动物细胞培养和核移植技术ppt课件.ppt

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1、有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合生产单克隆抗体生产单克隆抗体动物细胞核移植动物细胞核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术其中其中动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细是其他动物细胞工程技术的基础胞工程技术的基础有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以

2、顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。一、动物细胞培养一、动物细胞培养1、动物细胞培养概念、动物细胞培养概念 从动物机体中取出相关的从动物机体中取出相关的 ，将它分散成将它分散成 ，然后，放在适，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞宜的培养基中，让这些细胞 。 组织组织单个细胞单个细胞生长和增殖生长和增殖动物胚胎或动物胚胎或幼龄动物的组织、器官幼龄动物的组织、器官细胞生命力旺盛，分裂能力强细胞生命力旺盛，分裂能力强使细胞和培养液充分接触使细胞和培养液充分接触原理：细胞增殖原理：细胞增殖有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价

3、值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。.为什么要把组织剪碎、用为什么要把组织剪碎、用酶分解开？酶分解开？用什么酶？为什么？用胃用什么酶？为什么？用胃蛋白酶行不行？蛋白酶行不行？胰蛋白酶会不会把细胞消胰蛋白酶会不会把细胞消化掉？化掉？为什么要再分装？为什么要再分装？什么是原代培养、传代培什么是原代培养、传代培养？养？培养得到的细胞，如果暂培养得到的细胞，如果暂时不用时，怎么保存？时不用时，怎么保存？试说动物细胞培养的大致试说动物细胞培养的大致过程。过程。2、动物细胞培养的过程、动物细胞培养的过程有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客

4、价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液细胞悬液10代细胞代细胞50代细胞代细胞剪碎胰蛋白酶原代培养用用胰蛋白酶胰蛋白酶分散分散细胞，说明细胞细胞，说明细胞间的物质主要是间的物质主要是蛋白质蛋白质。动物细。动物细胞培养适宜的胞培养适宜的PH为为7.27.4，此环境下胃蛋白此环境下胃蛋白酶（酶（2.0）没有）没有活性，而胰蛋白活性，而胰蛋白酶酶(7.2-8.4)的活的活性较高。性较高。比老龄动比老龄动物的组织物的组织细胞增殖细胞增殖能力强，能力强，有丝分裂有丝分裂旺盛。分旺盛。分化程度越化程度越低，增殖低，增殖能力越

5、强，能力越强，越容易培越容易培养。养。动物细胞培养动物细胞培养不能最终培养不能最终培养成生物体成生物体细胞增殖细胞增殖缓慢，核缓慢，核型可能变型可能变化化动物组织细胞间隙中含有一定动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。和韧性的组织和器官。贴壁生长接触抑制10代以内，保持正常二倍体核型代以内，保持正常二倍体核型传代培养2、动物细胞培养的过程、动物细胞培养的过程无限传代无限传代细胞株细胞株细胞系细胞系有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求

6、为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质外，外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对，对细胞有损伤作用，因此细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶必须控制好胰蛋白酶的消化时间。的消化时间。1.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 寻根问底寻根问底 有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 、细胞株：细胞株：传代培养的细胞一般能传到传代培养的

7、细胞一般能传到10105050代，代，遗传物质没有发生改变遗传物质没有发生改变。 细胞系：细胞系：传代培养的细胞传到传代培养的细胞传到5050代后，代后，有部分细胞的有部分细胞的遗传物质发生改变遗传物质发生改变，并且具有癌，并且具有癌变的特点，能无限地传代下去。变的特点，能无限地传代下去。 细胞株和细胞系的区别：细胞株和细胞系的区别：细胞株的遗传细胞株的遗传物质未改变，存在接触抑制物质未改变，存在接触抑制。一般传至。一般传至1010代后代后就不易传就不易传。细胞系的遗传物质改变细胞系的遗传物质改变，具有癌细，具有癌细胞的特点，胞的特点，失去接触抑制失去接触抑制，无限增殖。，无限增殖。3、动物细

8、胞培养的基本概念、动物细胞培养的基本概念（1 1）细胞株与细胞系）细胞株与细胞系有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。（2 2）原代培养与传代培养）原代培养与传代培养3、动物细胞培养的基本概念、动物细胞培养的基本概念 、原代培养：、原代培养：将动物组织消化将动物组织消化后的后的初次培养初次培养称为原代培养。称为原代培养。 传代培养：传代培养：贴满瓶壁的细胞重新用贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶等处理，然后胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养分瓶继续培养，让细胞继续增殖，称为传代培养。让细胞继续增殖，

