实验二、总糖和还原糖的测定ppt课件.ppt

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1、实验二、总糖和还原糖的测定实验二、总糖和还原糖的测定3,5二硝基水杨酸法二硝基水杨酸法 目的要求目的要求 掌握还原糖和总糖的定量测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法 实验原理实验原理 在NaOH和丙三醇存在下，3,5二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 实验内容实验内容1. 葡萄糖标准曲线的制备2. 样品中还原糖的提取和含量测定3. 样品中总糖的水解、提取和含量测定注意事项：标准曲线制作与样品含糖量测定注意事项：标

2、准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色应同时进行，一起显色和比色1、葡萄糖标准曲线制作、葡萄糖标准曲线制作 1、取6支1. 5 cmm1.5cm试管，按下表加入2.0mg/mL葡萄糖标准液和蒸馏水。管号葡萄糖标准液（mL）蒸馏水(mL)葡萄糖含量(mg/mL)A540001010.20.80.420.40.60.830.60.41.240.80.21.651022、在上述试管中分别加入DNS试剂2.0mL，于沸水浴中加热2min进行 显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0mL，摇匀，在 540nm波长处测定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标， 光吸收值为纵坐标

3、，绘制标准曲线。2、样品中还原糖的提取、样品中还原糖的提取 l 准确称取1g藕粉，放在100mL烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入约40mL蒸馏水，混匀，于50恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在50mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。3、样品总糖的水解及提取、样品总糖的水解及提取 l 准确称取1g淀粉，放在大试管中，加入6M HCl 10mL，蒸馏水15mL，在沸水浴中加热0.5h，取出12滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6M NaOH溶液中

4、和至溶液呈微红色，并定容到100mL，过滤取滤液10mL于100mL容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。4、样品中含糖量的测定、样品中含糖量的测定 1、取7支15mm150mm试管，分别按下表加入试剂： 项目空白还原糖总糖0123456样品溶液（mL）11111113,5-二硝基水杨酸试剂（mL）2222222A5402、加完试剂后，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流 动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0mL，摇匀，在540nm波长 处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收平均值在标准 曲线上查出相应的糖含量。5、计、计 算算 按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：式中：C还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL；V还原糖或总糖提取液的总体积，mL；m样品重量，g；1000mg换算成g的系数。思思 考考 题题1. 比色时为什么要设计空白管？2. 糖测定过程中的干扰物质有那些？如何除去？