2019高考生物一轮复习人教版选修三ppt课件.ppt

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1、选修部分选修部分选修选修3现代生物科技专题现代生物科技专题关 注 新 考 纲把 握 新 考 情1. 基因工程的诞生2基因工程的原理及技术3基因工程的应用4蛋白质工程1.基因工程的实质2基因工程操作的四步曲及其操作实例3基因工程在农业、医药生产、疾病诊断和治疗中的应用4蛋白质工程的一般操作过程 1.1DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具 12基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序一、基因工程的概念及基本工具一、基因工程的概念及基本工具二、基因工程的基本操作程序二、基因工程的基本操作程序议一议：议一议：限制酶在原核生物中主要是切割外源限制酶在原核生物中主要是切割外源DNA，使之失效，使

2、之失效，从而达到保护自己的目的。从而达到保护自己的目的。想一想：想一想：将含有某种生物不同基因的许多将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体片段，导入受体细菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为细菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。建立基因文库，便于随时获取目的基因。基因文库。建立基因文库，便于随时获取目的基因。看一看：看一看：构建基因表达载体时，可能没有加入启动子。构建基因表达载体时，可能没有加入启动子。一、基因工程的基本操作工具一、基因工程的基本操作工具1与与DNA分子相关的酶分子相关的酶(1)几种酶的比较几种酶的比较项目种类作用

3、底物作用部位作用结果限制酶DNA分子磷酸二酯键形成黏性末端或平末端DNA连接酶DNA分子片段磷酸二酯键形成重组DNA分子DNA聚合酶脱氧核苷酸磷酸二酯键形成新的DNA分子DNA(水解)酶DNA分子磷酸二酯键形成脱氧核苷酸DNA解旋酶DNA分子碱基对间的氢键形成单链DNA分子(2)限制酶与限制酶与DNA连接酶的关系连接酶的关系限制酶不切割自身限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在该酶的的原因是：原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。识别序列或识别序列已经被修饰。DNA连接酶起作用时不需要模板。连接酶起作用时不需要模板。2载体载体(1)作用作用作为运载工具，将目的基因转移到

4、宿主细胞内。作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。(2)具备的条件具备的条件能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。具有特殊的标记基因，以便进行筛选。具有特殊的标记基因，以便进行筛选。(3)种类种类质粒：一种祼露的、结构简单、独立于细菌拟核质粒：一种祼露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，之外，能够自我复制的很小的双链环状能够自我复制的很小的双链环状DNA分子。分子。噬菌体的衍生物。噬菌体的衍

5、生物。动植物病毒。动植物病毒。特别提醒特别提醒获取目的基因和切割载体时使用同一种限制酶，目的是产生获取目的基因和切割载体时使用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。相同的黏性末端。获取一个目的基因需限制酶剪切两次，共产生获取一个目的基因需限制酶剪切两次，共产生4个黏性末端个黏性末端或平末端。或平末端。限制酶切割位点的选择必须保证标记基因的完整性，以便于限制酶切割位点的选择必须保证标记基因的完整性，以便于检测。检测。 跟踪训练跟踪训练1(2019河南郑州一检河南郑州一检)限制酶可辨识并切割限制酶可辨识并切割DNA分分子上特定的核苷酸序列。下图为四种限制酶子上特定的核苷酸序列。下图为四种限制酶B

6、amH、EcoR、Hind及及Bgl的辨识序列及每一种限制酶的特定切割部位。的辨识序列及每一种限制酶的特定切割部位。BamHEcoRHindBgl GGATCCGAATTCAAGCTTAGATCTCCTAGGCTTAAGTTCGAATCTAGA 其中哪两种限制酶切割出来的其中哪两种限制酶切割出来的DNA片段末端可以互补结合，其片段末端可以互补结合，其末端互补序列是末端互补序列是()ABamH和和EcoR；末端互补序列：；末端互补序列：AATTBBamH和和Hind；末端互补序列：；末端互补序列：GATCCBamH和和Bgl；末端互补序列：；末端互补序列：GATCDEcoR和和Hind；末端互补

