动物细胞培养和核移植技术教学用ppt课件.ppt

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1、植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？那么动物细胞常用的技术那么动物细胞常用的技术手段呢？手段呢？植物组织培养植物组织培养植物体细胞杂交植物体细胞杂交问题探讨问题探讨动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合生产单克隆抗体生产单克隆抗体动物细胞核移植动物细胞核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术其中其中动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他是其他动物细胞工程技术的基础动物细胞工程技术的基础学习目标：学习目标：1 1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用、简述动物细胞培养的过程、条件及应用2 2、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、对比说出动物细胞培

2、养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的条件、结果、培养目的一一. .动物细胞培养动物细胞培养 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。长和增殖。( (一一) )概念概念一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程阅读阅读“动物细胞培养过程动物细胞培养过程”并思考：并思考：1、动物细胞培养的技术实施的原理是什么？、动物细胞培养的技术实施的原理是什么？ 特点特点是什么？是什么？2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞

3、分散？分散？3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？做动物细胞培养材料？6、简述动物细胞培养的操作过程。、简述动物细胞培养的操作过程。 1、动物细胞培养的技术实施的原理是什么？、动物细胞培养的技术实施的原理是什么？ 原理是细胞增殖原理是细胞增殖 （有丝分裂）（有丝分裂） 。一、动物细胞培养

4、过程一、动物细胞培养过程动物细胞生长特点动物细胞生长特点：细胞贴壁：细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。壁上，称为细胞贴壁。要求：要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。易于贴附。细胞的接触抑制：细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。现象称为细胞的接触抑制。 细胞贴壁过程那么什么是接触抑制？那么什么是接触抑制？接触抑制：接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分细胞在

5、贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。增加。50代以后代以后失去接触抑制失去接触抑制接触抑制接触抑制动物细胞生长特性部分细胞突变，获部分细胞突变，获得不死性，向癌细得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋胞方向发展，糖蛋白减少。白减少。 2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？细胞分散？ 分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排出分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排出代谢废物；而用大块组织培养时，内

6、部细胞的营代谢废物；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难。养供应和代谢废物的排出都较困难。 一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程 3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？ 细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。 胃蛋白酶作用的适宜胃蛋白酶作用的适宜pH约为约为2，当，当pH大于大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境宜环境pH为为7.28.4。多数动物细胞

7、培养的适宜。多数动物细胞培养的适宜pH为为7.27.4。 一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程 5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？织做动物细胞培养材料？动物

8、胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们的细胞分化程度低，增殖能力强，分裂旺的细胞分化程度低，增殖能力强，分裂旺盛，容易培养。盛，容易培养。一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程 6、简述动物细胞、简述动物细胞培养的操作过程培养的操作过程分离组织（低幼动物）分离组织（低幼动物）分散细胞（胰蛋白酶）分散细胞（胰蛋白酶）原代培养（细胞增殖）原代培养（细胞增殖）传代培养（细胞增殖）传代培养（细胞增殖）分装分装聚焦一、动物细胞培养过程聚焦一、动物细胞培养过程 深度思考：深度思考： 7、什么是原代培养、什么是原代培养、传代培养？为什么要进行传代培养？为什么要进行传代培养？传

9、代培养？ 8、传代培养中，第、传代培养中，第10代细胞与第代细胞与第50代以后细胞代以后细胞的主要区别是什么？的主要区别是什么？ 9、你如何解释、你如何解释“多利多利”的早衰现象？的早衰现象？一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程 10、动物细胞培养能否象植物组织培养那样、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗？获得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗？ 7、什么是原代培、什么是原代培养、传代培养？为什养、传代培养？为什么要进行传代培养？么要进行传代培养？原代培养：原代培养： 取材（动物组织）取材（动物组织） 细胞细胞分散分散初次培养初次培养传代培养：传代培养

10、： 培养的细胞培养的细胞细胞细胞分散分散继续培养继续培养进行传代培养的原因：进行传代培养的原因： 接触抑制接触抑制一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程8、传代培养中，、传代培养中，第第10代细胞与第代细胞与第50代以后细胞的主要代以后细胞的主要区别是什么？区别是什么？ 细胞癌变细胞癌变,失去接触失去接触抑制特性。抑制特性。一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程9、你如何解释、你如何解释“多利多利”的早衰现象？的早衰现象？ 培育培育“多利多利”所取细胞所取细胞核来自成年羊。从细胞年龄核来自成年羊。从细胞年龄来看，来看， “多利多利”出生时，已出生时，已是是“羊羊”到中年。到中年。一、动物细

