动物细胞培养ppt课件.ppt

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1、动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合生产单克隆抗体生产单克隆抗体动物细胞核移植动物细胞核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术其它动物细胞工程的基础其它动物细胞工程的基础学学 习习 目目 标标动物细胞培养动物细胞培养定义、过程、条件、应用定义、过程、条件、应用动物体细胞核移植技术动物体细胞核移植技术定义、过程、应用、存在问题定义、过程、应用、存在问题 一、动物细胞培养一、动物细胞培养1.1.概念：概念：细胞增殖细胞增殖 动物细胞动物细胞培养就是培养就是从动物有从动物有机体中取出机体中取出相关的相关的组织组织，将它分散成，将它分散成单个细胞单个细胞，然后放，然后放在在适宜的适宜

2、的培养基培养基中，中，让这些让这些细胞生长和细胞生长和增殖增殖。2.2.原理：原理：3.3.过程过程取出组织取出组织胚胎或幼龄动物的器官组织胚胎或幼龄动物的器官组织剪碎组织剪碎组织胰蛋白酶胰蛋白酶或胶原或胶原蛋白酶蛋白酶处理处理单个细胞单个细胞制成制成细胞悬液细胞悬液转入培养瓶内转入培养瓶内（培养液）（培养液）置于适宜环境中培养置于适宜环境中培养加培养液稀释加培养液稀释动物组织细胞间隙动物组织细胞间隙中含有一定量的中含有一定量的弹弹性纤维等蛋白质，性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形将细胞网络起来形成具有一定弹性和成具有一定弹性和韧性的组织和器官韧性的组织和器官胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理取出组织取出

3、组织胚胎或幼龄动物器官组织胚胎或幼龄动物器官组织剪碎剪碎单个细胞单个细胞细胞悬液细胞悬液 细胞贴壁细胞贴壁 接触抑制接触抑制转入培养瓶转入培养瓶内内（培养液）（培养液）置于适宜环置于适宜环境中培养境中培养思考：转入培养思考：转入培养瓶内培养会发生瓶内培养会发生哪些现象？哪些现象？细胞贴壁：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿的培养瓶或培养皿的内表面光滑、内表面光滑、无毒、易于帖附。无毒、易于帖附。细胞进行有丝分裂，细胞进行有丝分裂，数量不断增多。数量不断增多。接触抑制接触抑制当贴壁细胞分裂当贴壁细胞分裂生长

4、到生长到表面相互接表面相互接触时，触时，细胞就会细胞就会停停止止分裂增殖，分裂增殖，这种这种现象称为细胞的接现象称为细胞的接触抑制。触抑制。取出组织取出组织胚胎或幼龄动物的器官组织胚胎或幼龄动物的器官组织剪碎组织剪碎组织胰蛋白酶胰蛋白酶或胶原或胶原蛋白酶蛋白酶处理处理单个细胞单个细胞制成制成细胞悬液细胞悬液加培养液加培养液转入培养瓶内培养转入培养瓶内培养 （细胞贴壁；接触抑制）（细胞贴壁；接触抑制）原代原代培养培养定义：定义：人们通人们通常将动物组织常将动物组织消化后消化后的的初次初次培养培养称为原代称为原代培养培养动物组织块动物组织块原代培养（细胞贴壁；接触抑制）原代培养（细胞贴壁；接触抑制

5、）传代培养传代培养胰蛋白酶处理分散成单个细胞胰蛋白酶处理分散成单个细胞幼龄动物的器官组织；动物胚胎幼龄动物的器官组织；动物胚胎加入培养液加入培养液用胰蛋白酶用胰蛋白酶等处理贴壁细胞；等处理贴壁细胞；分瓶分瓶继续培养。继续培养。适宜条件适宜条件 当原代培养的细胞处当原代培养的细胞处于于接触抑制后接触抑制后，用，用胰蛋白酶胰蛋白酶处理，使处理，使细胞从瓶壁上细胞从瓶壁上脱离脱离下来，然后加入下来，然后加入新新的培养液，的培养液，将细胞分离稀释，将细胞分离稀释，并从原并从原培养瓶内转接到培养瓶内转接到新的培养瓶内新的培养瓶内，这个，这个过程称过程称传代培养传代培养（分瓶培养的过程）。（分瓶培养的过程