7、序列：；末端互补序列：AATT解析：解析：BamH和和Bgl切出的黏性末端碱基能互补配对，互补切出的黏性末端碱基能互补配对，互补序列都含有序列都含有GATC。答案：答案：C二、基因工程基本操作程序二、基因工程基本操作程序1目的基因的获取目的基因的获取(1)直接分离：从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获直接分离：从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获取。取。(2)人工合成目的基因的常用方法人工合成目的基因的常用方法已知核苷酸序列的较小基因，直接利用已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方合成仪用化学方法合成，不需要模板。法合成，不需要模板。以以RNA为模板，在逆转录酶作用

8、下人工合成。为模板，在逆转录酶作用下人工合成。(3)PCR技术与技术与DNA复制的比较复制的比较PCR技术DNA复制相同点原理DNA双链复制(碱基互补配对)原料四种游离的脱氧核苷酸条件模板、ATP、酶等PCR技术DNA复制不同点解旋方式DNA在高温下变性解旋解旋酶催化场所体外复制主要在细胞核内酶热稳定的DNA聚合酶(Taq酶)细胞内含有的DNA聚合酶结果在短时间内形成大量的DNA片段形成整个DNA分子2.基因表达载体的构建基因表达载体的构建(1)基因表达载体的组成：启动子、目的基因、终止子以及标记基因表达载体的组成：启动子、目的基因、终止子以及标记基因等。基因等。(2)基因表达载体的构建方法基

9、因表达载体的构建方法3将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射技术感受态细胞法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到Ti质粒的TDNA上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞的DNA表达将含有目的基因的表达载体提纯取卵(受精卵)显微注射受精卵发育获得具有新性状的动物Ca2处理细胞感受态细胞重组表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子4.目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定(1)分子水平检测分子水平检测导入检测：导入检测：DNA分子杂交技术，即使用放射性同位素标记的分子杂交技术，即使用放射性同位素标记的含目的基

10、因的含目的基因的DNA片段作为探针检测。片段作为探针检测。(2)个体生物学水平鉴定：对转基因生物进行抗虫或抗病的接种个体生物学水平鉴定：对转基因生物进行抗虫或抗病的接种实验。实验。拓展深化拓展深化只有第三步将目的基因导入受体细胞不需碱基互补配对，其只有第三步将目的基因导入受体细胞不需碱基互补配对，其余三个步骤都涉及碱基互补配对。余三个步骤都涉及碱基互补配对。工具酶只有两种：限制酶在操作程序工具酶只有两种：限制酶在操作程序1、2中用到且要求用同中用到且要求用同一种，目的是产生相同的黏性末端；一种，目的是产生相同的黏性末端；DNA连接酶只在操作程序连接酶只在操作程序2中用中用到。到。目的基因进入受

11、体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体达的过程，称为转化。转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。基因组中。跟踪训练跟踪训练2(2019福建福州质检福建福州质检)下图是获得抗虫棉的技术流下图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因程示意图。卡那霉素抗性基因(kanr)常作为标记基因，只有含卡那霉素常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下列叙述正确的是抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下列叙述正确的是()A构建重组质粒过程中需要

12、限制性内切酶和构建重组质粒过程中需要限制性内切酶和DNA连接酶连接酶B愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株C卡那霉素抗性基因卡那霉素抗性基因(kanr)中有该过程所利用的限制性内切中有该过程所利用的限制性内切酶的识别位点酶的识别位点D抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传解析：解析：质粒与目的基因结合时需要用同一种限制性内切酶切割，质粒与目的基因结合时需要用同一种限制性内切酶切割，切出的黏性末端相同，可用切出的黏性末端相同，可用DNA连接酶连接；愈伤组织由相同的细胞连接酶连接；愈伤组织由相同的细胞分裂形成，分化后

13、产生相同基因型的植株；卡那霉素抗性基因作为标分裂形成，分化后产生相同基因型的植株；卡那霉素抗性基因作为标记基因不能有限制性内切酶的切割位点，标记基因被切断后不再表达；记基因不能有限制性内切酶的切割位点，标记基因被切断后不再表达；抗虫棉为杂合子，其有性生殖后代可能会发生性状分离，抗虫性状不抗虫棉为杂合子，其有性生殖后代可能会发生性状分离，抗虫性状不一定能稳定遗传。一定能稳定遗传。答案：答案：A题型一题型一基因工程的基本工具基因工程的基本工具【例例1】如图为如图为DNA分子的切割和连接过程：分子的切割和连接过程：(1)EcoRI是一种是一种_酶，其识别序列是酶，其识别序列是_，切割点，切割点是是_