9、称为传代培养。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。（3 3）接触抑制）接触抑制3、动物细胞培养的基本概念、动物细胞培养的基本概念 细胞在贴壁生长过细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形数量不断增加，最后形成成一个单层一个单层，此时细胞，此时细胞间间相互接触相互接触，细胞停止，细胞停止分裂增殖，分裂增殖，数量不再增数量不再增加。加。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相

10、互信任的合作环境。细胞细胞悬液悬液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限无限传代传代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系细胞固定在瓶壁上生长和细胞固定在瓶壁上生长和分裂。分裂。随细胞增多，细胞就随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质改变传至传至1010代后不代后不易传下去易传下去 贴壁生长细胞分裂贴壁生长细胞分裂生长到相互接触时就停生长到相互接触时就停止分裂增殖的现象叫接止分裂增殖的现象叫接触抑制。触抑制。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作

11、环境。(1)、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）(2)、营养、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、维生素（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、维生素动物血清等。动物血清等。）(3)、温度和、温度和PH 温度：温度：36.5+（-）0.5, PH：7.27.4(4)、气体环境：、气体环境： O2和和CO2（95%空气和空气和5% CO2 ）4、动物细胞培养的条件、动物细胞培养的条件离体培养的细胞对离体培养的细胞对微生物和有毒物质微生物和有毒物质没有防御能力没有防御能力补充培养基中缺补充培养基中缺乏的物质乏的物质有利于

12、学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1. 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2. 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ P P4646 讨论充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等合成成分及血清等天然成

13、分。）元素等合成成分及血清等天然成分。）适宜温度、适宜温度、PHPH和气体环境；无菌无毒环境和气体环境；无菌无毒环境有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。5、动物细胞培养技术的应用、动物细胞培养技术的应用 （1 1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。干扰素、单克隆抗体等。 （2 2）获得大量自身的皮肤细胞，用于皮）获得大量自身的皮肤细胞，用于皮肤移植。肤移植。 （3 3）用于检测有毒物质。）用于检测有毒物质。 （4 4）用于生理、病理、药理等

14、方面的研究，）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据。为治疗和预防疾病提供理论依据。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。获得细胞或获得细胞或细胞产物细胞产物细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原

15、原 理理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目6、植物细胞和动物细胞培养的比较、植物细胞和动物细胞培养的比较有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 动物细胞特点：动物细胞特点： 分化潜能变窄：分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。而言。 细胞核仍具有全能性：细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细

16、胞种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性。仍具有全能性。 比较植物组织培养和动物细胞培养（原理、比较植物组织培养和动物细胞培养（原理、培养结果）培养结果） ？有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。二、动物体细胞核移植技术和克隆动物二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞的将动物的一个细胞的细胞核细胞核，移入一个已经，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成

17、为中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个动物个体体。（克隆动物）。（克隆动物）分分类类胚胎细胞核移植：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易细胞分化程度低，恢复全能性容易细胞分化程度高，恢复全能性不容易细胞分化程度高，恢复全能性不容易1、动物细胞核移植概念、动物细胞核移植概念有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。卵黄膜1.1.核移植的受体细胞是什么？核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？处在什么

18、时期？2.2.通过什么手段激活受体细胞，通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？构建重组胚胎？ M M中期卵母细胞中期卵母细胞诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂和发育进程。细胞分裂和发育进程。3.3.原理：原理：4.4.为什么选择卵母细胞作为核移植的受体细胞？为什么选择卵母细胞作为核移植的受体细胞？细胞核的全能性细胞核的全能性卵母细胞体积大、易操作，含有促使细胞核表达全卵母细胞体积大、易操作，含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。能性的物质和营养条件。2、动物细胞核移植的过程、动物细胞核移植的过程图图2-21有利于学习和创新的组织管

19、理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。体细胞体细胞培养培养取出核取出核甲牛甲牛乙牛乙牛M中中期卵母期卵母细胞细胞去除核去除核去核卵去核卵母细胞母细胞重组重组卵细胞卵细胞核植入核植入卵裂卵裂早期早期胚胎胚胎代孕母牛丙代孕母牛丙移植移植体细胞群体细胞群克隆牛克隆牛细胞核移植细胞核移植胚胎移植胚胎移植物理或化学方法激活物理或化学方法激活2、体细胞核移植的过程、体细胞核移植的过程有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。供体