11、胞培养过程一、动物细胞培养过程 10、动物细胞培养能否象植物组织培养那样、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗？获得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗？ 不可以，因为高度分化的动物细胞的全能性受不可以，因为高度分化的动物细胞的全能性受到抑制。到抑制。 不需要诱导其脱分化。不需要诱导其脱分化。一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程小结过程：小结过程：幼龄动物或胚胎的组织、幼龄动物或胚胎的组织、器官器官细胞悬浮液细胞悬浮液（单个细胞）单个细胞）胰蛋白酶胰蛋白酶动物组织细胞间隙中动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞维等蛋白质，

12、将细胞网络起来形成具有一网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织定弹性和韧性的组织和器官。和器官。（分解弹性纤维）（分解弹性纤维）10代细胞代细胞原代培养原代培养50代细胞代细胞传代培养传代培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质改变改变接触抑制接触抑制剪碎一、动物细胞培养过程一、动物细胞培养过程动物细胞培养不能动物细胞培养不能最终培养成生物体最终培养成生物体原代培养 (primary culture) 定义：把第1代细胞的培养与传10代以内的细胞培养统称为原代培养。过程：从动物机体中取出组织 剪碎 加胰蛋白酶 细胞游离 加培养液 将细胞接种到培养瓶

13、内 培养（12天换一次培养液） 细胞贴壁生长 长成单层细胞取材（动物组织）取材（动物组织） 细胞分散细胞分散初次培养初次培养传代培养 (subculture) 定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养培养的细胞培养的细胞细胞分散细胞分散继续培养继续培养 细胞株：细胞株：原代细胞一般传至原代细胞一般传至1010代左右代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到少数细胞存活到40504050代，这种传代细

14、代，这种传代细胞为细胞株。胞为细胞株。细胞系：细胞系：细胞株传代至细胞株传代至5050代后又出现代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞株和细胞系的区别： 细胞系的细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。失去接触抑制，容易传代培养。 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中据此思考：据此思考： 1

15、.内环境稳态包括呢些方面？内环境稳态包括呢些方面？ 适宜的温度、适宜的温度、pH值、渗透压、营养、氧气。值、渗透压、营养、氧气。 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 无菌、无毒的环境。无菌、无毒的环境。 二、动物细胞培养条件二、动物细胞培养条件3.体外培养细胞时需要提供哪些物质？如体外培养细胞时需要提供哪些物质？如何才能保证类似于内环境的营养环境？培何才能保证类似于内环境的营养环境？培养基应是液态还是固态？养基应是液态还是固态？ 充足的营养、适宜的温度、充足的营养、适宜的温度、pH和气体和气体环境。加入动物血清。培养基应是液态。环境。加入动物血清。培养

16、基应是液态。思考：动物血清的作用？思考：动物血清的作用？主要是：提供有利于细胞生长增殖所需的主要是：提供有利于细胞生长增殖所需的激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏的营养物质等。的营养物质等。 保证细胞顺利的保证细胞顺利的生长增殖生长增殖 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1. 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2.2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ P4

17、6讨讨 论论充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。）元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。）适宜温度、适宜温度、PHPH和气体环境；无菌无毒环境和气体环境；无菌无毒环境动物细胞培养条件总结：动物细胞培养条件总结：1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液）（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.44、气体

18、环境：、气体环境： O2和和CO2（95%空气和空气和5% CO2 ）保证细胞顺利的保证细胞顺利的生长增殖生长增殖动物细胞培养液的主要成分：动物细胞培养液的主要成分：葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和、氨基酸、无机盐、维生素和动物动物血清血清等。等。与植物培养基相比其特点是：与植物培养基相比其特点是：（1 1）液体培养基）液体培养基（2 2）含有动物血清）含有动物血清动物体细胞大都生活动物体细胞大都生活在在液体液体的环境的环境植物组织培养呢？植物组织培养呢？无机盐、蔗糖无机盐、蔗糖 、维生素、生、维生素、生长调节物质、植物激素长调节物质、植物激素成分比较：成分比较：三、动物细胞培养的应用三