14、与与_之间的之间的_键。切割结果产生的键。切割结果产生的DNA片段片段末端形式为末端形式为_。(2)不同来源不同来源DNA片段结合，在这里需要的酶应是片段结合，在这里需要的酶应是_连连接酶，此酶是通过在接酶，此酶是通过在_与与_之间形成之间形成_键，而起键，而起“缝合缝合”作用的。还有一种连接平末端的连接酶是作用的。还有一种连接平末端的连接酶是_。【标准解答标准解答】本题考查本题考查DNA限制酶和限制酶和DNA连接酶的有关知连接酶的有关知识。识。(1)从图中可看出从图中可看出EcoRI可将可将DNA片段切割，应为限制酶，其识别片段切割，应为限制酶，其识别序列是序列是GAATTC，切点是，切点是

15、G与与A之间的磷酸二酯键，切割后产生的是之间的磷酸二酯键，切割后产生的是黏性末端。黏性末端。(2)DNA连接酶可将不同来源的连接酶可将不同来源的DNA片段结合，由图中可看片段结合，由图中可看出，此酶是通过在出，此酶是通过在G与与A之间形成磷酸二酯键的形式连接两片段，连接之间形成磷酸二酯键的形式连接两片段，连接的黏性末端，对应前面的的黏性末端，对应前面的EcoRI限制酶，此酶应为限制酶，此酶应为EcoliDNA连接酶，连接酶，T4DNA连接酶可连接平末端。连接酶可连接平末端。【答案答案】(1)限制限制GAATTC鸟嘌呤脱氧核苷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸(或或G)腺腺嘌呤脱氧核苷酸嘌呤脱氧核苷酸(或或A)

16、磷酸二酯黏性末端磷酸二酯黏性末端(2)EcoliDNA鸟嘌呤脱氧核苷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸(或或G)腺嘌呤脱氧核苷酸腺嘌呤脱氧核苷酸(或或A)磷酸二酯磷酸二酯T4DNA连接酶连接酶题型二题型二基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序【例例2】科学家通过基因工程方法，将苏云金芽孢杆菌的科学家通过基因工程方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株能抗棉铃虫的棉花植株抗虫棉。其过程大致如图所示。根据题意，抗虫棉。其过程大致如图所示。根据题意，回答下列问题：回答下列问题：(1)

17、基因工程的操作程序主要包括的四个步骤是：基因工程的操作程序主要包括的四个步骤是：_、_、_、_。(2)Ti质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有TDNA，把目的基，把目的基因插入因插入Ti质粒的质粒的TDNA中是利用中是利用TDNA的的_特点。特点。(3)Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内并成功实现表达的过程，毒蛋白基因转入普通棉株细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称为在基因工程中称为_。(4)将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，该题中涉及的是将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，该题中涉及的是_。(5)目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键目的基

18、因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键是是_，这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是，这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是_。【自主解答自主解答】本题以抗虫棉的培育为背景，考查了运用基因本题以抗虫棉的培育为背景，考查了运用基因工程技术生产转基因作物的步骤、方法。农杆菌转化法是将目的基因工程技术生产转基因作物的步骤、方法。农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞的常用方法，利用它能在自然条件下感染双子叶植物和导入植物细胞的常用方法，利用它能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，以及其裸子植物，以及其Ti质粒上的质粒上的TDNA能转移至受体细胞，并且整合到能转移至受体细胞，并且整合到受体

19、细胞染色体受体细胞染色体DNA上的特点，可以把目的基因插入其上的特点，可以把目的基因插入其Ti质粒的质粒的TDNA中，借助其作用使目的基因成功导入受体细胞。中，借助其作用使目的基因成功导入受体细胞。【答案答案】(1)目的基因的获取基因表达载体的构建将目的目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定(2)可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体DNA上上(3)转化转化(4)农杆菌转化法农杆菌转化法(5)目的基因是否插入了受体细胞的染色体目的基因是否插入了受体细胞的染色体DNA上上DNA分子分

