动物细胞培养和核移植技术上课ppt课件.ppt
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1、 烧伤病人的治疗通烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植,康皮肤进行自体移植,但对于大面积烧伤病但对于大面积烧伤病人来讲,健康皮肤很人来讲,健康皮肤很有限,有限,请同学们想一请同学们想一想如何来治疗该病人?想如何来治疗该病人?最基础的是最基础的是 动物细胞培养技术动物细胞培养技术l动物细胞培养动物细胞培养l动物细胞核移植动物细胞核移植l动物细胞融合动物细胞融合l单克隆抗体单克隆抗体2.2.1 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术1 1、什么叫动物细胞、什么叫动物细胞培养(培养(animal cell culture) )?2 2、动物细胞
2、培养的原理是什么?动物细胞培养的原理是什么?1 1、概念:、概念:从动物机体中取出从动物机体中取出相关组织相关组织,将,将它们分散成它们分散成单个细胞单个细胞,然后放在适宜的培养,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞基中,让这些细胞生长生长和和增殖增殖。原理:原理:细胞增殖细胞增殖如何进行动物细胞培养如何进行动物细胞培养? ?放入二氧化碳放入二氧化碳培养箱中培养培养箱中培养动物细胞培养过程示意图动物细胞培养过程示意图 结合问题,阅结合问题,阅读书本,四人一读书本,四人一组,讨论写出动组,讨论写出动物细胞培养的流物细胞培养的流程图。程图。每组推选每组推选一位一位“小老师小老师”,准备上台讲解准备上
3、台讲解(5min)5min)1、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞呢?、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞呢? 2、如何将动物组织分散成单个的细胞?、如何将动物组织分散成单个的细胞?3、胰蛋白酶的作用是什么?由此可说明细胞间的物、胰蛋白酶的作用是什么?由此可说明细胞间的物 质主要是什么成分?质主要是什么成分?4、培养瓶或培养皿的内表面为何要光滑、无毒?、培养瓶或培养皿的内表面为何要光滑、无毒?5、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖?、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖?营养易供应、代谢废物易排出、方便对细胞进行操作。营养易供应、代谢废物易排出、方便对细胞进行操作
4、。先用剪刀剪碎先用剪刀剪碎, ,后用蛋白酶处理后用蛋白酶处理水解蛋白质水解蛋白质蛋白质蛋白质l细胞贴壁:细胞贴壁:悬液中分散的细胞很快就贴附在悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。瓶壁上,称为细胞贴壁。 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。易于贴附。l细胞的接触抑制:细胞的接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。种现象称为细胞的接触抑制。 要求:要求:l原代培养:原代培养:通常将直接从动物体内取出的动通常将直接从动物体内取出的
5、动物组织消化后的初次培养称为原代培养。物组织消化后的初次培养称为原代培养。l传代培养:传代培养:原代培养的细胞出现接触抑制后,原代培养的细胞出现接触抑制后,贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续培养,让细胞增殖。这样即为然后分瓶继续培养,让细胞增殖。这样即为传代培养。传代培养。1、选用组织时,一般用动物胚胎或、选用组织时,一般用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做培养材料,幼龄个体的器官或组织做培养材料,而不用老龄动物的,这是为什么?而不用老龄动物的,这是为什么?生命力旺盛,分裂能力强。生命力旺盛,分裂能力强。2、能够用胃蛋白酶代替能够用胃蛋白
6、酶代替胰蛋白酶处理组胰蛋白酶处理组织吗织吗? 不能,胃蛋白酶不能,胃蛋白酶pH=2.0,胰蛋白酶胰蛋白酶的的pH=7.2-7.4,而正常组织细胞的生存而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的环境与胰蛋白酶的pH较接近。较接近。3、动物细胞培养能否最终培养成新个体?、动物细胞培养能否最终培养成新个体? 不能,动物细胞培养只能使细不能,动物细胞培养只能使细胞数目增多,不能发育成新的动物胞数目增多,不能发育成新的动物个体个体动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬浮液细胞悬浮液10代细胞代细胞50代细胞代细胞剪碎剪碎胰蛋白酶胰蛋白酶贴壁生长贴壁生长接触抑制接
7、触抑制原代培养原代培养传代培养传代培养无限传代无限传代10代以内,保持正常二倍体核型代以内,保持正常二倍体核型加培养液制成加培养液制成单个细胞单个细胞分瓶继续培养分瓶继续培养洗涤、稀释、洗涤、稀释、分离分离细胞株细胞株遗传物质遗传物质未改变未改变细胞系细胞系遗传物质遗传物质已改变已改变多细胞动物和人体的细胞都生活多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的知识,在内环境中,根据你所学的知识,认为体外培养动物细胞应该模拟认为体外培养动物细胞应该模拟内环境的哪些条件呢?内环境的哪些条件呢?1 1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 (添加一定量的抗生素,定期更换培养液)(添加一定量的抗生素
8、,定期更换培养液)2 2、营养、营养 (葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、(葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、动动物血清物血清等)等)3 3、温度和、温度和pHpH 温度温度36.536.5+ +0.5度,度,pHpH7.2-7.4 44 4、气体环境、气体环境 O O2 2和和COCO2 2(95%95%空气和空气和5% CO2 )维持培养维持培养液的液的pH值值补充培养补充培养基中缺乏基中缺乏的物质的物质获得细胞获得细胞细胞的全能性细胞的全能性植物体植物体培养结果培养结果或细胞产物或细胞产物快速繁殖快速繁殖、培育培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、葡萄糖、动动物血清物血
9、清蔗糖、植物蔗糖、植物激素激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较细胞株、细胞系细胞株、细胞系(1 1)生产生物制品:病毒疫苗、干扰素、)生产生物制品:病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体单克隆抗体等。等。(2 2)获得大量自身的)获得大量自身的皮肤细胞皮肤细胞,用于植皮。,用于植皮。(3 3)用于检测有毒物质。)用于检测有毒物质。(4 4)用于生理、)用于生理、病理、药理病理、药理等方面的研究,等方
10、面的研究,为治疗和预防疾病提供理论依据。为治疗和预防疾病提供理论依据。三、动物细胞培养技术的应用三、动物细胞培养技术的应用1 1动物细胞工程常用的技术手段中,动物细胞工程常用的技术手段中,最基础的是最基础的是 A.A.动物细胞培养动物细胞培养 B.B.动物细胞融合动物细胞融合 C.C.单克隆抗体单克隆抗体 D.D.胚胎核移植胚胎核移植 2 2贴壁细胞的分裂方式具体是贴壁细胞的分裂方式具体是 A.A.无丝分裂无丝分裂 B.B.有丝分裂有丝分裂 C.C.减数分裂减数分裂 D.D.二分裂二分裂3 3关于动物细胞培养的叙述,不正确的是关于动物细胞培养的叙述,不正确的是 A.A.动物细胞培养前要用胰蛋白
11、酶或胶原蛋白动物细胞培养前要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散开来酶使细胞分散开来 B.B.通常将动物组织消化后的初次培养称为原通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养代培养 C.C.动物细胞培养只能传动物细胞培养只能传5050代左右,所培育的代左右,所培育的细胞全部衰老死亡细胞全部衰老死亡 D.D.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织的器官或组织 根据动物细胞核具有全能根据动物细胞核具有全能性的特点性的特点, ,怎样将动物细胞的全怎样将动物细胞的全能性表达能性表达? ? 利用动物体细胞核移植技术利用动物体细胞核移植技术 将动物的一个细胞的将动物
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