实验一-纸层析法分离鉴定氨基酸ppt课件.ppt

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1、181通过实验，掌握纸层析的基本操作技能。通过实验，掌握纸层析的基本操作技能。加深对分配层析原理的理解。加深对分配层析原理的理解。182是利用混合物中各组分的物理化学性质是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为一相为，另一相流过此相称作，另一相流过此相称作，并使，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。糖类、有机酸、氨基酸、核苷等糖类、有机酸、氨基酸、核苷等183 在层析中在层析中的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结合的的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结

2、合的水。固定相被看成是样品移动的阻力。水。固定相被看成是样品移动的阻力。 在层析过程因其本身流动而在层析过程因其本身流动而的物质。的物质。184名称名称操作方式操作方式固定相固定相流动相流动相分离依据分离依据 分配层析分配层析 纸层析纸层析 薄层层析薄层层析液体液体液体液体 溶解度溶解度 离子交换层析离子交换层析 离子交换柱层析离子交换柱层析固体固体液体液体 带电性带电性 静电引力静电引力 吸附层析吸附层析 吸附薄层层析吸附薄层层析 气体吸附层析气体吸附层析固体固体液体液体气体气体 吸附力吸附力 亲和层析亲和层析 酶与底物酶与底物 抗原与抗体抗原与抗体固体固体液体液体 配体专一性配体专一性 凝

3、胶层析凝胶层析 凝胶过滤凝胶过滤固体固体液体液体 分子大小分子大小185：是利用不同物质在两种不相溶的溶剂：是利用不同物质在两种不相溶的溶剂中的分配系数不同而达到分离的一种技术。中的分配系数不同而达到分离的一种技术。分配系数分配系数 =溶质在固定相的溶解度溶质在固定相的溶解度溶质在流动相的溶解度溶质在流动相的溶解度186 纸层析是以滤纸作为惰性支持物的纸层析是以滤纸作为惰性支持物的：纸纤维上的：纸纤维上的 OHOH 基具有亲水性，所基具有亲水性，所以能以能一层一层，而通常把而通常把作为作为。流动相流经支持物时与固。流动相流经支持物时与固定相间连续抽提，使物质在两相间不断地分定相间连续抽提，使物

4、质在两相间不断地分配而得到分离。配而得到分离。187v 溶质在滤纸上的移动速率用溶质在滤纸上的移动速率用f（比移）值来（比移）值来表示：表示： 展层层斑点中心与原点间的距离 Rf = - 溶剂前沿与原点之间的距离188189物质的极性大小决定了物质在水物质的极性大小决定了物质在水 和有机溶剂之间的分配情况。和有机溶剂之间的分配情况。 展层剂的展层剂的pHpH影响被分离物质的极性基团影响被分离物质的极性基团的解离形式。的解离形式。层析用滤纸要质地均匀，紧密，层析用滤纸要质地均匀，紧密， 有一定的机械强度，并含杂质少。国产新华滤纸可有一定的机械强度，并含杂质少。国产新华滤纸可 用于一般的纸层析。用

5、于一般的纸层析。1810181118121813下次实验下次实验 ：实验二实验二 蛋白质和氨基酸的颜色反应蛋白质和氨基酸的颜色反应1814小实验小实验1815v可以看出可以看出1 1号氨基酸上升的最号氨基酸上升的最高，在滤纸上跑得最快。高，在滤纸上跑得最快。v而而4 4号氨基酸与滤纸的结合最号氨基酸与滤纸的结合最紧，因此跑的速度比其他的紧，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。氨基酸慢。12341816v这就是纸色谱法。这就是纸色谱法。v对照上图，可知道对照上图，可知道1-41-4号的各号的各代表什么氨基酸。代表什么氨基酸。v纸色谱法是分离鉴定蛋白质的纸色谱法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具。氨基酸组成的重要工具。 1234甘氨酸半胱氨酸组氨酸缬氨酸1817纸色谱小实验动画演示纸色谱小实验动画演示1818