常见的微生物育种方法ppt课件.ppt

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1、2主要内容主要内容一、一、微生物育种简微生物育种简介介二、紫外线诱变选育二、紫外线诱变选育 （1 1）诱变机理诱变机理 （2 2）DNADNA损伤修复损伤修复 （3 3）紫外线诱变育种程序紫外线诱变育种程序 （4 4）实例：酸性实例：酸性-淀粉酶淀粉酶高产菌株选育（重点介绍测定高产菌株选育（重点介绍测定方法及结果）方法及结果）4一、微生物育种简介一、微生物育种简介 为什么要发展微生物育种技术为什么要发展微生物育种技术 微生物育种微生物育种：是以提高微生物菌株生产性能为目：是以提高微生物菌株生产性能为目标，人为改造微生物菌株的遗传性能的过程。标，人为改造微生物菌株的遗传性能的过程。 主要微生物育

2、种技术主要微生物育种技术 诱变育种诱变育种 基因重组育种基因重组育种 基因工程育种基因工程育种 代谢调控育种代谢调控育种 返回返回5（1 1）诱变机理诱变机理 紫外线诱变的主要生物学效应是由于紫外线诱变的主要生物学效应是由于DNA DNA 变变化而造成的，化而造成的，DNADNA对紫外线有强烈的吸收作用，尤对紫外线有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。 它能引起它能引起DNADNA双链之间或同一条链上两个相双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，从而导致基因突变，邻的胸腺嘧啶形成二聚体，从而导致基因突变，从而引起微生物突变或死亡。

3、经紫外线损伤的从而引起微生物突变或死亡。经紫外线损伤的DNADNA，能被能被可见光复活可见光复活。6返回返回7返回返回8（2）DNA损伤修复返回返回9（3 3）紫外线诱变育种程序紫外线诱变育种程序返回返回10接种枯草芽孢杆菌接种枯草芽孢杆菌37 24h37 24h活化菌株活化菌株100mL100mL无菌水无菌水取取2 2环环加无菌玻璃珠加无菌玻璃珠置摇床上振荡置摇床上振荡20min20min10106 6 -10108 8 个个/mL /mL 菌悬液菌悬液各取各取5 mL5 mL菌悬液菌悬液置于置于处磁力搅拌器上处磁力搅拌器上紫外灯紫外灯 照射照射1min1min先打开皿盖先打开皿盖 开启磁力

4、搅拌器开启磁力搅拌器照射照射0s0s、50s50s、60s60s、70s70s、80s 80s 、90s90s、100s100s、110s110s、120s120s暗光条件下暗光条件下 分别取经紫外线诱变的菌悬液分别取经紫外线诱变的菌悬液0.1mL0.1mL进行涂布进行涂布固体鉴别培养基固体鉴别培养基倒置于倒置于3737恒恒温培养箱中避温培养箱中避光培养光培养36h36h计算致死率计算致死率喷洒碘液喷洒碘液挑选单菌落变色圈直径挑选单菌落变色圈直径与菌落直径比值与菌落直径比值H/CH/C的菌的菌株株1818棵棵摇瓶发酵实验，摇瓶发酵实验，测定其产酶能力测定其产酶能力选取酶活最高的选取酶活最高的菌

5、株进行复筛菌株进行复筛1 111返回返回12酶活测定酶活测定5ml 2%5ml 2%可可溶性淀粉溶性淀粉5ml 0.02mol/L pH6.05ml 0.02mol/L pH6.0磷酸氢二钠磷酸氢二钠- -柠檬酸缓柠檬酸缓冲液冲液6060恒温水浴中恒温水浴中预热预热4 45min5min酶液酶液1ml1ml立即记录时间立即记录时间充分摇匀充分摇匀用滴管取反应用滴管取反应液约液约0.5ml0.5ml预先充满比色稀碘液预先充满比色稀碘液( (约约1.5ml1.5ml）当与标准终点色相同时（当与标准终点色相同时（穴穴内颜色反应由紫色逐渐变为内颜色反应由紫色逐渐变为红棕色）红棕色），即为反应终点，即为

6、反应终点，并记录时间并记录时间t(min) t(min) 2ml2ml标准终点色溶液，标准终点色溶液，作为比较颜色的标准作为比较颜色的标准发酵液经发酵液经5000rpm5000rpm离心离心10min10min，取上清作为供试酶液取上清作为供试酶液2 213计算酶活计算酶活 酶活用酶活用1ml1ml酶液于酶液于6060，pH6.0pH6.0的条件的条件下，下，1h1h液化可溶性淀粉的克数来表示液化可溶性淀粉的克数来表示gg可可溶性淀粉溶性淀粉/mlh/mlh 酶活力单位酶活力单位= 60/t= 60/t5 52%2%3 314实验结果分析实验结果分析致死率与诱变剂剂量存在正相关致死率与诱变剂剂量存在正相关1 1、紫外诱变规律：紫外诱变规律：4 4152 2、 筛选结果筛选结果经过紫外线诱变的菌株大部分酶活力有所提高经过紫外线诱变的菌株大部分酶活力有所提高5 516二次紫外线诱变结果二次紫外线诱变结果经二次紫外诱变后酶活提高不显著，菌株经二次紫外诱变后酶活提高不显著，菌株UVUV12 12 对紫外线表现出一定的耐受性对紫外线表现出一定的耐受性返回返回