常见微生物培养基.doc

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1、-/常见微生物培养基 培养基Medium是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐包括微量元素以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。 按所用原料不同可分为两类应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的称为天然培养基应用化学药品配成并标明成分的称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保管现在均改制成粉末。培养基由于配制的原料不同使用要求不同而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后易被细菌污染或分解变质因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基如组织培养基较长时间的贮

2、存必须放在26。C的冰箱内。 常见培养基有 1、细菌培养基 配方一 牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏0.3克 蛋白胨1.0克氯化钠 0.5克琼脂 1.5克 水 100毫升 在烧杯内加水100毫升放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠用蜡笔在烧杯外作上记号后放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后加入琼脂不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.27.6,分装在各个试管里加棉花塞用高压蒸汽灭菌30分钟。 配方二 马铃薯培养基 取新鲜牛心除去脂肪和血管250克用刀细细剁成肉末后加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号煮沸转用文火炖2小时。过滤滤出的肉末干燥处理滤液pH

3、值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心灭菌备用。 配方三 根瘤菌培养基 葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克 碳酸钙 3克 硫酸镁 0.2克 酵母粉 0.4克 琼脂 20克 水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升 先把琼脂加水煮沸溶解然后分别加入其他组分搅拌使溶解后分装灭菌备用。 2、放线菌培养基 配方一 淀粉琼脂培养基高氏培养基 可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克 磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克 硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克 琼脂 2克 水 100毫升 先把淀粉放在烧杯里用5毫升水调成糊状后倒入95毫升水搅匀后加入其他药品使它溶解。在烧杯

4、外做好记号加热到煮沸时加入琼脂不停搅拌待琼脂完全溶解后补足失水。调整pH值到7.27.4分装后灭菌备用。 配方二 面粉琼脂培养基 面粉 60克 琼脂 20克 水 1000毫升 把面粉用水调成糊状加水到500毫升放在文火上煮30分钟。另取500毫升水放入琼脂加热煮沸到溶解后把两液调匀补充水分调整pH值到7.4分装灭菌备用。 3、真菌培养基 配方一 萨市Sabourauds培养基 蛋白胨 10克 琼脂 20克 麦芽糖 40克 水 1000毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后加热不断搅拌待琼脂溶解后加入40克麦芽糖或葡萄糖搅拌使它溶解然后分装灭菌备用。 本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。 配方二 马铃薯糖

5、琼脂培养基 把马铃薯洗净去皮取200克切成小块加水1000毫升煮沸半小时后补足水分。在滤液中加入10克琼脂煮沸溶解后加糖20克用于培养霉菌的加入蔗糖用于培养酵母菌的加入葡萄糖补足水分分装灭菌备用。 把这培养基的pH值调到7.27.4配方中的糖如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 配方三 黄豆芽汁培养基 黄豆芽 100克 琼脂 15克 葡萄糖 20克 水 1000毫升 洗净黄豆芽加水煮沸30分钟。用纱布过滤滤液中加入琼脂加热溶解后放入糖搅拌使它溶解补足水分到1000毫升分装灭菌备用。 把这培养基的pH值调到7.27.4可用来培养细菌和放线菌。配方四 豌豆琼脂培养基 豌豆 80粒 琼脂 5克

6、水 200毫升 取80粒干豌豆加水煮沸1小时用纱布过滤后在滤液中加入琼脂煮沸到溶解分装灭菌备用。 4、食用菌菌种培养基 配方一 马铃薯蔗糖-琼脂培养基 20%马铃薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 琼脂 18克 把马铃薯洗净去皮后切成小块。称取马铃薯小块200克加水1000毫升煮沸20分钟后过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖煮沸使它溶解后补足水分分装灭菌备用。使用该培养基对pH值要求不严格可以不测定。 配方二 综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克 葡萄糖 20克 维生素 10毫克 琼脂 18克