6、）。传代培养传代培养1010代细胞代细胞5050代细胞代细胞传代传代培养培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系遗传物遗传物质已改质已改变变遗传物质遗传物质未改变未改变动物胚胎或幼龄动物的组织、器官动物胚胎或幼龄动物的组织、器官配置细胞悬液配置细胞悬液胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理转入培养瓶转入培养瓶单个细胞单个细胞加培养液稀释加培养液稀释分分 瓶瓶原代原代培养培养原代培养特点：原代培养特点：细细胞贴壁、接触抑制胞贴壁、接触抑制动物胚胎或幼龄动物的组织、器官动物胚胎或幼龄动物的组织、器官配置细胞悬液配置细胞悬液胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理1010代细胞代细胞转入培养瓶转入培养瓶40-5040-50代

7、细胞代细胞传传代代培培养养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液稀释加培养液稀释传代传代1010代以内，代以内，遗传物质不改遗传物质不改变，变，保持正常保持正常二倍体核型。二倍体核型。分分 瓶瓶继续传代培养继续传代培养少部少部分分细胞细胞获得不获得不死性，死性，细胞突变，遗传物细胞突变，遗传物质已经改变，质已经改变，等同等同于癌细胞。于癌细胞。细胞株：细胞株：一般说一般说遗传物质未改变遗传物质未改变细胞系：细胞系：遗传物质遗传物质已改变已改变原原代代培培养养动物细胞培动物细胞培养的原理：养的原理：细胞增殖细胞增殖 为什么选用动物胚胎或幼龄个体为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞

8、培养材料？的器官或组织做动物细胞培养材料？因为其细胞生命力旺盛，因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。分裂能力强，分化程度低。 为什么培养前要将组织细胞分散为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？成单个细胞？扩大细胞与培养液的接触面扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。积，利与细胞吸收营养。 10 10代以内的细胞遗传物质不代以内的细胞遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。改变，保持正常二倍体核型。 目前使用的或冷冻保存的正常目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在细胞通常在1010代以内，为什么？代以内，为什么？动物细胞培养动物细胞培养能否像能否像绿色植物组织绿色植物组织培养那样最

9、终培养成新个体？培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体。增多，不能发育成新的动物个体。4.4.动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件1 1）无菌、）无菌、无毒的环境：无毒的环境： 适宜的温度：适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度人和哺乳动物细胞最适温度为为36.536.50.50.5适宜的酸碱度：适宜的酸碱度：PHPH：7.2-7.47.2-7.4液体合成培养基：液体合成培养基：（葡萄糖葡萄糖、氨基酸）、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）促生长因子、（水、无机盐、微量元素）等；通常还需加等；通常还需加血浆

10、、血清等血浆、血清等天然成分。天然成分。4 4）气体环境：）气体环境：2 2）营养：）营养：3 3）温度和）温度和pHpH：“9595空气空气+5+5COCO2 2”的混合气体培养箱。的混合气体培养箱。氧氧气是细胞代谢必须的；气是细胞代谢必须的； COCO2 2维持培维持培养液的养液的p pH H。对培养液和所有培养用具对培养液和所有培养用具无菌处理；无菌处理；培养液培养液中中添加抗生素添加抗生素防止培养过程中污染；防止培养过程中污染；定期更定期更换培养液换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。造成危害。动物细胞培养液的主要成分是什么？动物细胞培养液的主要

11、成分是什么？较较植物组培植物组培培养基有何独特之处？培养基有何独特之处？主要成分：主要成分：葡萄糖葡萄糖、氨基酸、水、无机、氨基酸、水、无机盐、维生素和动物血清等。盐、维生素和动物血清等。独特之处有：独特之处有：1.1.液体培养基液体培养基 2. 2.成分中有动物血清等成分中有动物血清等加入动物血清原因：加入动物血清原因：提供一个类似提供一个类似生物体内的环境；生物体内的环境；含营养物质含营养物质（如（如生长因子）生长因子）促进细胞发育。促进细胞发育。用用胰蛋白酶分散细胞胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间物，说明细胞间物质主要成分是什么？质主要成分是什么？用胃蛋白酶行吗用胃蛋白酶行吗？ 在进行动物细

