巴比妥类药物含量测定ppt课件.ppt

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1、含量测定含量测定(Assay) 银量法银量法 溴量法溴量法 巴比妥类药物的含巴比妥类药物的含 酸碱滴定法酸碱滴定法 量测定方法量测定方法 紫外分光光度法紫外分光光度法 提取重量法提取重量法 HPLCHPLC法、法、GCGC法法 （一）（一）银量法银量法 基于巴比妥类药物在合适的碱性溶液中，基于巴比妥类药物在合适的碱性溶液中，可与银离子定量成盐，可采用银量法测定本可与银离子定量成盐，可采用银量法测定本类药物及其制剂的含量。如苯巴比妥及其钠类药物及其制剂的含量。如苯巴比妥及其钠盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制剂，盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制剂，中国药典均采用银量法测定其含量。中国药典均采用

2、银量法测定其含量。 优点优点：操作简便，专属性较强。：操作简便，专属性较强。 缺点缺点：受温度影响较大；滴定终点以溶液出：受温度影响较大；滴定终点以溶液出现浑浊为终点指示难以观察。现浑浊为终点指示难以观察。 1.1.原理原理 反应摩尔比：反应摩尔比：1:11:1 溶剂系统：甲醇溶剂系统：甲醇3 3无水碳酸钠无水碳酸钠 终点指示：电位法指示（终点指示：电位法指示（AgAg玻璃电极系统）玻璃电极系统） 自身指示法自身指示法 0.2g甲醇甲醇 40ml3%无水碳酸钠无水碳酸钠电位滴定法(AgNO3)指示电极(Ag)参比电极(玻璃/甘汞) 2.2.测定方法与计算测定方法与计算 例如例如: :异戊巴比妥

3、及其钠盐的测定：异戊巴比妥及其钠盐的测定： 取本品约取本品约0.2g 0.2g 加甲醇加甲醇40ml40ml使溶解使溶解 新鲜配制的新鲜配制的3%3%无无水碳酸钠溶液水碳酸钠溶液15ml15ml，照电位法，用硝酸银滴定液，照电位法，用硝酸银滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）滴定，即得。每）滴定，即得。每1ml1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）相当于）相当于22.63mg22.63mg的的C C1111H H1818N N2 2O O3 3（或（或24.83mg24.83mg的的C C1111H H1717N N2 2NaONaO3 3）。）。 原料药：直

4、接滴定法（容量分析法）原料药：直接滴定法（容量分析法） %100%WTfVD 3. 3. 注意事项注意事项 （1 1）无水碳酸钠应新鲜配制）无水碳酸钠应新鲜配制 （2 2）硝酸银滴定液应新鲜配制）硝酸银滴定液应新鲜配制2022-8-4Analysis of Barbitals Drugs8 （二）（二）溴量法溴量法 凡在凡在5 5位取代基含有不饱和键的巴比妥类药物，位取代基含有不饱和键的巴比妥类药物，其不饱和键能与溴定量地发生加成反应，故可采用其不饱和键能与溴定量地发生加成反应，故可采用溴量法测定其含量。中国药典收载的溴量法测定其含量。中国药典收载的司可巴比妥钠司可巴比妥钠采用本法测定。其测定

5、原理可用下列反应式表示：采用本法测定。其测定原理可用下列反应式表示： NaOCH2CH3CH3NNOHOOHONNCH3CH3CH2NaO+ Br2Br Br（定量过量）（定量过量）Br2 + 2KI 2KBr + I2（剩余）（剩余）I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6 取本品约取本品约0.1g，精密称定，置，精密称定，置250ml碘瓶中，加水碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加，振摇使溶解，精密加溴滴定液溴滴定液（0.1mol/L）25ml，再加，再加盐酸盐酸5ml，立即密塞并振摇，立即密塞并振摇1min，在，在暗暗处静置处静置15min后，注意微开瓶塞，加后，注意

6、微开瓶塞，加碘化钾碘化钾试液试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校空白试验校正正。每。每1ml溴滴定液（溴滴定液（0.1mo1/L）相当于）相当于13.01mg的的C12H17N2NaO3。NHNOONaOCH2CH3CH32Na2S2O3 原料药原料药 剩余滴定法剩余滴定法%100%WTfVVD样空mlmg01.132molg27.260Lmol1 . 0ncMTKBrO35KBr