20、细胞供体细胞（供核）（供核）细胞培养细胞培养体细胞体细胞 卵巢卵母细胞卵巢卵母细胞（MM中期：供质）中期：供质）去核去核无核卵无核卵母细胞母细胞注入注入重重组组细细胞胞构建重组构建重组胚胎胚胎胚胎胚胎移植移植代孕代孕母体母体生出与供体奶生出与供体奶牛遗传基础相牛遗传基础相同的犊牛同的犊牛归纳归纳: a.a.共分成两大阶段：共分成两大阶段：核移植核移植和和胚胎移植胚胎移植 b.b.取卵母细胞作受体细胞的取卵母细胞作受体细胞的原因原因是是: :卵母细胞体卵母细胞体积大、易操作，含有促使细胞核表达全能性的物质和积大、易操作，含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。营养条件。 c.c.严格来说新个体

21、有母细胞的细胞质严格来说新个体有母细胞的细胞质, ,所以严格所以严格上说还上说还有些母本的性状有些母本的性状。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。P P4949 为使核移植的胚胎或动物的为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移至，在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。坏。1.1.在体细胞的细胞核移植到受

22、体卵母细胞之前，在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？2.2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代用于核移植的供体细胞一般都选用传代1010代代以内的细胞，想一想，这是为什么？以内的细胞，想一想，这是为什么？ 培养的动物细胞一般当传代至培养的动物细胞一般当传代至10105050代左右时，部代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而生突变，而1010代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。型。因此，在体细胞核移植中，为

23、了保证供体细胞正常因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代的遗传基础，通常采用传代1010代以内的细胞。代以内的细胞。讨论有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。3、体细胞核移植技术的应用前景、体细胞核移植技术的应用前景（1）、在畜牧业中可以）、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程加速家畜遗传改良的进程。（2）、保护濒危物种。）、保护濒危物种。（3）、医药卫生领域）、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织生产医用蛋白质及组织器官的移植。器官的移植。（作为供体作为供体）（4

24、）、了解胚胎发育和衰老过程；）、了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病。病。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。4、体细胞核移植技术存在的问题、体细胞核移植技术存在的问题（3 3）、克隆动物食品的安全性问题）、克隆动物食品的安全性问题 （1 1）、成功率非常低）、成功率非常低 （2 2）、克隆个体的健康问题）、克隆个体的健康问题 有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖

25、既开放又相互信任的合作环境。本节知识结构本节知识结构 动物细动物细胞培养胞培养和核移和核移植技术植技术动物细胞培养动物细胞培养动物体细动物体细胞核移植胞核移植技术和克技术和克隆动物隆动物核移植技术和克隆动物的概念核移植技术和克隆动物的概念体细胞核移植技术的过程体细胞核移植技术的过程体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题细胞培养的概念细胞培养的概念细胞培养的过程细胞培养的过程细胞培养的条件细胞培养的条件细胞培养技术的应用细胞培养技术的应用有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心

26、的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 1. 1.幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？思考一下，这是什么道理？于培养？思考一下，这是什么道理？ 细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老幼年动物

27、的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。养。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变 的细胞是的细胞是 A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客

28、价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 2. 2.关于动物细胞培养的错误叙述是关于动物细胞培养的错误叙述是 A.A.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动 物的器官或组织物的器官或组织 B.B.将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理 使其分散成单个细胞使其分散成单个细胞 C.C.在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从 瓶壁上脱离，制成悬浮液瓶壁上脱离，制成悬浮液 D.D.动物细胞培养只能传动物细胞培养只能传5050代左右，所培育代左右，所培育 的细胞会衰老死亡的细胞会衰老死亡有利于

29、学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。3 3、用动、植物的体细胞进行离体培养，下列、用动、植物的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是叙述正确的是 A. A.都要用到都要用到COCO2 2培养箱培养箱 B. B.都须用液体培养基都须用液体培养基 C. C.都要在无菌条件下进行都要在无菌条件下进行 D. D.都可体现细胞的全能性都可体现细胞的全能性有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。4. （200

30、7年海南高考年海南高考）某研究小组进行药物试验时，以动物肝）某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：请回答下列有关动物细胞培养的问题： （1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细

31、胞的数量量比乙细胞的数量 。 （2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，清，其原因是其原因是 。细胞培养应在含细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，的恒温培养箱中进行，CO2的作用的作用是是 。多多血清可以补充合成培养基中缺乏的物质血清可以补充合成培养基中缺乏的物质维持培养液维持培养液pH 有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 （3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其