7、 先配制20%马铃薯煮汁方法同上。在煮汁中加入上述各种组分加热溶解后补足水分调整pH值到6。分装灭菌备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。 5.烟草的培养基 在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽 CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化 愈伤组织诱导培养基制备 以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20母液100mL,微量元素100母液20mL,铁盐100母液20mL ,维生素100母液20mL,肌醇200母液10mL,甘氨酸200母液10mL,配制得MS培养

8、基后,再加入0.5mgL-1的BA8mL,0.5mgL-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5molL-1的NaOH和0.5 molL-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中. 烟草叶片愈伤组织诱导 取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解 剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种 5小片,一共接种6瓶.接种后的三角平置于24条件下黑

9、暗培养1周,然后在同 样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观 察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率. 器官分化及植株再生培养 将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22 C条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况. 愈伤组织诱导的总体情况 烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而 未形成愈伤的情况.具体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发 生污染,但诱导率几乎各不相同.其中, 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为 60.0, 在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过

10、程中,外植 体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整 个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小. 特殊培养基 一 选择性培养基 1酵母菌富集培养基 葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化铵0.1% 磷酸二氢钾0.25% 磷酸氢二钠0.05% 七水合硫酸镁0.1% 七水合硫酸铁0.01% 酵母膏0.05% 孟加拉红0.003% pH4.5 2 Ashby无氮培养基 富集好养自生固氮菌 甘露醇1% 磷酸二氢钾0.02% 七水合硫酸镁0.02% 氯化钠0.02% 二水合硫酸钙0.01% 碳酸钙0.5% 二 鉴别培养基 EMB培养基常用于鉴别E.coli 蛋白胨 10g 乳糖5g

11、 蔗糖5g 磷酸氢二钾2g 伊红Y 0.4g 美蓝0.065g 蒸馏水1000g pH7.2 分离海洋微生物的培养基配方 2216E培养基配方固体培养基 蛋白胨 5克 酵母膏 1克 磷酸高铁 0.01克 琼脂 15-20克 培养基Medium是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐包括微量元素以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。 按所用原料不同可分为两类应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的称为天然培养基应用化学药品配成并标明成分的称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保管现在均改制成粉

12、末。培养基由于配制的原料不同使用要求不同而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后易被细菌污染或分解变质因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基如组织培养基较长时间的贮存必须放在26。C的冰箱内。 常见培养基有 1、细菌培养基 配方一 牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏0.3克 蛋白胨1.0克氯化钠 0.5克琼脂 1.5克 水 100毫升 在烧杯内加水100毫升放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠用蜡笔在烧杯外作上记号后放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后加入琼脂不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.27.6,分装在各个试管里加棉花

13、塞用高压蒸汽灭菌30分钟。 配方二 马铃薯培养基 取新鲜牛心除去脂肪和血管250克用刀细细剁成肉末后加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号煮沸转用文火炖2小时。过滤滤出的肉末干燥处理滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心灭菌备用。 配方三 根瘤菌培养基 葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克 碳酸钙 3克 硫酸镁 0.2克 酵母粉 0.4克 琼脂 20克 水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升 先把琼脂加水煮沸溶解然后分别加入其他组分搅拌使溶解后分装灭菌备用。 2、放线菌培养基 配方一 淀粉琼脂培养基高氏培养基 可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克

14、磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克 硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克 琼脂 2克 水 100毫升 先把淀粉放在烧杯里用5毫升水调成糊状后倒入95毫升水搅匀后加入其他药品使它溶解。在烧杯外做好记号加热到煮沸时加入琼脂不停搅拌待琼脂完全溶解后补足失水。调整pH值到7.27.4分装后灭菌备用。 配方二 面粉琼脂培养基 面粉 60克 琼脂 20克 水 1000毫升 把面粉用水调成糊状加水到500毫升放在文火上煮30分钟。另取500毫升水放入琼脂加热煮沸到溶解后把两液调匀补充水分调整pH值到7.4分装灭菌备用。 3、真菌培养基 配方一 萨市Sabourauds培养基 蛋白胨 10克 琼

