CCK8法检测细胞增殖预实验.doc

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1、SRT-1720, EX527一定要应用在白血病细胞株起作用的浓度方可比较对293T细胞和白血病细胞株的不同影响，请重复实验。实验日期：2015/08/22-2015/08/27实验项目：CCK8法检测细胞增殖实验地点：广西医科大学药基楼14楼生物靶向中心实验人员：高宗燕、宁海萍、李登峰实验目的：检测SRT-1720/EX527刺激293T细胞后对细胞增殖的影响主要试剂：SRT-1720, EX527,CCK8试剂盒主要仪器：酶标仪实验步骤：一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞至96孔板。2、设置4个细胞浓度梯度：0，2000，

2、4000，8000，每组4个复孔。3、接种后培养24小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养4小时后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。）图一、标准曲线二、细胞增殖检测1、在96孔板中配置100L的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（在37，5% CO2的条件下）。2、向培养板加入10L SRT-1720（终浓度3um）, EX527（终浓度100um）。3、将培养板在培养箱孵育约24h4、每孔加入10L CCK

3、溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。5、将培养板在培养箱内孵育2小时。6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。图二、3um SRT1720刺激293T细胞后的细胞增殖曲线。该曲线呈S形，符合细胞正常生长情况。图三、100um EX527刺激293T细胞后的细胞增殖曲线。该曲线前部分呈S形，符合细胞正常生长情况，但在进入对数期之后曲线有下滑，之后进入平台期。分析：SRT1720为SIRT1特异性活化剂，在前期实验中对白血病细胞株的生长表现出抑制作用，此次实验中SRT1720对正常细胞（293T）的生长无明显抑制作用。暗示SIRT1的活化对正常细胞的生长可能无明显影响。小剂量E

4、X527为SIRT1特异性抑制剂，在前期实验中大剂量EX527对白血病细胞株的生长表现出抑制作用，而小剂量EX527无此效应，此次实验中大剂量EX527对正常细胞（293T）的生长可能有轻度抑制作用。但不能以一次实验结果做出肯定的结论，该实验还需重复。2 复需实该定做果一不用作度能生 正 量中次此 剂，抑出生胞血对 剂实在剂异 响影能长细常的 示。作无长）（胞正 中，制现生株血中期，活异 析期台后滑线曲对进，长胞合 部线该曲细细 刺 0况况常合形线。殖增的 0 度吸处0定标时小育培在）读值影们泡中要注（ 0孔 育培养）0浓 , 浓（- 板）件 在 养养在将液的0配孔 检增曲准。间培 加及种细于致件条是的标试数的知未可曲据线标）标为 ，标横量以出值 后小剂 后壁使 培孔复 0，00 ：梯浓置板 胞接然数中胞备所数细时数具细曲标骤标：剂 0 影殖细胞 0 测的登、海燕：中向物 学医广增细法 目 / 0 ：验复，响株细和 对方的株细血应 , -