32、 生长生长 。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更甲细胞比乙细胞可以传代的次数更 。若用动物的肝脏。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用组织块制备肝细胞悬液，需用 消化处理。消化处理。 （4）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的中加入适量的 。 （5）已知癌基因）已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为分为A、

33、B两组，两组，A组细胞培养液中加入组细胞培养液中加入 ，B组细胞组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等两组收集等量细胞，通过分别检测量细胞，通过分别检测X基因在基因在A、B两组细胞中的两组细胞中的 或或者者 合成水平的差异，确定合成水平的差异，确定Y的药效。的药效。4. （2007年海南高考年海南高考）某研究小组进行药物试验时，以动物肝）某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。有甲

34、、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：请回答下列有关动物细胞培养的问题：停止停止多多胰蛋白酶胰蛋白酶抗生素抗生素药物药物Y mRNA蛋白质蛋白质有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了是对体细

35、胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？ 绝大部分绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还来自于供体细胞核，但其核外还有少量的有少量的DNA，即，即线粒体中的线粒体中的DNA是来自于受体是来自于受体卵母细胞。卵母细胞。 此外，即便动物的遗传基础完全相同，但此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供，核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完相同，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物

36、完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物全相同，从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物100%的复制。的复制。P P4949 讨论有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 1. 1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？用胃蛋白酶行吗？P44旁栏旁栏 用胰蛋白酶分散细胞，说明用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜要是蛋

37、白质。胃蛋白酶作用的适宜pHpH约为约为2 2，当，当pHpH大于大于6 6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境的适宜环境pHpH为为7.27.28.48.4。多数动物细胞培养的。多数动物细胞培养的适宜适宜pHpH为为7.27.27.47.4，胃蛋白酶在此环境中没有活，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。白酶适宜用于细胞培养时的消化。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依

38、赖既开放又相互信任的合作环境。P46旁栏旁栏2.2.为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白；氨素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白；氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞不能合成（称为必需其中有些氨基酸动物细胞不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供；血清激素有胰氨基酸），必须由培养液提供；血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子，促进细胞岛素、生长激素等及多种生长因子

39、，促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能顺利生长和繁殖，一般要添加保证细胞能顺利生长和繁殖，一般要添加10%-10%-20%-20%的血清。的血清。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。2.2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？ 动物细胞培养动物细胞培养不需经过脱分化过程。不需经过脱分化过程。因高度因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育

40、成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。3.19973.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（叫卢辛达（Luc

41、indaLucinda）的奶牛，年产奶量为）的奶牛，年产奶量为30.8 t30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为我国奶牛产奶量年平均水平仅为3 34 t4 t。（1 1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。吗？请说明理由。可以。可以。卢辛达的产奶量很高，有高产奶的遗传基卢辛达的产奶量很高，有高产奶的遗传基础，础，利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质利用卢

42、辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全部来自该奶牛，基本上全部来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗其克隆牛具有高产的遗传基础，如果精心培育和饲养，有可能在世界范传基础，如果精心培育和饲养，有可能在世界范围内推广，围内推广，克隆牛再与高产的公牛自然繁殖克隆牛再与高产的公牛自然繁殖，可，可得到很多高产的后代，从而加快奶牛改良进程。得到很多高产的后代，从而加快奶牛改良进程。该克隆牛不能无限制地推广，该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多，其数量不宜过多，尤其是在小范围内不能无限的繁殖，尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛以避免奶牛群出现近亲繁殖而引起种质衰退。群出现近亲繁殖而引起种质衰退。有利

43、于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。（2 2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？你将如何对它进行克隆？ 从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外朵在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠宰培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成熟。场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成

44、熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细胞注入卵用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与体细胞融合，母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细胞，再用电刺激这时供体核就进入了受体卵母细胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使其完成细胞分裂和发育过程。核移植胚胎在体外其完成细胞分裂和发育过程。核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。发情处理的受体母牛体内。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满

45、活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 4. 4.体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什么问题？请你查阅资料，了解这方面的前沿动态。么问题？请你查阅资料，了解这方面的前沿动态。 研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制尚研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研究中。究中。 应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模应应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距离。用还有一定距离。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育过程多莉羊的培育过程融合后的卵细胞融合后的卵细胞核移植技术核移植技术