15、脂 20克 麦芽糖 40克 水 1000毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后加热不断搅拌待琼脂溶解后加入40克麦芽糖或葡萄糖搅拌使它溶解然后分装灭菌备用。 本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。 配方二 马铃薯糖琼脂培养基 把马铃薯洗净去皮取200克切成小块加水1000毫升煮沸半小时后补足水分。在滤液中加入10克琼脂煮沸溶解后加糖20克用于培养霉菌的加入蔗糖用于培养酵母菌的加入葡萄糖补足水分分装灭菌备用。 把这培养基的pH值调到7.27.4配方中的糖如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 配方三 黄豆芽汁培养基 黄豆芽 100克 琼脂 15克 葡萄糖 20克 水 1000毫升 洗净黄豆芽加水煮沸30分

16、钟。用纱布过滤滤液中加入琼脂加热溶解后放入糖搅拌使它溶解补足水分到1000毫升分装灭菌备用。 把这培养基的pH值调到7.27.4可用来培养细菌和放线菌。 配方四 豌豆琼脂培养基 豌豆 80粒 琼脂 5克 水 200毫升 取80粒干豌豆加水煮沸1小时用纱布过滤后在滤液中加入琼脂煮沸到溶解分装灭菌备用。 4、食用菌菌种培养基 配方一 马铃薯蔗糖-琼脂培养基 20%马铃薯煮汁 1000毫升 蔗糖 20克 琼脂 18克 把马铃薯洗净去皮后切成小块。称取马铃薯小块200克加水1000毫升煮沸20分钟后过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖煮沸使它溶解后补足

17、水分分装灭菌备用。使用该培养基对pH值要求不严格可以不测定。 配方二 综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克 葡萄糖 20克 维生素 10毫克 琼脂 18克 先配制20%马铃薯煮汁方法同上。在煮汁中加入上述各种组分加热溶解后补足水分调整pH值到6。分装灭菌备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。 5.烟草的培养基 在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽 CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化 愈伤组织诱导培养基制备 以MS培养基

18、母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20母液100mL,微量元素100母液20mL,铁盐100母液20mL ,维生素100母液20mL,肌醇200母液10mL,甘氨酸200母液10mL,配制得MS培养基后,再加入0.5mgL-1的BA8mL,0.5mgL-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5molL-1的NaOH和0.5 molL-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中. 烟草叶片愈伤组织诱

19、导 取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解 剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种 5小片,一共接种6瓶.接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周,然后在同 样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观 察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率. 器官分化及植株再生培养 将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22 C条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况. 愈伤组织诱导的总体情况 烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而 未形成愈伤的情况.具

20、体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发 生污染,但诱导率几乎各不相同.其中, 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为 60.0, 在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过程中,外植 体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整 个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小. 酵母产品有几种分类方法。以人类食用和作动物饲料的不同目的可分成食用酵母和饲料酵母。食用酵母中又分成面包酵母、食品酵母和药用酵母等。 面包酵母 又分压榨酵母、活性干酵母和快速活性干酵母。 压榨酵母采用酿酒酵母生产的含水分7073的块状产品。呈淡黄色,具有紧密的结构且易粉

21、碎,有强的发面能力。在4可保藏1个月左右在0能保藏23个月。产品最初是用板框压滤机将离心后的酵母乳压榨脱水得到的因而被称为压榨酵母俗称鲜酵母。发面时其用量为面粉量的12,发面温度为2830,发面时间随酵母用量、发面温度和面团含糖量等因素而异一般为13小时。 活性干酵母:采用酿酒酵母生产的含水分8左右、颗粒状、具有发面能力的干酵母产品。采用具有耐干燥能力、发酵力稳定的醇母经培养得到鲜酵母再经挤压成型和干燥而制成。发酵效果与压榨酵母相近。产品用真空或充惰性气体如氮气或二氧化碳的铝箔袋或金属罐包装货架寿命为半年到1年。与压榨酵母相比,它具有保藏期长不需低温保藏运输和使用方便等优点。 快速活性干酵母一