12、胞培养时，用胰蛋在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明白酶分散细胞，说明细胞间的物质细胞间的物质主要是蛋白质。主要是蛋白质。 动物细胞培养适宜的动物细胞培养适宜的PHPH为为7.27.47.27.4，此环境下胃蛋白酶（此环境下胃蛋白酶（2.02.0）没有活性，）没有活性，而胰蛋白酶而胰蛋白酶(7.2-8.4)(7.2-8.4)的活性较高。的活性较高。5.5.动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用1.1.蛋白质生物制品的生产蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.2.应用于基因工程应用于基因工程 主要用于作为受体细胞主要用于作为受体细胞

13、3.3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.4.培养正常或各种病变的细胞，培养正常或各种病变的细胞，用于用于细细胞的生理、药理、病理研究胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物如用于筛选抗癌药物 植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成分培养基特有成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 动物血清动物血清培养结果培养结果植物体植物体细胞株、细胞系细胞

14、株、细胞系培养目的培养目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株无病毒植株获得细胞或细胞获得细胞或细胞分泌蛋白分泌蛋白取材取材植物幼嫩部分或植物幼嫩部分或花药花药胚胎或幼龄动物胚胎或幼龄动物的器官或组织的器官或组织其他条件其他条件无菌无毒，适宜无菌无毒，适宜条件条件无菌无毒，适宜无菌无毒，适宜条件条件 在动物细胞培养过程中，下列哪种在动物细胞培养过程中，下列哪种现象是不可能的（现象是不可能的（ ）A A细胞一直在细胞悬液中分裂生长细胞一直在细胞悬液中分裂生长B B有少部分细胞可能在培养条件下有少部分细胞可能在培养条件下无限地传代下去无限地传代下去C C有部分细胞核型会发生变化有部分细胞核型会发

15、生变化 D. D. 个别细胞会发生基因突变个别细胞会发生基因突变A 既然动物既然动物体细胞核仍具有全能体细胞核仍具有全能性，性，为什么不能直接利用动物体细为什么不能直接利用动物体细胞培育动物体？胞培育动物体？ 利用利用动物体细胞核移植技术动物体细胞核移植技术动物细胞的全能性会随着动物细胞的全能性会随着动物动物细胞分化程度的提高而逐渐受细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，到限制，分化潜能逐渐变弱。分化潜能逐渐变弱。 怎样才能使动物体细胞表现出全能性呢？怎样才能使动物体细胞表现出全能性呢？1.1.定义：定义：3.分类：分类：2.原理：原理： 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物二、动物体细胞核移植技术

16、和克隆动物 动物核移植是将动物的动物核移植是将动物的一个细胞的一个细胞的细胞核细胞核，移入一个已经，移入一个已经去掉细胞核的卵母细去掉细胞核的卵母细胞中胞中。使其重组并发育成一个。使其重组并发育成一个新的胚胎新的胚胎，这，这个新的胚胎最终发育为个新的胚胎最终发育为动物个体。动物个体。用核移植的方法得到用核移植的方法得到的动物称为克隆动物的动物称为克隆动物动物细胞核具有全能性动物细胞核具有全能性胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植、体细胞核移植体细胞核移植胚胎细胞分化程胚胎细胞分化程度低，恢复其全度低，恢复其全能性相对能性相对容易容易动物体细胞分化动物体细胞分化程度高，恢复其程度高，恢复其全能性十分全能

17、性十分困难困难4.4.体细胞核移植的过程体细胞核移植的过程供体：优质高产奶牛供体：优质高产奶牛为何取为何取供体细供体细胞胞传代培养传代培养1010代代以内的细胞？以内的细胞？1010代以内的细胞代以内的细胞一般保持正常二一般保持正常二倍体的核型，未倍体的核型，未发生突变。发生突变。 受体：普通奶牛（卵母细胞采集与培养）受体：普通奶牛（卵母细胞采集与培养）受体细胞为什么受体细胞为什么选用卵母细胞？选用卵母细胞？ 卵母细胞体积卵母细胞体积大，易操作；大，易操作；含有促使细胞含有促使细胞核表达全能性核表达全能性的物质和营养的物质和营养条件。条件。 为什么必须先去为什么必须先去掉卵母细胞的核掉卵母细胞

