2022年病毒的主要成分 .pdf

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1、病毒的主要成分一、病毒的结构包膜：蛋白质、多糖、脂类是某些病毒在成熟过程中穿过宿主细胞，以出芽方式向宿主细胞外释放时获得的，含有宿主细胞膜或核膜成分。有包膜的病毒体称为包膜病毒，无包膜的称为裸露病毒。包膜的主要作用：维持病毒体结构的完整性。核衣壳： 1、核心：核酸2、衣壳：包绕在核酸外面的蛋白质外壳。衣壳具有抗原性，是病毒的主要抗原成分， 可保护病毒核酸免受环境中核酸酶或其他影响因素的破坏，并能介导病毒进入宿主细胞。 有以下类型： 螺旋对称性， 20 面体对称性， 复合对称性。二、病毒的化学组成和功能1、病毒核酸： DNA 或 RNA，是主导病毒感染、 增殖、遗传、变异的物质基础。部分核酸偶感

2、染性。2、病毒蛋白质：病毒的主要成分，约占病毒体总重量的70%，由病毒基因组编码，具有病毒的特异性。3、脂类和糖：脂质主要存在包膜中。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 21 页 - - - - - - - - - 病毒的致病作用一、病毒感染的传播方式病毒感染的传播方式有水平传播和垂直传播二、病毒感染的致病机制对宿主细胞的致病作用1、杀细胞效应：2、稳定状态感染：不具有杀细胞效应的病毒引起的感染细胞融合：其结果是形成多核巨细胞或合胞体。细胞表面出现病毒基因编码

3、的抗原：病毒感染的细胞膜上常出现病毒基因编码的新抗原。3、包涵体形成：4、细胞凋亡：5、基因整合与细胞转化：病毒感染的免疫病理作用通过与免疫系统相互作用，诱发免疫反应损伤机体。1、抗体介导的免疫病理作用：病毒的包膜蛋白、衣壳蛋白均为良好的抗原，能刺激机体产生相应抗体。2、细胞介导的免疫病理作用：3、致炎性细胞因子的病理作用：4、免疫抑制作用：某些病毒感染可抑制免疫功能。病毒的免疫逃逸名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 21 页 - - - - - - - -

4、- 病毒的免疫逃逸能力： 病毒可能通过逃避免疫监视、 防止免疫激活或阻止免疫反应发生的方式逃脱免疫应答。三、病毒感染的类型显性感染与隐性感染1、显性病毒感染：2、 隐性病毒感染：病毒进入机体不引起临床症状。 隐性感染者称为病毒携带者。急性病毒感染持续性病毒感染： 1、潜伏感染：潜伏期查不出病毒。凡使机体免疫力下降的因素均可激活潜伏病毒使感染复发。2、慢性感染：感染后未完全清除，在血中科持续检测出病毒。3、满发病毒感染：慢性发展的进行性加重病毒感染。较为少见但后果严重。4、急性病毒感染的迟发并发症：呼吸道病毒正粘病毒包括甲、乙、丙型流感病毒一、生物学性状形态结构1、 核衣壳：由病毒分节段的单负链

5、RNA 与核蛋白 (NP) 组成。其上还附着有 RNA名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页，共 21 页 - - - - - - - - - 依赖的 RNA 复合酶复合体蛋白。甲乙型流感病毒有8 个节段。流感病毒的核酸无感染性。NP 是主要的结构蛋白，抗原结构稳定，与M 蛋白一起决定病毒的型特异性，很少发生变异，其抗体中无中和病毒的能力。根据 NP 和 MP 的抗原性不同，可将流感病毒分为甲、乙、丙三型。2、包膜：由内层基质蛋白（MP ）和外层脂蛋白（ LP）组成。

6、其作用为：维持病毒外形和完整性。MP 蛋白抗原结构较稳定，呈型特异性，其抗体中无中和病毒的能力。刺突：血凝素（ HA ）和神经氨酸酶（ NA ） 。HA 和 NA 的抗原结构很不稳定，易发生变异，是划分甲型流感病毒亚型的主要依据。抵抗力流感病毒的抵抗力较弱。培养特性1、细胞培养2、动物接种3、鸡胚尿囊腔培养二、致病性和免疫性致病性流感病毒抗原易变异，传播迅速，是引起流行性感冒的主要病毒。丙型流感病毒只感染人类。免疫性名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 4 页，共 21 页

