BCA蛋白浓度测定(整理版).doc

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1、BCA蛋白浓度测定 Pierce BCA Protein Assay Kit (试剂盒室温保存)1. 准备BSA标准品 按Table 1配制一系列的蛋白标准品. 原液(stock):取出一个ample(内含2mg/mL的白蛋白标准品 (此量足够3个replication)2.准备BCA工作液(Working Reagent,WR) (1)用公式计算总工作液量(标准品数+待测样品数)*(复制数)*(每个工作液的量)=总的需要的工作液的量例子:3个待测样品,每个样品2个复制所需的工作液量(9个标准品+3个待测样品)*(2个复制数)*(2ml)=48ml工作液Note:试管法:每个试管需2ml工作液

2、 微孔板:每个孔需200ul工作液(例子中需共4.8ml) (2)BCA试剂A:B=50:1配制适量BCA工作液，充分混匀。对于上面的例子,试管法需要50ml BCA A液+1ml BCA B液,微孔板法需5ml A液和1mlB液.B液加到A液中时,迅速浑浊,但是通过混匀立即变成清澈 绿色的工作液.工作液在密闭室温下可以保存数天.3.微孔板步骤(样品与工作液比例=1:8)(1).标准液和样品各25ul加入微孔板中 Note:若样品有限,可各加10ul(样品与工作液比例=1:20)(2).每孔加200ul的工作液并且充分震荡30s。(3).在37度孵育样品30min，或室温2h。(4).冷却至室

3、温。(5).在酶标仪中测量562nm时的吸光值(6).绘制标准曲线，再用标准曲线判断出样品的蛋白浓度。 Note:540-590nm的波长均可 Figure 1: Typical color response curves for BSA and BGG using the Standard Test Tube Protocol (37C/30-minute incubation). 3测 ) / 均波 0: 度蛋出断标， 曲标光的 量标 在温至 冷 温室 品 育 . 0分 并工 孔0:例液品 各,若 板微入 品液 比作与步板天存以室在工.的澈变立通,浑时液液 和 板孔 液 试子上。，工 盒制 =保 ) .子液工 0孔:标孔准作 需管:作工 )(数个*品待 液工所制样个测 的作要需)的每*复*品待液工计用 , ( 足此 标 / : 原品标蛋一配