18、的核? ?为使核移植动物为使核移植动物的遗传物质的遗传物质全部来全部来自自有利用价值的动有利用价值的动物提供的细胞。物提供的细胞。为什么为什么使用去使用去核的核的减数第二次减数第二次分裂中期细胞分裂中期细胞（MM中期）？中期）？减数第二次分裂中期的卵母减数第二次分裂中期的卵母细胞细胞才具有受精的能力，才具有受精的能力，其其内含有生物生长发育的全部内含有生物生长发育的全部信息及营养，且信息及营养，且有助于动物有助于动物细胞核全能性的表达。细胞核全能性的表达。因为在这个时候去核的话对因为在这个时候去核的话对卵细胞损伤最小，卵细胞损伤最小，距离很近，距离很近，便于去核。便于去核。 为什么不是取供体为

19、什么不是取供体细胞核进行核移植操细胞核进行核移植操作，而是作，而是直接将供体直接将供体细胞整个细胞整个注入去核卵注入去核卵母细胞中？母细胞中？保证供核不被破坏，保证供核不被破坏，使所得个体的性状使所得个体的性状更符合供体。更符合供体。激活激活方法：方法：激活激活目的：目的：促融方法：促融方法：电刺激电刺激构建重组胚胎构建重组胚胎胚胎移胚胎移植植至至代孕代孕受体内受体内 妊娠、分娩妊娠、分娩体细胞核移植方法生产体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供的克隆动物是对体细胞供体动物进行了体动物进行了100%100%的复制的复制吗？吗？为什么？为什么？不是，克隆动物绝大部分不是，克隆动物绝大部分DN

20、A来自供体细胞核，来自供体细胞核，但核但核外还有外还有少部分少部分DNA（如线粒（如线粒体体DNA）来自）来自受体卵母细胞受体卵母细胞遗传物质遗传物质基本相同基本相同供体细胞供体细胞（供核）（供核）细胞细胞培养培养体细胞体细胞 卵巢卵巢卵母细卵母细胞胞（MM中期中期：供质）供质）去去核核去核卵去核卵母细胞母细胞注入注入细胞细胞融合融合重组重组细胞细胞构建构建重重组胚胎组胚胎胚胎胚胎移植移植代孕代孕母体母体生出与供体奶生出与供体奶牛牛遗传物质基遗传物质基本相同本相同的犊牛的犊牛体细胞核移植的过程体细胞核移植的过程共分成两大阶段：共分成两大阶段：核移植核移植和和胚胎移植胚胎移植受精受精卵卵体细胞核

21、移植的原理：体细胞核移植的原理：动物细胞核具有全能性动物细胞核具有全能性卵细胞卵细胞B B母绵羊母绵羊A A母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育过程多莉羊的培育过程融合后的卵细胞融合后的卵细胞黑面绵羊去黑面绵羊去核卵母细胞核卵母细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核a a重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期重组胚胎早期重组胚胎b b另一头绵羊的子宫另一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利1.1.写出写出a ba b所代所代表细胞工程

22、名称：表细胞工程名称：a a表示：表示： b b表示：表示： 2.2.实施细胞工程时，实施细胞工程时，所需受体细胞大多采所需受体细胞大多采用卵母细胞的原因：用卵母细胞的原因：体积大，易操作。含有体积大，易操作。含有促使细胞核表达全能性促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。的物质和营养条件。核移植核移植胚胎移植胚胎移植黑面绵羊去黑面绵羊去核卵母细胞核卵母细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核a a重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期重组胚胎早期重组胚胎b b另一头绵羊的子宫另一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利3.3.多利面部毛色多利面部毛色是：是： 根据遗传学原理根据遗

23、传学原理说明判断依据：说明判断依据：4.4.若黑面绵羊的基因若黑面绵羊的基因型为型为AAAA，白面绵羊的，白面绵羊的基因型为基因型为aaaa，则克隆，则克隆羊的基因型为：羊的基因型为： 白色白色多利多利全部的核基因全部的核基因都来自都来自白面绵羊白面绵羊aa细胞核具有全能性；细胞核具有全能性；细胞质具有调控细胞细胞质具有调控细胞核发育的作用。核发育的作用。黑面绵羊去黑面绵羊去核卵母细胞核卵母细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核a a重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期重组胚胎早期重组胚胎b b另一头绵羊的子宫另一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利5.5.多莉羊的成功多