20、子杂交技术杂交技术规律总结：规律总结：熟悉基因操作四个步骤中一些重要考点熟悉基因操作四个步骤中一些重要考点提取目的基因提取目的基因方法：方法：a.直接分离法直接分离法(鸟枪法鸟枪法)：提取供体细胞提取供体细胞(DNA) 得到许多得到许多DNA片段片段分别与分别与运载体结合运载体结合分别导入受体细胞分别导入受体细胞在细胞中复制扩增在细胞中复制扩增分离目分离目的基因的基因目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合用同一种限制酶切割目的基因和质粒；用用同一种限制酶切割目的基因和质粒；用DNA连接酶连接目的连接酶连接目的基因和质粒。基因和质粒。目的基因导入受体细胞目的基因导入受体细胞重组质粒导入受体细胞

21、重组质粒导入受体细胞(动植物细胞、微生物细胞、动植物细胞、微生物细胞、CaCl2处理处理的细菌等。的细菌等。)目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达检测：通过检测标记基因的特征，判断目的基因是否被导入受检测：通过检测标记基因的特征，判断目的基因是否被导入受体细胞。体细胞。表达：通过检测和观察生物的性状变异，判断目的基因是否成表达：通过检测和观察生物的性状变异，判断目的基因是否成功表达。功表达。一、选择题一、选择题1(2019浙江高考浙江高考)在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是烟草过程中，下列操作错误的是()A用限制性核酸内切酶

22、切割烟草花叶病毒的核酸用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸B用用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体C将重组将重组DNA分子导入烟草原生质体分子导入烟草原生质体D用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞解析：解析：构建抗除草剂的烟草要用限制性核酸内切酶切割杂草中构建抗除草剂的烟草要用限制性核酸内切酶切割杂草中含抗除草剂基因的含抗除草剂基因的DNA与运载体。与运载体。答案：答案：A2(2019全国卷全国卷)下列叙述符合基因工程概念的是下列叙述符合基因工程概念的是()AB淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有淋巴细胞与

23、肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞淋巴细胞中的抗体基因中的抗体基因B将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干扰素的菌株生人干扰素的菌株C用紫外线照射青霉菌，使其用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，通过筛选获得发生改变，通过筛选获得青霉素高产菌株青霉素高产菌株D自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到整合到细菌细菌DNA上上解析：解析：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外过体外DNA重组和转基因等技术，赋

24、予生物以新的遗传特性，进而创重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，进而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。B细胞与肿瘤细胞细胞与肿瘤细胞融合，属于细胞工程；用紫外线照射青霉菌，使其融合，属于细胞工程；用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，进发生改变，进而筛选出青霉素高产菌株，属于人工诱变；自然界中天然存在的噬菌而筛选出青霉素高产菌株，属于人工诱变；自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其体自行感染细菌后其DNA整合到细菌整合到细菌DNA上，并没有进行人为的加工，上，并没有进行人为的加工，不属于基因工程。不属于基因工程。答案：答案：B

25、3(2009浙江高考浙江高考)下列关于基因工程的叙述，错误的是下列关于基因工程的叙述，错误的是()A目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物B限制性核酸内切酶和限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶连接酶是两类常用的工具酶C人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性D载体上的抗性基因有利于筛选含重组载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的细胞和促进目的基因的表达的基因的表达解析：解析：胰岛素原须在内质网、高尔基体中加工后才有生物活性，胰岛素原须在内质网、高尔基体中加工后

26、才有生物活性，大肠杆菌无内质网和高尔基体。载体上的抗性基因有利于筛选含重组大肠杆菌无内质网和高尔基体。载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞，但由于它和目的基因是相互独立的，并不能促进目的基的细胞，但由于它和目的基因是相互独立的，并不能促进目的基因的表达。因的表达。答案：答案：D4已知某种限制性内切酶在一线性已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有分子上有3个酶切位点，个酶切位点，如图中箭头所指。如果该线性如图中箭头所指。如果该线性DNA分子在分子在3个酶切位点上都被该酶切个酶切位点上都被该酶切断，则会产生断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的四种不同长度的DNA片段。现有多个上述线

27、片段。现有多个上述线性性DNA分子，若在每个分子，若在每个DNA分子上至少有分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶酶切后，这些线性则从理论上讲，经该酶酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不分子最多能产生长度不同的同的DNA片段种类数是片段种类数是()A3B4C9 D12解析：解析：若每个若每个DNA分子上至少有分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则个酶切位点被该酶切断，则多个线性多个线性DNA可以切得的种类有：可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种。九种。答案：答案：C5(2019江苏高考江苏高考)下列关于转基因植物的