7、 - - - - - - - - - 机体可形成特异性免疫应答。呼吸道粘膜局部分泌的sIgA 抗体有阻断病毒感染的保护作用，但只能短暂存在几个月。血清中抗 HA 特异性抗体为中和抗体，有抗病毒感染、减轻病情的作用，可持续数月至数年。副粘膜病毒副粘膜病毒科包括：副流感病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺验病毒、尼派病毒、人偏肺病毒等。一、麻疹病毒抗原性较稳定，只有一个血清型。麻疹病毒的唯一自然储存宿主为人，主要通过费米传播， 感染性极强， 易感者接触后几乎全都发病。二、腮腺炎病毒主要引起腮腺肿胀、疼痛为主要症状的流行性腮腺炎。腮腺炎病毒只有一个血清型。人是腮腺炎病毒的唯一储存宿主，主要通过飞沫传

8、播。病后可获得持久免疫。桃拉综合征病毒病病原：桃拉综合症病毒(TSV) 属于 RNA 病毒，二十面体，无囊膜，有包涵体。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 5 页，共 21 页 - - - - - - - - - 症状：身体从尾扇开始发红，发红部位逐渐前推，病虾不变软，病情后期身体出现黑斑。感染对象：主要感染南美白对虾，主要发生在虾的蜕皮期传播方式：主要是水平传播我国由于引进南美白对虾并进行了规模养殖，该病在南美白对虾养殖密集区中已有发现。病虾不吃食或少量吃食， 在水面缓

9、慢游动， 在特急性到急性期， 幼虾身体虚弱，外壳柔软，消化道空无食物，在附足上会有红色的色素沉着，尤其是尾足、尾节、腹肢，有时整个虾体体表都变成红色。较大规格的病虾步足末端有蛀断、溃疡现象，两根触须、尾扇、胃肠道均变红，胃肠道肿胀（肠内有少量食物），肝胰脏肿大，变白。透过部分病虾的甲壳，发现肌肉由原来的半透明变成白浊，尤其是腹部末端， 似甲壳与肌肉分离状。 部分病虾的头胸甲处出现白区，镜检发现甲壳和胃肠壁压片红色素细胞扩散。染病初期大部分病虾头胸甲有白斑，久病不愈的病虾甲壳上有不规则的黑斑。由于病毒病的来势较快，感染率较高，死亡率较大，因此，对病毒病的预防工作尤其重要：1、生石灰，一次量，每

10、667m3 水体，100 150kg ，彻底清塘、曝晒池底。2、生石灰，一次量，每1m3 水体， 0.10.2g 或 1520g ，全池泼洒，1520 天 1 次。3、聚维酮碘对受精卵浸浴消毒。4、养殖过程中一般采用益水宝、高能氧、亚硝酸盐降解灵等，保持水体的名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 6 页，共 21 页 - - - - - - - - - 相对稳定， 定期进行池塘消毒， 杀灭抑制水体中病原微生物的繁殖，饲料中添加维 C、 免疫多糖、生物酶添加剂等提高虾体的免疫

11、力，改善肠胃的微循环；同时添加对虾病毒净、氟苯尼考等抗菌药物控制虾体内病原微生物的繁殖。5、投优质饵料，定时定量投喂。双生病毒科双生病毒科的病毒粒子为双联体结构，无包膜，由两个不完整的二十面体组成。双生病毒科的病毒一般发生在热带和亚热带地区。该科下共有3 个属。中文学名：双生病毒科拉丁学名：Geminiviridae 界：病毒界科：双生病毒科特征病毒粒子为双联体结构，每个粒子大小为18nm 30nm ，无包膜，由两个不完整的二十面体组成 （T=1 ） ，共有 22 个五聚体壳粒。 病毒的外壳蛋白由单个多肽组成，分子质量为2834kDa ，每个壳粒结构估计有5 个外壳蛋白分子。该科是植物病毒中惟