22、种新型的具有快速高效发酵力的细小颗粒状直径小于1mm产品。水分含量为46。它是在活性干酵母的基础上,采用遗传工程技术获得高度耐干燥的酿酒酵母菌株经特殊的营养配比和严格的增殖培养条件以及采用流化床干燥设备干燥而得。与活性干酵母相同,采用真空或充惰气体保藏,货架寿命为1年以上。与活性干酵母相比,颗粒较小,发酵力高,使用时不需先水化而可直接与面粉混合加水制成面团发酵在短时间内发酵完毕即可焙烤成食品。该产品在本世纪70年代才在市场上出现深受消费者的欢迎。 食品酵母 不具有发酵力的繁殖能力供人类食用的干酵母粉或颗粒状产品。它可通过回收啤酒厂的酵母泥、或为了人类营养的要求专门培养并干燥而得。美国、日本及欧

23、洲一些国家在普通的粮食制品如面包、蛋糕、饼干和烤饼中掺入 5左右的食用酵母粉以提高食品的营养价值。酵母自溶物可作为肉类、果酱、汤类、乳酪、面包类食品、蔬菜及调味料的添加剂在婴儿食品、健康食品中作为食品营养强化剂。由酵母自溶浸出物制得的5-核苷酸与味精配合可作为强化食品风味的添加剂见核苷酸类调味料。从酵母中提取的浓缩转化酶用作方蛋夹心巧克力的液化剂。从以乳清为原料生产的酵母中提取的乳糖酶可用于牛奶加工以增加甜度防止乳清浓缩液中乳糖的结晶适应不耐乳糖症的消费者的需要。 药用酵母 制造方法和性质与食品酵母相同。由于它含有丰富的蛋白质、维生素和酶等生理活性物质医药上将其制成酵母片如食母生片用于治疗因不

24、合理的饮食引起的消化不良症。体质衰弱的人服用后能起到一定程度的调整新陈代谢机能的作用。在酵母培养过程中如添加一些特殊的元素制成含硒、铬等微量元素的酵母对一些疾病具有一定的疗效。如含硒酵母用于治疗克山病和大骨节病并有一定防止细胞衰老的作用含铬酵母可用于治疗糖尿病等。 饲料酵母 通常用假丝酵母或脆壁克鲁维酵母经培养、干燥制成。是不具有发酵力,细胞呈死亡状态的粉末状或颗粒状产品。它含有丰富的蛋白质(3040左右)、b族维生素、氨基酸等物质,广泛用作动物饲料的蛋白质补充物。它能促进动物的生长发育缩短饲养期增加肉量和蛋量改良肉质和提高瘦肉率改善皮毛的光泽度并能增强幼禽畜的抗病能力。 微生物培养基的类型1

25、. 按照培养基的成分来分 培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。2.按照培养基的物理状态分 培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。3.按照微生物的种类分 培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类4.按照培养基用途分 培养基按其特殊用途可分为加富培养基、选择性培养基和鉴别培养基。(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。(2)天然

26、培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。(3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。合成培养基天然培养基主要成分准确测量的化学试剂加蒸馏水化学成分不明确的天然物质优点化学成分明确，精确定量，可重复性强配制方便，营养丰富，原料易得，培养效果好缺点配制繁琐，成本较高，培养效果一般成分不明确，实验重复性差应用用于微生

27、物的分类，鉴定，研究一般用于工业生产按照培养基的物理状态分培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。(1)固体培养基。是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。用于微生物分离，鉴定，计数。如图，微生物分离成菌落、菌苔。图中为大肠杆菌菌落，是用涂布平板法得到。用于分离微生物的固体培养基(2)半固体培养基。是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。用于观察微生物运动特征。如图，左侧试管中微生物不运动，而右侧试管中微生物运动，因而两试管中现象不同。(3)液体

28、培养基。液体培养基中不加任何凝固剂。这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。用于观察微生物生长状态。如图，此例中左侧为表面生长，右侧为沉淀生长，中间两个为均匀混浊生长。用于观察微生物生长状态的液体培养基凝固剂含量(以琼脂计)主要用途固体培养基1.5%-2.0%微生物分离，鉴定，计数等半固体培养基0.5%-0.8%观察微生物运动特征、鉴定菌种等液体培养基无大规模工业生产及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究按照微生物的种类分培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。(