28、叙述，正确的是下列关于转基因植物的叙述，正确的是()A转入到油菜的抗除草剂基因，可能通过花粉传入环境中转入到油菜的抗除草剂基因，可能通过花粉传入环境中B转抗虫基因的植物，不会导致昆虫群体抗性基因频率增加转抗虫基因的植物，不会导致昆虫群体抗性基因频率增加C动物的生长激素基因转入植物后不能表达动物的生长激素基因转入植物后不能表达D如转基因植物的外源基因来源于自然界，则不存在安全性如转基因植物的外源基因来源于自然界，则不存在安全性问题问题解析：解析：若把抗除草剂基因导入油菜的细胞核中，则会在减数分若把抗除草剂基因导入油菜的细胞核中，则会在减数分裂时进入配子，然后随花粉进入环境。抗虫植物会对捕食它的昆

29、虫群裂时进入配子，然后随花粉进入环境。抗虫植物会对捕食它的昆虫群体进行自然选择，导致昆虫群体抗性基因频率增加。条件允许时，动体进行自然选择，导致昆虫群体抗性基因频率增加。条件允许时，动物基因同样可以在植物体内表达，在修饰和改造后也可以在原核生物物基因同样可以在植物体内表达，在修饰和改造后也可以在原核生物体内表达。转基因生物的外源基因不管是来源于自然界还是由人工合体内表达。转基因生物的外源基因不管是来源于自然界还是由人工合成，都可能存在安全性问题。成，都可能存在安全性问题。答案：答案：A二、简答题二、简答题6(2019江苏高考江苏高考)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切下表中列出了几种限制酶识

30、别序列及其切割位点，图割位点，图1、图、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：题：限制酶BamHHindEcoRSma识别序列及切割位点GGATCCCCTAGGAAGCTTTTCGAAGAATTCCTTAAGCCCGGGGGGCCC(1)一个图一个图1所示的质粒分子经所示的质粒分子经Sma切割前后，分别含有切割前后，分别含有_个游离的磷酸基因。个游离的磷酸基因。(2)若对图中质粒进行改造，插入的若对图中质粒进行改造，插入的Sma酶切位点越多，质粒酶切位点越多，质粒的热稳定性越的热稳定性越_。(3)用图中的质粒和外源用图中的质粒和外源DN

31、A构建重组质粒，不能使用构建重组质粒，不能使用Sma切切割，原因是割，原因是_。(4)与只使用与只使用EcoR相比较，使用相比较，使用BamH和和Hind两种限制两种限制酶同时处理质粒、外源酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止的优点在于可以防止_。(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入并加入_酶。酶。(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_。(7)为了从为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的

32、大肠杆菌突变体，然后在粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_的培养的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。解析：解析：(1)切割前质粒为环状，不含游离的磷酸基团。切割后质切割前质粒为环状，不含游离的磷酸基团。切割后质粒成了一个链状的双链粒成了一个链状的双链DNA分子，含两个游离的磷酸基团。分子，含两个游离的磷酸基团。(2)因为因为Sma识别序列中均为识别序列中均为GC碱基对，碱基对，G、C之间含三个之间含三个氢键，热稳定性高。氢键，热稳定性高。(3)据图可知，据图可知，Sma既会破坏标记基因，也会破坏目的基因。既会破坏标记基因，也会破坏目

33、的基因。(4)若用同种限制酶切割质粒和外源若用同种限制酶切割质粒和外源DNA中的目的基因，因为中的目的基因，因为两端的黏性末端相同，会出现自身环化的情况。而用两种限制酶切割，两端的黏性末端相同，会出现自身环化的情况。而用两种限制酶切割，因为两端形成的黏性末端不同，不会出现自身环化。因为两端形成的黏性末端不同，不会出现自身环化。(5)DNA连接酶可以连接具有相同黏性末端的连接酶可以连接具有相同黏性末端的DNA片段。片段。(6)标记基因可以鉴别受体细胞是否含有目的基因。标记基因可以鉴别受体细胞是否含有目的基因。(7)把蔗糖作为培养基的唯一碳源，可以把不能完成目的基因表把蔗糖作为培养基的唯一碳源，可

