吸链,与氧反应生成自由基,远远超过机体的清除能力,造成自由基堆积。同时

32、脑内含有大量的脂质，在缺血时很容易受到自由基的攻击，引起脑损伤。脑缺血时机体产生自由基的途径主要有以下几种：1、花生四烯酸代谢途径脑缺血后细胞内钙离子增加，激活磷脂酶A2，使膜磷脂降解为花生四烯酸，后者在环氧酶作用下产生PGE2、PGH2、PGG2、PGI2，同时产生O2，这是早期O2的主要来源。2、黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统脑缺血时ATP生成减少,能量代谢障碍，ATP依次降解为ADP、AMP和次黄嘌呤，造成次黄嘌呤堆积。同时由于细胞内钙离子升高激活蛋白水解酶，使黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶，黄嘌呤氧化酶在大量氧分子的供应下，催化次黄嘌呤转化为黄嘌呤进一步转化为尿酸，这两步反应均以分子氧为电子

33、供体，从而产生大量的超氧阴离子（O2）和羟自由基（OH）。这是缺血时自由基产生的主要途径。结 论1.尿酸用药后可降低新生大鼠脑缺血缺氧损伤程度，对脑组织具有神经保护作用。2.尿酸的神经保护作用是通过抗氧化抗凋亡机制来实现的。附 图 表图1 各实验组的脑组织含水量7天龄新生大鼠经左侧颈总动脉结扎、低氧（8%）90分钟，尿酸用药后新生大鼠的患侧脑水肿明显减轻，差异显著（P0.01）。图2 尿酸对新生大鼠缺血缺氧脑损伤后脑梗死体积的影响图2上：对照组无明显梗死区域，UA组的脑梗死体积比率30.071.52%较HI组40.373.25%明显减小（P0.01）。图2下：各实验组脑梗死体积比率柱形图显示，

34、UA组显著小于HI组，UA组与对照组相比仍有明显差异（P0.01）。图3脑的HE染色 皮层（A-C）和海马（D-F）各实验组新生大鼠经缺血缺氧后患侧皮层和海马均用不同放大倍数显示（100和 400）。UA组较HI组可显著减少细胞皱缩、胞核浓缩和神经元数量。参考文献1Felderhoff-Mueser U, Bittigau P, Sifringer M, et al. Oxygen causes cell death in the developing brain J. Neurobiol Dis, 2004, 17(2):273282.2Hintz SR, Kendrick DE, Vohr

35、 BR, et al. Changes in neurodevelopmental outcomes at 18 to 22 months corrected age among infants of less than 25 weeks gestational age born in 19931999J. Pediatrics, 2005,115 (6):16451651.文献综述一一的研究进展综述：王二三 审校：李二三 尿酸，众所周知，是嘌呤代谢的终产物，一般都认为没有任何生理价值。但曾有文献报道尿酸还是DNA、RNA的组成部分，而且还能储存细胞能量-ATP。在人类，血浆中尿酸的浓度(31

36、0 mg/dl)比大部分的哺乳动物(0.52.0 mg/dl)都要尿酸的生成与代谢尿酸盐的合成是黄嘌呤氧化酶和黄嘌呤脱氢酶催化生成的。嘌呤通过中间参考文献1Snchez-Lozada LG, Nakagawa T, Kang DH, et al. Hormonal and cytokine effects of uric acid J. Curr Opin Nephrol Hypertens, 2006, 15 (1):30-33.2Chamorro A, Planas AM, Muner DS, et al.Uric acid administration for neuroprotecti

37、on in patients with acute brain ischemiaJ.Med Hypotheses, 2004,62(2):173176.3Pritsos CA. Cellular distribution, metabolism and regulation of the xanthine oxidoreductase enzyme system J. Chem Biol Interact, 2000, 129(1-2):195-208.致 谢三年的学习生活匆匆而过，回首这段人生最重要的历程的时候，最应该感谢的是支持、鼓励、帮助和指导我的众多人士。是他们的支持、鼓励、帮助和指导助我顺利完成硕士论文与学业，特别在此表达诚挚的谢意。值此论文完成之际, 谨向尊敬的恩师王一一教授以最诚挚的谢意, 衷心感谢您对我的悉心指导, 严格要求与谆谆教诲, 以及生活上的无微不至的关怀。您严谨求实的治学态度, 高尚的医德医风, 宽容豁达的处世风范以及积极进取的生活态度都是我终生学习的榜样。感谢研究生处各位老师的培养和教育！感谢答辩委员会及审稿的各位专家的光临和批评指正！衷心感谢所有曾经给予我关心与帮助的人们！向所有帮助过我的各位老师和朋友致以最诚挚的感谢！深深感谢我的父母，家人及同学，是你们默默的付出、无私的爱是我坚强的后盾，是我前进的动力!