12、一具有单链DNA 的单分体或二分体基因组病毒。病毒包裹单分子或两分子闭环状ssDNA ，每分子 DNA 长 2.53.0kb ，总基因长约2.55.2kb 。编码区分布于 DNA 的病毒链和互补链，其中间为基因间隔区。病毒复制是经一个双链复制中间体，通过滚环复制，ssDNA 合成起始于基因间隔名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 7 页，共 21 页 - - - - - - - - - 区的一段保守序列TAATATT/AC，病毒基因双向转录，在基因间隔区具有转录起始点。大多

13、数双生病毒的增殖部位局限于植物韧皮部组织，在细胞核中形成病毒粒子聚集体， 细胞核膨大并形成颗粒状结构和纤维状结构，纤维状环可能是病毒复制装配的场所。双生病毒科的病毒一般发生在热带和亚热带地区。该科中的玉米线条病毒属主要限于侵染禾本科单子叶植物， 菜豆金色花叶病毒属和曲顶病毒属侵染双子叶植物。自然界中， 玉米线条病毒属和曲顶病毒属通过叶蝉以持久方式传播，菜豆金色花叶病毒属通过粉虱以持久方式传播，病毒在介体昆虫中不繁殖， 虫卵不带毒。有些种也可以通过机械传毒，但通常较难。病毒具有效的免疫原性，菜豆金色花叶病毒属内病毒之间有血清学关系，曲顶病毒属与菜豆金色花叶病毒属的一些病毒有远缘血清学关系。玉米线

14、条病毒属（单分体基因组、叶蝉传播、单子叶植物寄主）曲顶病毒属（单分体基因组、叶蝉或角蝉传播、双子叶植物寄主）菜豆金色花叶病毒属（多为二分体基因组、粉虱传播、双子叶植物寄主）病毒的分类地位病毒(VIRUS) 被认为是一种无细胞结构的低等生物,长期以来 ,病毒的分类地位一直很不清晰 ,生物界大约有两种大相径庭的分类方法: 1.认为病毒结构简单 ,并名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 8 页，共 21 页 - - - - - - - - - 且大多数以RNA 为遗传物质 ,起源

15、于最原始的有机化学结构,是产生于细胞之前的原始地球的一种生命形式.因此,按此学说 ,其产生从发生时间看,要早与细胞生物. 2.认为病毒缺乏自主的生命活动,只有在细胞内才能体现生命现象,并且全部为胞内寄生 ,依靠寄主合成自身物质.因而 ,病毒的发生应晚于细胞,它们可能是细胞在进化中扔掉的核酸片断. 近年来 ,因对病毒的了解进一步深入,发现了大量证据支持第二种学说,因而现在一般把病毒的起源定在细胞生命体之后.以上是前人关于病毒的看法,下面使我的观点 . 在下对于物理学略有研究的基础上,又接触到了DR.考夫曼的著作 ,其上病毒被认为是一种趋于最低能量的稳定结构,其遗传物质的排布几乎都达到了最低能量水

16、平 ,病毒体就成为了一个低熵物质,这就带来两个结果,一个是使病毒可以耐受极为苛刻的环境 ,二是使其不具有主动的生命活动. 而一切细胞生物包括我们自己都是一个不断在向外排熵的物体,我们的熵是无时无刻不在增大的,只是我们在不停的将其转移到环境中去,我们自身才保持了一个动态平衡,疾病从本质上来讲 ,就是此平衡遭破坏 ,因而 ,我们乃至整个生物圈实际上都是一种耗散结构 ,不断得注入能量 ,不断的消耗 ,才能不断的生息繁衍. 由此,我们大概也能看出其中不同了 .从本质上来说 ,病毒是与我们完全不同的生命形式! 因而 ,细胞与病毒有可能并没有先后问题,它们完全有可能是平行进化的.只是它们走得是两条截然不同