24、莉羊的成功证明了什么？证明了什么？胚胎移植技术胚胎移植技术试管动物（婴儿）培养过程试管动物（婴儿）培养过程卵细胞卵细胞精子精子体外受精体外受精受精卵受精卵胚胎胚胎新个体新个体母体子宫内母体子宫内孕育、产出孕育、产出体细胞核移植流程：体细胞核移植流程：1.供体细胞的采集与培养供体细胞的采集与培养（10代以内）代以内）。5.用物理或化学方法用物理或化学方法激活激活受体细胞，使其受体细胞，使其完成细胞分裂和发育进程。完成细胞分裂和发育进程。6.电刺激电刺激促融使供体核进入受体卵母细胞，促融使供体核进入受体卵母细胞，构建构建重组胚胎重组胚胎。4.将将供体细胞供体细胞注入去核卵母细胞。注入去核卵母细胞。

25、3.显微操作显微操作去除卵母细胞中的核。去除卵母细胞中的核。2.受体受体卵母细胞卵母细胞的采集与体外培养。的采集与体外培养。7.胚胎移植胚胎移植入代孕母牛体内。入代孕母牛体内。8.妊娠分娩与供体妊娠分娩与供体遗传物质基本相同遗传物质基本相同的犊牛。的犊牛。5.5.体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景1.1.在畜牧业中可在畜牧业中可以加速家畜遗传以加速家畜遗传改良的进程。改良的进程。2.2.保护濒危物种。保护濒危物种。3.3.医药卫生领域：克医药卫生领域：克隆动物作为生物反应隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白；器，生产医用蛋白；治疗人类疾病，作为治疗人类疾病，作为组织器官移植的供

26、体。组织器官移植的供体。治疗人类疾病，作为组织器官移植的供体治疗人类疾病，作为组织器官移植的供体主要的优主要的优点是？点是？不发生免疫不发生免疫排斥反应排斥反应研究克隆动物和克隆细胞更了解研究克隆动物和克隆细胞更了解胚胎发育及细胞衰老过程；胚胎发育及细胞衰老过程；克隆动克隆动物做疾病模型，更好物做疾病模型，更好追踪研究疾病追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病。的发展过程和治疗疾病。6.6.体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题（1 1）成功率仍然非常低，产下的活）成功率仍然非常低，产下的活克隆动物比率平均不到克隆动物比率平均不到10%10%。（2 2）绝大多数克隆动物还存在健康）绝大

27、多数克隆动物还存在健康问题，许多克隆动物问题，许多克隆动物表现出遗传和生表现出遗传和生理缺陷理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。育困难，免疫失调等。（3 3）对克隆动物食品的）对克隆动物食品的安全性问题安全性问题也存有争议。也存有争议。 用于动物细胞培养的组织和用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自细胞大都取自胚胎或出生不久胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，的幼龄动物的器官或组织，其其主要原因是这样的组织细胞主要原因是这样的组织细胞 A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B.B.具有更强的全能性具有更强的全能性C.C.取材十分方便取材十分方便 D

28、.D.分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D动物细胞培养要经过脱分化？为什么？动物细胞培养要经过脱分化？为什么？一般而言，动物细胞培养一般而言，动物细胞培养不需经过不需经过脱分化过程。脱分化过程。因高度分化的动物细因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的动的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞定向分化，物细胞定向分化，通常采用定向诱通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官

29、。的组织或器官。 1 1、在动物细胞培养过程中遗传、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是物质发生改变的细胞是 A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD4.4.动物细胞培养与植物细胞培养动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于的重要区别在于A.A.培养基不同；培养基不同；B.B.动物细胞培养不需要在无菌条动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；件下进行；C.C.动物