19、、动物细胞培养的应用 P47最上面最上面1、获得细胞产物，如蛋白质生物制品病毒、获得细胞产物，如蛋白质生物制品病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等疫苗、干扰素、单克隆抗体等2、获得烧伤病人植皮所需的细胞、获得烧伤病人植皮所需的细胞 3、获得细胞用于检测有毒物质、获得细胞用于检测有毒物质4、为治疗及预防疾病提供理论依据。、为治疗及预防疾病提供理论依据。植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基状态培养基状态 固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有培养基

20、特有成分成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素 葡萄糖葡萄糖 动物血清动物血清培养结果培养结果植物体植物体细胞株、细胞系细胞株、细胞系培养目的培养目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株无病毒植株获得细胞或细胞分获得细胞或细胞分泌蛋白泌蛋白 1 1、叙述多莉羊、高产奶牛的克隆过程、叙述多莉羊、高产奶牛的克隆过程 2 2、说出多莉羊和高产奶牛的克隆过程的不同点？、说出多莉羊和高产奶牛的克隆过程的不同点？ 3 3、说出体细胞核移植技术的应用前景及存在的问题、说出体细胞核移植技术的应用前景及存在的问题学习目标：学习目标： 动物细胞培养能获得克隆个体吗？如何才能获动物细胞培养能获得克隆个体吗？如何才能获得克

21、隆动物？得克隆动物？黑面绵羊去黑面绵羊去核卵母细胞核卵母细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核细胞核移植细胞核移植重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另一头绵羊的子宫另一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物归纳动物核移植定义：归纳动物核移植定义： 将动物的一个细胞的将动物的一个细胞的细胞核细胞核移入一个已经移入一个已经去核去核的的卵母细胞卵母细胞中，使其中，使其重组重组并发育成一个新的胚胎，并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成这个新的胚胎最终发育成动物个体（克隆动物）动

22、物个体（克隆动物）动物细胞全能性受限。动物细胞全能性受限。分分类类胚胎细胞核移植：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度细胞分化程度高高，恢复全能性，恢复全能性不不容易容易四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育过程多莉羊的培育过程融合后的卵细胞融合后的卵细胞阅读阅读p47思考：思考：1、哺乳

23、动物核移植可以为哪几类？全能性如何？、哺乳动物核移植可以为哪几类？全能性如何？2、动物克隆实例很多，为何多莉就举世闻名呢？、动物克隆实例很多，为何多莉就举世闻名呢？ 四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物 “多莉多莉” 是世界上是世界上第一例第一例经体细胞核移植出生的经体细胞核移植出生的动物。这一巨大进展动物。这一巨大进展证明了分化了的动物证明了分化了的动物细胞核细胞核具有全能性具有全能性四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1997年，美国威斯康星州年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛的一个奶牛场有一头名叫卢辛达的奶牛，年

24、产奶量为达的奶牛，年产奶量为30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶量年十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为平均水平仅为34 t。 能否依据能否依据“多利多利”的培育过的培育过程，进行优质奶牛的程，进行优质奶牛的快速繁育快速繁育？请说明理由。请说明理由。 体细胞的细体细胞的细胞核具有全能性。胞核具有全能性。读图读图2-21，思考：，思考： 1、对比多莉羊和高产奶牛的克隆过程，找出、对比多莉羊和高产奶牛的克隆过程，找出操作过程的不同点？操作过程

25、的不同点？ 2、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 3、为什么用于核移植的供体细胞一般都选用、为什么用于核移植的供体细胞一般都选用传代传代10代以内的细胞？代以内的细胞？ 4、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？ 5、多莉羊和高产奶牛的克隆过程、多莉羊和高产奶牛的克隆过程,哪一种更科哪一种更科学且易操作？学且易操作？ 6、简述高产奶牛的克隆过程。、简述高产奶牛的克

26、隆过程。四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1、对比多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，、对比多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，找出操作过程的不同点？找出操作过程的不同点？ 多莉克隆过程的受体细胞是多莉克隆过程的受体细胞是去核去核卵卵细细胞胞，而高产奶牛的克隆过程的受体细胞是，而高产奶牛的克隆过程的受体细胞是去核去核次级次级卵母卵母细胞细胞； 多莉克隆过程是将供体多莉克隆过程是将供体细胞核细胞核注入受注入受体细胞，而高产奶牛的克隆过程是将供体体细胞，而高产奶牛的克隆过程是将供体细胞细胞注入受体细胞。注入受体细胞。四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植

