层析分离法ppt课件.ppt

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1、色层分离法基本原理色层分离法基本原理色层分离法基本原理分子筛层析示意图分子筛层析示意图t1t0t1t2t0t0t3t1t2t0分子量： 柱层析分离法的有关装置柱层析分离法的有关装置 n层析材料的准备:n装柱前用溶剂平衡 凝胶层析材料：溶胀 吸附剂：加热或酸处理 离子交换剂：酸碱处理 在用溶剂平衡时，先使材料沉淀，用倾泻法除去悬浮的细颗粒，否则由于细颗粒的堵塞，溶剂的流速将显著降低。 避免分层沿着玻棒倾注关闭出口用溶剂灌注至13体积加浆状物放出过多溶剂 如二次填装，应先在已经沉淀的表面用玻棒搅拌后再倾注。n用溶剂彻底洗涤层析柱后使液面降到比层析床表面略高一点。减少样品溶液体积，使区带狭窄 逐渐改

2、变溶剂的性质，形成一个离子强度、pH或极性的递增梯度从而使各组分依次被洗脱减少拖尾现象Elution (ml)Protein (mg/ml)NaCl (mol/L)00.20.40.60.800.20.40.60.8104080120160200240Na ClProtein恒定洗脱恒定洗脱 Volume (ml)Protein (mg/ml)NaCl (mol/L)00.10.20.30.400.20.40.60.804080120160200240NaClProtein分步洗脱分步洗脱 Volume (ml)Protein（mg/ml)NaCl (mol/L)00.10.20.30.40.

3、50.600.10.20.30.40.50.60.704080120160200240ProteinNaCl 梯度洗脱梯度洗脱 部分收集部分收集器：使每管按预定时间或滴数收集流出液，然后自动移位，下一管再继续收集。每一部分的蛋白质或核酸的含量可以让流出液通过一个流动小室测定其280 nm或260 nm的光吸收来进行连续监测。 溴化氰活化与配基偶联化学反应式溴化氰活化与配基偶联化学反应式 环氧氯丙烷活化反应式环氧氯丙烷活化反应式 环氧基的氨化及偶联配基反应 对甲苯磺酰氯活化反应式NH2CCOOOCH3CH3+H2ONH-O-C-CH3OCH3OCOH+手臂氨末端的掩蔽手臂氨末端的掩蔽 残留羧基掩蔽反应残留羧基掩蔽反应 疏水层析介质制备过程示意图疏水层析介质制备过程示意图 (a) 谷胱甘肽二硫键层析剂谷胱甘肽二硫键层析剂 （b） 巯丙基型二硫键层析剂巯丙基型二硫键层析剂