试验九免疫荧光染色观察肿瘤细胞骨架ppt课件.ppt

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2、证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物一、实验的基本原理一、实验的基本原理 荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。 抗体能特异性地识别相应的抗原，并与之结合。抗体能特异性地识别相应的抗原，并与之结合。这种结合在体外也能发生，这种特性就是许多免这种结合在体外也能发生，这种特性就是许多免疫检测方法的基础

3、。疫检测方法的基础。 荧光技术与免疫技术的结合可用于对样品结构或荧光技术与免疫技术的结合可用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。其组分进行定性、定位、定量观察检测。我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物三、试剂与器材三、试剂与器材人肿瘤细胞涂片人肿瘤细胞涂片甲醇、甲醇、H2O2、滤纸、滤纸、PBS、正常羊血清封闭液、一抗、正常羊血清封闭液、一抗、 F

4、ITC标记的标记的IgG、甘油、甘油/PBS封片剂、盖玻片封片剂、盖玻片荧光显微镜荧光显微镜我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物玻片细胞置于甲醇中玻片细胞置于甲醇中-10固定固定5min，室温凉干（或冷丙酮，室温凉干（或冷丙酮固定固定5min，室温凉干）；，室温凉干）；PBS漂洗漂洗2min3次；次；3% H2O2室温孵育室温孵育10min（以去除细胞内源性过氧化物酶（以去除细胞内源性过氧化物酶活性）；活性）；PBS漂洗漂洗5min3次；次；10%正常羊血清封闭液（正常羊血清封闭液（0.1M P

5、BS配制）室温封闭配制）室温封闭20min；弃封闭液（此步骤不必弃封闭液（此步骤不必PBS洗涤）；洗涤）；四、实验步骤四、实验步骤我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物 用适当比例稀释的一抗（一般稀释比为用适当比例稀释的一抗（一般稀释比为1:100-1:200）37孵育孵育1h（或（或4孵育过夜）；孵育过夜）；PBS漂洗漂洗5min3次；次；用适当比例稀释的二抗（用适当比例稀释的二抗（FITC标记的标记的IgG）（一般）（一般稀释比为稀释比为1:100-1:200，用加有，用加有BSA的的TBST

6、配制）配制）室温孵育室温孵育30min（避光黑暗条件下进行）；（避光黑暗条件下进行）；PBS漂洗漂洗5min3次；次；甘油甘油/PBS封片剂（封片剂（PBS: 甘油甘油=1：9，v/v，pH8.0-8.5）封片；）封片；荧光显微镜或激光共聚焦扫描显微镜观察拍照。荧光显微镜或激光共聚焦扫描显微镜观察拍照。我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物五、注意事项五、注意事项1. 注意各级抗体浓度的使用范围注意各级抗体浓度的使用范围;2. 荧光抗体孵育时要注意避光荧光抗体孵育时要注意避光;3. 注意各步骤的漂洗要充分注意各步骤的漂洗要充分.我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物六、作业与思考题六、作业与思考题试述免疫荧光技术的基本原理试述免疫荧光技术的基本原理,并描述并描述实验中所观察的实验现象实验中所观察的实验现象.思考题思考题:试比较免疫荧光技术与免疫细胞化学试比较免疫荧光技术与免疫细胞化学技术的异同技术的异同.