29、1)常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基。(2)常用的放线菌培养基为高氏1号培养基。(3)常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基。(4)常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁蔗糖(或葡萄糖，葡萄糖比较昂贵)琼脂培养基和察氏培养基等。按照培养基用途分培养基按其特殊用途可分为基础培养基、加富培养基、选择性培养基和鉴别培养基。(1)基础培养基。是含有一般微生物生长繁殖所需基本营养物质的培养基。牛肉膏蛋白胨培养基是最常用的 基础培养基。(2)加富培养基。是在基础培养基中加入血、血清、动植物组织提取液制成的培养基。用于培养要求比较苛刻的某些微生物。(3)选择培养基。是在普通培养基中

30、加入特殊营养物质或化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。培养基用途原因加入青霉素分离酵母菌，霉菌等真菌青霉素仅作用于细菌，对真菌无作用加入高浓度食盐分离金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌细胞壁结构致密，且能分泌血浆凝固酶，分解纤维蛋白原为纤维蛋白，沉积在细胞壁表面形成很厚的一层不透水的膜，不易失水不加氮源分离固氮菌固氮菌能利用空气中的氮气，其他菌类不行不加含碳有机物分离自养型微生物自养型微生物可利用无机碳源，异养型微生物不行加入青霉素等抗生素分离导入了目的基因的受体细胞导入了目的基因的受体细胞中含有标记基因，对特定抗生素有抗

31、性加入氨基喋呤，次黄嘌呤，胸腺嘧啶核苷酸分离杂交瘤细胞在该实验上一步得到的细胞中，仅有杂交瘤细胞能完成DNA复制，正常进行细胞分裂，其他细胞的DNA复制过程被阻断无法进行分裂(4) 鉴别培养基。是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。如鉴别大肠杆菌的伊红美蓝培养基，鉴别纤维素分解菌的刚果红培养基。(5) 伊红美蓝培养基:用于鉴别大肠杆菌。右图中是大肠杆菌菌落，菌落表面反光，有金属光泽。如何配置常见培养基光用琼脂就没有营养了呀微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水、无机盐和生长因子五大类，列表总结如下：营养物质含义作用主要来源碳源能提供碳元素营养的物

32、质构成生物体细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机碳源：CO2、NaHCO3；有机碳源：糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油等。氮源提供氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机氮源：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等；生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂，而且可以维持生物大分子结构的稳定 无机盐为微生物提供C、N等元素之外的各种重要元素，包括大量元素细胞内组成成分，生理调节物质；酶的激活剂等 特别提醒：微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是

33、铵盐、硝酸盐；对于异养生物而言，含有C、H、O、N的化合物既是碳源也是氮源，也可能是能源；NaHCO3既是无机盐，也是自养微生物的碳源；绝大多数微生物缺乏合成生长因子的能力或合成能力有限，所以要在培养基中加入生长因子。2、微生物培养基的配制（以牛肉膏蛋白胨培养基为例）（1）配制培养液在200 mL烧杯中加入100 mL蒸馏水，再加入0. 5 g牛肉膏、l g蛋白胨、0. 5 g NaCl、1g琼脂，边加热边搅拌，配制成培养液。（2）调节pH采用pH试纸测试，调节培养基的酸碱度至7. 07. 2。 （3）分装将培养基趁热分装到洁净的试管中. 培养基的高度约为试管高度的15。注意不要污染试管口，用棉花塞塞紧试管。（4）包扎将35支试管扎成一捆，外包1层牛皮纸或2层报纸，用线扎好。在试管壁上注明培养基的名称、组别、配制日期等。（5）灭菌高压蒸汽灭菌是常用的灭菌方法。在温度为121，气压为1.0 kPa的条件下灭菌20 min。切断电源，待压力表中指针指向“0”点后，取出灭菌物品。（6）搁置斜面待试管冷却至50左右，将试管口部枕在高约1 cm的木条或其他合适高度的物体上，使其自然倾斜，斜面长度不超过试管总长的12。