7、6HCl3Br26KCl3H2O 溴滴定液（0.1 mol/L）的配制 取溴酸钾3.0 g与溴化钾15 g，加水适量使溶解成1000 ml，摇匀。 （三）（三）酸碱滴定法（酸量法）酸碱滴定法（酸量法） 巴比妥类药物呈弱酸性，可作为一元酸以标巴比妥类药物呈弱酸性，可作为一元酸以标准碱液直接滴定，或在非水溶液中用强碱溶液直准碱液直接滴定，或在非水溶液中用强碱溶液直接滴定。常用的方法如下：接滴定。常用的方法如下： 1. 1. 在在水乙醇混合溶剂水乙醇混合溶剂中滴定中滴定 基于本类药物在水中的溶解度较小，滴定时基于本类药物在水中的溶解度较小，滴定时多在醇溶液或含水的醇溶液中进行，这样可避免多在醇溶液或

8、含水的醇溶液中进行，这样可避免反应中产生的弱酸盐易于水解而影响滴定终点。反应中产生的弱酸盐易于水解而影响滴定终点。常以麝香草酚酞为指示剂，滴定至淡蓝色为终点。常以麝香草酚酞为指示剂，滴定至淡蓝色为终点。异戊巴异戊巴比妥比妥水水醇醇溶解溶解麝香草酚酞NaOH淡蓝色1.1.水水- -乙醇混合溶液乙醇混合溶液HNHNOOOCH3CH3CH3+NaOHHNHNNaOOOCH3CH3CH3+H2O 本法是在有机表面活性剂的胶束水溶液中进本法是在有机表面活性剂的胶束水溶液中进行滴定，用指示剂或电位法指示终点。常用行滴定，用指示剂或电位法指示终点。常用的有机表面活性剂有：溴化十六烷基三甲基的有机表面活性剂有

9、：溴化十六烷基三甲基苄铵苄铵(CTMA)(CTMA)和氯化四癸基二甲基苄铵和氯化四癸基二甲基苄铵(TDBA)(TDBA)。 采用本法测定巴比妥和苯巴比妥的结果采用本法测定巴比妥和苯巴比妥的结果的相对标准差（的相对标准差（RSDRSD）均小于）均小于0.3%0.3%，并优于在，并优于在水水- -乙醇混合溶液中的滴定方法。乙醇混合溶液中的滴定方法。原料药原料药 直接滴定法（有空白校正）直接滴定法（有空白校正）%100)(%0WfVVTDT T滴定度，每滴定度，每1ml1ml滴定液相当于被测组分的滴定液相当于被测组分的mgmg数数 V V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（滴定时，供试品消耗滴定液的体积

10、（mlml）V VO O滴定时，空白消耗滴定液的体积（滴定时，空白消耗滴定液的体积（mlml）f f浓度校正因子浓度校正因子 2. 2. 在胶束水溶液中滴定在胶束水溶液中滴定 表面活性剂是一种所谓表面活性剂是一种所谓“两亲两亲”分子，即其分子是由分子，即其分子是由亲水基团和亲脂基团两部分组成。当表面活性剂在水亲水基团和亲脂基团两部分组成。当表面活性剂在水溶液中溶液中浓度很低时浓度很低时，基本上呈，基本上呈单分子单分子状态存在，但当状态存在，但当超过某一浓度时（临界胶束浓度），多余的表面活性超过某一浓度时（临界胶束浓度），多余的表面活性剂分子在溶液中不再分散，而是聚集成有一定分子组剂分子在溶液中

11、不再分散，而是聚集成有一定分子组成数的聚集物，称为胶束或胶团。成数的聚集物，称为胶束或胶团。 胶束具有增溶作用，水溶液中胶束的存在能使不胶束具有增溶作用，水溶液中胶束的存在能使不溶或微溶于水的有机化合物的溶解度增加，并显著改溶或微溶于水的有机化合物的溶解度增加，并显著改变弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强。变弱酸、弱碱性物质的解离，使其酸碱性增强。正胶束反胶束H2O溴化十六烷基三甲基苄铵Cetyltrimethylbenzylammonium bromide，CTMA氯化四癸基二甲基苄铵Tetradecyldimethylbenzylammonium chloride，TDBA巴比妥类表面