34、以把不能完成目的基因表达的受体细胞淘汰掉。达的受体细胞淘汰掉。答案：答案：(1)0、2(2)高高(3)Sma会破坏质粒的抗性基因、外源会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因中的目的基因(4)质粒和含目的基因的外源质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化片段自身环化(5)DNA连接连接(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞鉴别和筛选含有目的基因的细胞(7)蔗糖为唯一含碳营养物质蔗糖为唯一含碳营养物质7右图为某种质粒表达载体简图，右图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，的酶切位点，ampR为青霉素抗性基为青霉素抗性基因

35、，因，tctR为四环素抗性基因，为四环素抗性基因，P为启动子，为启动子，T为终止子，为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种在内的多种酶的酶切位点。据图回答：酶的酶切位点。据图回答：(1)将含有目的基因的将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切，酶切产物用酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形片段之间连接形成的产物有成的产物有_、_、_三种。若要从三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行这

36、些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行_。(2)用上述用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是原核宿主细胞所含有的连接产物是_；若接种到含青霉；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_。(3)目的基因表达时，目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是聚合酶识别和结合的位点是 _，其合成的产物是，其

37、合成的产物是 _。(4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_。解析：解析：(1)在基因表达载体的构建过程中用同种限制酶来切割目在基因表达载体的构建过程中用同种限制酶来切割目的基因和质粒，使之产生相同的黏性末端，以利于的基因和质粒，使之产生相同的黏性末端，以利于DNA片段的连接。片段的连接。将切割后的目的基因和质粒，用将切割后的目的基因和质粒，用DNA连接酶进行连接，它们之间随机连接酶进行连接，它们之间随机连接，可有三种产物：目的基因连接，可有

38、三种产物：目的基因载体连接物、载体载体连接物、载体载体连接物和目载体连接物和目的基因的基因目的基因连接物。获得目的基因连接物。获得DNA连接产物以后，必须通过筛选才连接产物以后，必须通过筛选才能获得所需的基因表达载体，导入宿主细胞后才能表达获得基因产物。能获得所需的基因表达载体，导入宿主细胞后才能表达获得基因产物。(2)从图中可以看出，目的基因的插入位点在抗四环素基因上，从图中可以看出，目的基因的插入位点在抗四环素基因上，可推知：目的基因可推知：目的基因载体连接物的抗四环素基因被破坏，丧失了抗四环载体连接物的抗四环素基因被破坏，丧失了抗四环素的能力，但保留了抗青霉素的能力；载体素的能力，但保留

39、了抗青霉素的能力；载体载体连接物既保留了抗四载体连接物既保留了抗四环素的能力也保留了抗青霉素的能力；目的基因环素的能力也保留了抗青霉素的能力；目的基因目的基因连接物既无目的基因连接物既无抗青霉素基因也无抗四环素基因，不具备抗性。抗青霉素基因也无抗四环素基因，不具备抗性。(3)目的基因表达过程目的基因表达过程中，中，RNA聚合酶首先与启动子结合，指导目的基因转录产生聚合酶首先与启动子结合，指导目的基因转录产生mRNA，mRNA再指导蛋白质的合成。再指导蛋白质的合成。(4)若只用若只用EcoR(或只用或只用BamH)切割质粒及目的基因，连接切割质粒及目的基因，连接时有三种产物，所以在实际操作过程中

40、，为避免切割后的末端任意连时有三种产物，所以在实际操作过程中，为避免切割后的末端任意连接，可用接，可用EcoR和和BamH同时对目的基因和质粒进行切割，目的基同时对目的基因和质粒进行切割，目的基因两端的黏性末端不同，就不存在目的基因因两端的黏性末端不同，就不存在目的基因目的基因连接物；质粒切目的基因连接物；质粒切口处两端的黏性末端不同，就不存在载体口处两端的黏性末端不同，就不存在载体载体连接物，只能得到目的载体连接物，只能得到目的基因基因载体一种连接物了。载体一种连接物了。答案：答案：(1)目的基因目的基因载体连接物、载体载体连接物、载体载体连接物载体连接物目的基目的基因因目的基因连接物目的基因连接物分离纯化分离纯化(2)载体载体载体连接物载体连接物目的基因目的基因载体连载体连接物、载体接物、载体载体连接物载体连接物(3)启动子启动子mRNA(4)EcoR和和BamH