17、的路,是主动的稳定与被动的稳定.而两者都达到了生存的名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 9 页，共 21 页 - - - - - - - - - 目的.两者都是自然选择的成功者. EB 病毒概述EB 病毒（ epstein-barr virus ，EBv）是 epstein 和 barr 于 1964 年首次成功地将 burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，故名。EB 病毒的形态与其他疱疹病毒相似，圆形、 直径

18、180nm ， 基本结构含核样物、衣壳和囊膜三部分。核样物为直径 45nm的致密物，主要含双股线性dna ，其长度随不同毒株而异平均为17.5 104bp分子量 108.衣壳为 20 面体立体对称，由162 个壳微粒组成。囊膜由感染细胞的核膜组成，其上有病毒编码的膜糖蛋白，有识别淋巴细胞上的EB 病毒受体，及与细胞融合等功能。此外在囊膜与衣壳之间还有一层蛋白被膜。EB病毒仅能在 b 淋巴细胞中增殖，可使其转化，能长期传代。被病毒感染的细胞具有 EBv 的基因组，并可产生各种抗原，已确定的有：EBv 核抗原 （EBna） ，早期抗原（ea） ， 膜抗原（ma ） ， 衣壳抗原（vca） ， 淋巴

19、细胞识别膜抗原 （lydma ） 。除 lydma 外，鼻咽癌患者 EBna、ma 、vca、ea 均产生相应的 lgg 和 lga 抗体，研究这些抗原及其抗体，对阐明EBv 与鼻咽癌关系及早期诊断均有重要意义。EB病毒长期潜伏在淋巴细胞内，以环状dna 形式游离在胞浆中，并整合天染色体内。EB 病毒在人群中广泛感染，根据血清学调查，我国35 岁儿童 EB 病毒vca-lgg抗体阳性率达90% 以上，幼儿感染后多数无明显症状，或引起轻症咽炎和上呼吸道感染。青年期发生原发感染，约有50% 出现传染性单核细胞增多名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - -

20、- - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 10 页，共 21 页 - - - - - - - - - 症。主要通过唾液传播，也可经输血传染。EB 病毒在口咽部上皮细胞内增殖，然后感染 b 淋巴细胞，这些细胞大量进入血液循环而造成全身性感染。并可长期潜伏在人体淋巴组织中，当机体免疫功能低下时，潜伏的EB 病毒活化形成得复发感染。人体感染EBv 后能诱生抗 EBna 抗体，抗 ea 抗体，抗 vca 抗体及抗ma 抗体。已证明抗 ma 抗原的抗体能中和EBv.上述体液免疫系统能阻止外源性病毒感染，却不能消灭病毒的潜伏感染。一般认为细胞免疫（如t 淋巴细胞的细胞毒反应

21、）对病毒活化的“监视”和清除转化的b 淋细胞起关键作用。由EBv感染引起或与EBv 感染有关疾病主要有传染性单核细胞增多症、非洲儿童淋巴瘤（即 burkitt淋巴瘤） 、鼻咽癌。所有的病毒感染都是不可能根除的， 也就是从体内彻底清除， 只能加强锻炼，加强营养，提高免疫力。一、免疫性人体感染 EBV 后能诱生抗 EBNA 抗体，抗 EA 抗体，抗 VCA 抗体及抗 MA抗体。已证明抗MA 抗原的抗体能中和EBV.上述体液免疫系统能阻止外源性病毒感染，却不能消灭病毒的潜伏感染。 一般认为细胞免疫 （如 T 淋巴细胞的细胞毒反应）对病毒活化的“监视”和清除转化的B 淋细胞起关键作用。二、微生物学诊断

22、EBV 分离培养困难， 一般用血清学方法辅助诊断。 在有条件实验室可用核酸杂交和 PCR等方法检测细胞内EBV 基因组及其表达产物。（一） EBV 特异性抗体的检测用免疫酶染色法或免疫荧光技术检出血清中EBVlgG 抗体，可诊断为 EBV 近期感染。在鼻咽癌血清中可测出VCA-lgG 抗体达 90% 左右，病情好转；抗体效价不降， 因此对鼻咽癌诊断及预后判断有价值。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 11 页，共 21 页 - - - - - - - - - 尤其我国学者