30、细胞可以传代培养，而植动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；物细胞不能；D.D.动物细胞能够大量培养，而植动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。物细胞只能培养成植株。A知识结构知识结构 动物细动物细胞培养胞培养和核移和核移植技术植技术动物细胞培养动物细胞培养动物体动物体细胞核细胞核移植技移植技术和克术和克隆动物隆动物核移植技术和克隆动物的概念核移植技术和克隆动物的概念体细胞核移植技术的过程体细胞核移植技术的过程体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题卵母卵母细胞细胞去核去核体细体细胞取胞取核核电刺激电刺激使两细使两细胞融

31、合胞融合重组细胞重组细胞重组胚胎重组胚胎新个体新个体定义：定义：人们通常将人们通常将动物组织动物组织消化后消化后的的初次培养初次培养称为原代称为原代培养。培养。胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理取出组织取出组织胚胎或幼龄动物器官组织胚胎或幼龄动物器官组织剪碎剪碎单个细胞单个细胞细胞悬液细胞悬液转入培养瓶内培养转入培养瓶内培养 （ 贴壁生长贴壁生长长成单层细长成单层细胞。有胞。有接触抑制接触抑制现象）现象）。原代培养原代培养3.3.过程过程原代培养原代培养3 3、总结：动物细胞、总结：动物细胞培养过程培养过程动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物的组织、器官的组织、器官配置细胞悬液配置细胞悬液剪碎用胰蛋白酶

32、处理剪碎用胰蛋白酶处理1010代细胞代细胞转入培养瓶转入培养瓶40-5040-50代细胞代细胞传传代代培培养养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液稀释加培养液稀释传代传代1010代以内，代以内，遗传物质不改变，遗传物质不改变，保持保持正常正常二倍体核型二倍体核型。为什么用胰蛋白酶处理？为什么用胰蛋白酶处理？分瓶分瓶传代培养传代培养原代培养特点：原代培养特点：细胞贴壁、细胞贴壁、接触抑制接触抑制继续传代培养少部分细胞继续传代培养少部分细胞获得不获得不死性死性，细胞突变细胞突变，遗传物质已经遗传物质已经改变改变，等同于癌细胞等同于癌细胞。细胞株：细胞株：一般说一般说遗传物质未改变遗传物质未改变

33、细胞系：细胞系：遗传物遗传物质已改质已改变变原原代代培培养养1.动物细胞的培养过程动物细胞的培养过程 幼龄动物幼龄动物取动物器官取动物器官和组织和组织剪碎组织剪碎组织胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理细胞培细胞培养养单个细胞单个细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础是其他动物细胞工程技术的基础细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限无限传代传代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系如何界定原代培养和传代培养；如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？细胞株和细胞系？多数组织细胞必须在固定多数组织细胞必须在固定的表面上生长和分裂。的表面

34、上生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质改变贴壁生长细胞分裂生长到贴壁生长细胞分裂生长到相互接触时就停止分裂增相互接触时就停止分裂增殖的现象叫接触抑制殖的现象叫接触抑制核移植技术分类核移植技术分类核移植核移植胚胎细胞胚胎细胞核移植核移植 ( (易易) )体细胞体细胞核移植核移植 （难）（难） 细胞分化程度低，细胞分化程度低，恢复全能性容易恢复全能性容易受体细胞：受体细胞：MM期的卵母细胞期的卵母细胞注意：严格来说新个体有卵母细胞的细注意：严格来说新个体有卵母细胞的细胞质，所以有胞质，所以有两个亲本的性状。两个亲本的性状。 取供体细胞取供

35、体细胞传代培养传代培养1010代代以内的细胞以内的细胞. .为什么？为什么？用的是去用的是去核的减数核的减数第二次分第二次分裂中期细裂中期细胞（胞（M中中期期）为什）为什么？么？激活方法：激活方法：激活目的：激活目的：促融方法：促融方法：电刺激电刺激胚胎移植至胚胎移植至代孕受体内代孕受体内 妊娠、分娩妊娠、分娩2.）核移植流程）核移植流程供体：优质高产奶牛供体：优质高产奶牛受体：普通奶牛（卵受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）母细胞的采集与培养） 1.体积大，易体积大，易操作。操作。2.含有含有促使细胞核表促使细胞核表达全能性的物达全能性的物质和营养条件。质和营养条件。有人说它三个母有人说它三个母亲，对吗？亲，对吗？