27、技术和克隆动物 2、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植动物的遗传物质全部来自有为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。利用价值的动物提供的细胞。四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物3、为什么用于核移植的供体细胞一般都选用、为什么用于核移植的供体细胞一般都选用传代传代10代以内的细胞？代以内的细胞？ 10 10代以内的细胞一般保持正常二倍体的代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未发生突变。核型，未发生突变。四、动物体

28、细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物 4、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什的复制吗？为什么？么？ 不是，克隆动物绝大部分不是，克隆动物绝大部分DNADNA来自供体来自供体细胞核，但核外还有少部分细胞核，但核外还有少部分DNADNA（如线粒体（如线粒体DNADNA）来自受体卵母细胞）来自受体卵母细胞四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物 5、多莉羊和高产奶牛的克隆过程、多莉羊和高产奶牛的克隆过程,哪一种哪一种更科学且易操作？更科学且易操作？ 卵母

29、细胞当中的细胞周期蛋白含量、活卵母细胞当中的细胞周期蛋白含量、活性比卵细胞高，用它作受体更容易成功。性比卵细胞高，用它作受体更容易成功。 将供体细胞注入受体细胞，使克隆动物将供体细胞注入受体细胞，使克隆动物更像供体动物。更像供体动物。 高产奶牛的克隆过程高产奶牛的克隆过程操作简便。操作简便。四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物 6、简述高产、简述高产奶牛的克隆过程。奶牛的克隆过程。四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物 6、简述高产、简述高产奶牛的克隆过程。奶牛的克隆过程。四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和

30、克隆动物（MM卵母细胞）卵母细胞）去核的卵去核的卵母细胞母细胞胚胎移植胚胎移植供体细胞注入去供体细胞注入去核卵母细胞核卵母细胞 激活受体细胞，激活受体细胞，完成分裂、发育完成分裂、发育去核卵母细去核卵母细胞体积比较胞体积比较大大MM卵母卵母细胞去核细胞去核培养的培养的体细胞体细胞重组细胞重组细胞重组胚胎重组胚胎新个体新个体四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物电刺激电刺激促融合、促融合、分裂、分裂、发育发育 1997 1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（头名叫卢辛达（LucindaLucinda）的奶牛，年产奶

31、量为）的奶牛，年产奶量为30.8 t30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为3 34 t4 t。 （2 2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？你，你将如何对它进行克隆？四、动物体细胞核移植技术和克隆动物四、动物体细胞核移植技术和克隆动物 首先从卢辛达耳朵（也可用别首先从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体上容易的组织、器

32、官，耳朵在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外培取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织（如软骨组织）的细养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成熟。用显微取卵母细胞体外培养成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细胞针去除卵母细胞的核，再将耳细胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与体细胞融合，这时供体核母细胞与体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细胞，再用电刺就进入了受体卵母细胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核激或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使其完成减数分裂和的卵母细胞

33、，使其完成减数分裂和发育过程。核移植胚胎在体外短时发育过程。核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。入经同期发情处理的受体母牛体内。M卵母卵母细胞去核细胞去核培养的培养的体细胞体细胞重组细胞重组细胞重组胚胎重组胚胎新个体新个体电刺激电刺激促融合、促融合、分裂、分裂、发育发育 1、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 2、保护濒危物种，增加动物的存活数量、保护濒危物种，增加动物的存活数量 3、可作为生物反应器，生产医用蛋白、可作为生物反应器，生产医用蛋白 克隆动物细胞、组织、器官可作

34、为移植的供体克隆动物细胞、组织、器官可作为移植的供体了解胚胎发育及衰老过程、做疾病模型等了解胚胎发育及衰老过程、做疾病模型等五、体细胞核移植技术的应用前景五、体细胞核移植技术的应用前景五、体细胞核移植技术的应用前景五、体细胞核移植技术的应用前景 胚胎移植动物幼体产出概率胚胎移植动物幼体产出概率10 克隆动物存在着健康问题。例如：许多克隆动物存在着健康问题。例如：许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。陷，免疫失调等。 克隆动物的食品安全性问题存在争议克隆动物的食品安全性问题存在争议六、体细胞核移植技术存在的问题六、体细胞核移植技术存在的问题