12、活性剂溶解麝香草酚酞指示剂NaOH滴定采用本法测定巴比妥和苯巴比妥的结果的相对标采用本法测定巴比妥和苯巴比妥的结果的相对标准差（准差（RSDRSD）均小于）均小于0.3%0.3%，并优于在水，并优于在水- -乙醇混乙醇混合溶液中的滴定方法。合溶液中的滴定方法。 3. 3. 非水滴定法非水滴定法 巴比妥类药物在非水溶液中的酸性增强，用巴比妥类药物在非水溶液中的酸性增强，用碱性标准溶液滴定时，终点较为明显，可获得比碱性标准溶液滴定时，终点较为明显，可获得比较满意的结果。测定时常用的有机溶剂有较满意的结果。测定时常用的有机溶剂有二甲基二甲基甲酰胺甲酰胺、甲醇、氯仿、丙酮、无水乙醇、苯、吡、甲醇、氯仿

13、、丙酮、无水乙醇、苯、吡啶、甲醇啶、甲醇- -苯（苯（1515?8585）、乙醇）、乙醇- -氯仿（氯仿（1 1?1010）等；）等；常用的滴定剂有常用的滴定剂有甲醇钾甲醇钾（钠）的甲醇（或乙醇）（钠）的甲醇（或乙醇）溶液、氢氧化四丁基铵的氯苯溶液等；常用的指溶液、氢氧化四丁基铵的氯苯溶液等；常用的指示剂为示剂为麝香草酚蓝麝香草酚蓝等，也可用玻璃等，也可用玻璃- -甘汞电极系甘汞电极系统，以电位法指示终点。统，以电位法指示终点。 （四）紫外分光光度法（四）紫外分光光度法 巴比妥类药物在酸性介质中几乎不电离，无明巴比妥类药物在酸性介质中几乎不电离，无明显的紫外吸收。但在碱性介质中电离为具有紫外吸

14、显的紫外吸收。但在碱性介质中电离为具有紫外吸收特征的结构，因而可采用紫外分光光度法测定其收特征的结构，因而可采用紫外分光光度法测定其含量。本法灵敏度高，专属性强，广泛应用于巴比含量。本法灵敏度高，专属性强，广泛应用于巴比妥类药物的妥类药物的原料及其制剂的含量测定原料及其制剂的含量测定，以及固体制，以及固体制剂的溶出度和含量均匀度检查，也常用于体内巴比剂的溶出度和含量均匀度检查，也常用于体内巴比妥类药物的检测。妥类药物的检测。(4) 紫外分光光度法 药名max(nm)E巴比妥240538苯巴比妥253320戊巴比妥240310异戊巴比妥238440司可巴比妥240330硫喷妥305930NaOH

15、溶液(0.1mol/L)溶剂pH9.4硼酸盐缓冲液pH9.4硼酸盐缓冲液u直接测定的直接测定的UVUV法法u提取分离后的提取分离后的UVUV法法 1. 1. 直接测定的紫外分光光度法直接测定的紫外分光光度法 本法是将供试品溶解后，根据溶液的本法是将供试品溶解后，根据溶液的pHpH，在最大吸收波长（在最大吸收波长（maxmax）处，直接测定对照）处，直接测定对照品溶液和供试品溶液的吸收度，再计算药物品溶液和供试品溶液的吸收度，再计算药物的含量。中国药典对注射用硫喷妥钠的含量的含量。中国药典对注射用硫喷妥钠的含量测定采用本法。测定采用本法。 Beer-LambertBeer-Lambert定律定律

16、 A = -A = -T =ElC ACT =ElC AC 单组分定量的方法单组分定量的方法：A A、吸收系数法（绝对法）、吸收系数法（绝对法）clEA%1cm1lEAc1%1cm)g/100ml(100)g/ml(1%1cmlEAc B B、标准曲线法、标准曲线法 C C、对照法、对照法lcElcEAA对供对供%1cm1%1cm1供对供对CCAA对对供供CAAC注射用硫喷妥钠含量测定取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量适量( (约相当于硫喷妥钠约相当于硫喷妥钠0.25g) )，置，置500ml量瓶中，摇匀，量瓶中，摇匀，量取此溶液用量取此溶

