T淋巴细胞亚群检测操作程序.doc

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1、一、目的：保证流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证正确的T淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。二、修改程序：本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。三、适用范围：外周血中T淋巴细胞亚群的绝对计数检测。四、实验原理：人的T淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。辅助/诱导T淋巴细胞表达CD3和CD4；抑制/细胞毒T细胞表达CD3和CD8。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以

2、把T淋巴细胞区分为两种亚型，进面得到各亚群的绝对值。六、主要试剂：CD4-FITCCD8-PECD3-APCCD45-PC7 (美国BCs公司；CAT: IM3548)，七、实验操作：1、标本采集：使用EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。2、染色和固定细胞：（1） 标本管编号A，取一只流式专用管A1。（2） A1管加入CD4-FITCCD8-PECD3-APCCD45-PC7 20ul。（3） A1管中再加入全血100ul，混均。（4） 置室温，避光孵育15min。（5） 加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。（6） 300g离心5min，弃上清液。

3、（7） PBS洗涤细胞两次，300g离心5min，弃上清液。3、上机检测；分析结果；打印实验报告。八、参考值：总T细胞（CD3+）： 59.4-84.6辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+): 28.5-60.5抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+): 11.1-38.3Th/Ts: 0.9-3.6九、临床意义：T淋巴细胞可以分为辅助/诱导T细胞和抑制/细胞毒T细胞。测定CD4和CD8可用于化疗、自身免疫病的免疫监视。在造血干细胞移植患者中，CD4+细胞恢复晚于CD8+细胞，导致Th/Ts比例显著下降。HIV及某些病毒感染（EB病毒、SARS病毒等）患者Th/Ts比例也下降显著。十、质量控制：1

4、、 先用标准微球调整仪器，正确设置电压、补偿。2、 健康人CD4+细胞加CD8+细胞总数应大约等于CD3总数；免疫病、淋巴瘤可能有较大差异。3、 收集细胞太少（少于500个）、碎片污染太多（超过10%）、门中淋巴细胞不纯（小于90%）可能引起实验结果不正确。4、 建议使用逻辑设门方法（CD45-SSC设门与FSC-SSC设门）减少杂质的干干扰。授 权 人质 量 主 管操 作 人 员生 效 日 期2 扰扰杂） - 设 方设确正结起） （不淋门0超太片）个少太异大较巴、； 于大总+ 胞 偿偿压正仪调制量著显也 ）病 毒 感些 。著比 胞+于晚+ 者移干血视的免自于用和 测 毒抑细导/以可义床. . . )+ 胞.0- + . . ： 值考告验打；析测液清， 离 次涤液清， 离 育光，0液 育避，均，0 加 - 入 式只 胞胞色 脉，采凝抗-用：采作操) : 公 国 - -剂试值绝群各，种分细淋以即对以光荧，原表细与隆各利 达 胞抑； 胞淋诱辅细毒抑和诱辅大二可的胞能生据巴淋理理测检对亚细中围范动改）任人授质字准下经提人的 一可改程序改度准确的检和程标群胞 确在量作检亚巴 外仪