17、液用0.4% NaOH溶液定量稀释制成每溶液定量稀释制成每1ml中中约含约含5g的溶液；的溶液；另取另取硫喷妥硫喷妥对照品对照品，精密称定，加，精密称定，加0.4%NaOH溶液溶溶液溶解并定量稀释制成每解并定量稀释制成每1ml中约含中约含5g的溶液。的溶液。用用1cm吸收池，于吸收池，于304nm波长处分别测定吸收度，以波长处分别测定吸收度，以0.4% NaOH溶液作空白。根据每支的平均装量计算。溶液作空白。根据每支的平均装量计算。每每1mg1mg的硫喷妥钠相当于的硫喷妥钠相当于1.091mg的的C11H19N2NaO2S 2. 2. 提取分离后的紫外分光光度法提取分离后的紫外分光光度法 提取

18、分离的提取分离的主要目的主要目的是消除干扰物质对测定的影响。根据是消除干扰物质对测定的影响。根据巴比妥类药物具有弱酸性，在氯仿等有机溶剂中易溶，而其巴比妥类药物具有弱酸性，在氯仿等有机溶剂中易溶，而其钠盐在水中易溶的特点。测定时取供试液适量，加酸酸化后，钠盐在水中易溶的特点。测定时取供试液适量，加酸酸化后，用氯仿提取巴比妥类药物。氯仿提取液加用氯仿提取巴比妥类药物。氯仿提取液加pH7.2pH7.27.57.5缓冲溶缓冲溶液，振摇，分离弃去水相缓冲液层。再用液，振摇，分离弃去水相缓冲液层。再用0.45mol/L0.45mol/L氢氧化钠氢氧化钠溶液提取氯仿层中的巴比妥类药物，将碱提取液调节至适宜

19、溶液提取氯仿层中的巴比妥类药物，将碱提取液调节至适宜pHpH，然后选择相应的吸收波长进行测定。，然后选择相应的吸收波长进行测定。 USP USP（2424）对苯巴比妥钠的含量测定采用本法）对苯巴比妥钠的含量测定采用本法 样品样品 溶解溶解 酸化酸化 氯仿提取氯仿提取 精密量取适量精密量取适量氯仿液氯仿液 蒸气浴上挥干蒸气浴上挥干 乙醇、乙醇、pH9.6pH9.6缓冲液缓冲液 供试品溶液（样品液）供试品溶液（样品液） 苯巴比妥对照品苯巴比妥对照品 乙醇、乙醇、pH9.6pH9.6缓冲液缓冲液 标准溶液标准溶液（对照液）（对照液） 240nm240nm为测定波长为测定波长对样对苯巴比妥钠（AACm

20、g095. 15)( (三三) )高效液相色谱法高效液相色谱法色谱条件与系统适用性试验：用辛烷基硅烷键合色谱条件与系统适用性试验：用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈硅胶为填充剂；以乙腈- -水（水（30:7030:70）为流动相；检）为流动相；检测波长为测波长为220nm220nm。理论塔板数按苯巴比妥峰计算不。理论塔板数按苯巴比妥峰计算不低于低于20002000，苯巴比妥与相邻色谱峰的分离度应符合，苯巴比妥与相邻色谱峰的分离度应符合要求。要求。( (三三) )高效液相色谱法高效液相色谱法测定法：取本品测定法：取本品2020片，精密称定，研细，精密称片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于苯巴比妥取适量（约相当于苯巴比妥30mg30mg），置），置50ml50ml容量瓶容量瓶中，加流动相适量，超声处理中，加流动相适量，超声处理2020分钟使苯巴比妥溶分钟使苯巴比妥溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液密量取滤液1ml1ml，置，置10ml10ml烧瓶中，用流动相稀释至烧瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取刻度，摇匀，精密量取10l10l，注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，记录色谱图。记录色谱图。另取苯巴比妥对照品，精密称定，按外标法以峰另取苯巴比妥对照品，精密称定，按外标法以峰面积计算，即得。面积计算，即得。