23、大规模人群调查，发现抗EA-lgA 效价上升，极大地增加了得鼻咽癌的危险性，为该癌肿的早期诊断，提供了重要手段。（二） 嗜异性抗体凝集试验主要用于传染性单核白细胞增多症的辅助诊断，患者于发病早期血清可出现lgM 型抗体，能凝集绵羊红细胞， 抗体效价超过 1：100 有诊断意义，但只有60 80% 病例呈阳性，且少数正常人和血清病病人也含有此抗体， 不过正常人和血清病人的抗体经豚鼠肾组织细胞吸收试验，可变为阴性。三、临床表现CAEBV 发生在非免疫缺陷个体， CAEBV 不是一种独立的疾病， 可发生在任何年龄 . 由于 EBV 可使不同部位各种类型淋巴细胞感染及克隆增生，临床表现多种多样，其病理

24、改变几乎可涉及到各个器官。T 细胞类型的 CAEBV 主要表现为发烧、VCA-IgG 及 EA-IgG 抗体滴度升高； NK 细胞类型的 CAEBV 主要表现为蚊虫过敏及相应的皮肤损害，骨髓或外周血中大颗粒细胞增多及IgE 滴度升高。四、主要症状和体征发烧（92.7% ） ，可呈现低烧、中等度烧及高烧，合并HLH 时常常出现高烧不退。发热原因主要与CAEBV 时 IFN- 、肿瘤坏死因子（ TNF- ）及白介素等细胞因子的异常分泌有关，也可能和继发感染有关。肝脏肿大（79.3% ） ， 脾脏肿大（73.2% ） ， 肝功能异常（67.1% ） ，血小板减少症（ 45.1% ） ， 贫血（43.

25、9% ） ， 淋巴结病（ 40.2% ） 。 蚊虫过敏，表现为蚊虫叮咬后局部皮肤的红斑、水疱及溃疡形成，并且伴有高烧。皮疹，皮肤牛痘样水疱，腹泻及视网膜炎。其他少见表现 Ohga S 等报道 1 例在 14 个月龄时诊断为CAEBV 的患儿，8名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 12 页，共 21 页 - - - - - - - - - 岁时出现肌无力和感觉异常，脑组织活检显示大脑广泛分布EBV 感染的 T 淋巴细胞， 证实 EBV 引起的淋巴组织增殖性疾病 （lymph

26、oproliferative disorders，LPD）可发生在中枢神经系统。其他表现还有结肠炎、皮肤肌炎、T 细胞型多肌炎、 肾脏损害等。另有报道 8 岁男孩因眼内直肌 NK 细胞浸润造成双侧眼球突出。I. 下述情况持续 6 月以上：a）从 EBV 原发感染开始症状一直持续b）EBV抗体滴度异常（包括抗VCA- IgG 1： 5120 ，抗 EA 抗体1：640 或 EBNA 抗体1：2. II.主要脏器受损的组织学标志：a） 淋巴结炎 b） 噬血现象 c）脑膜脑炎 d）持续性肝炎 e）脾肿大 f）间质性肺炎 g）骨髓增生不良 h）视网膜炎 III.证实受损组织或外周血中EBV 数量增多：

27、 a）受损组织中EBV 的 DNA 、RNA或蛋白增多 b）外周血中 EBV 的 DNA 水平增高。诊断 CAEBV 需满足上述每一项中的至少一条并排外任何免疫缺陷包括HIV感染 CAEBV 并不是一种独立的疾病，诊断CAEBV 的同时需要加上主要病理损害器官的疾病，如：恶性淋巴瘤、HLH 、冠状动脉瘤、心肌炎等。如果临床疾病与 EBV 相关，但外周血中抗体滴度或EBV 的 DNA 拷贝数不增高，则只能诊断为慢性 EB病毒感染（CEBV） 。 合并严重合并症的CAEBV 称为严重慢性 EB 病毒活动性感染（ SCAEBV） ，包括淋巴瘤、心肌病、冠状动脉瘤、HLH 及肝功能衰竭等。EB 病毒感

28、染首发症状及其相关性疾病，以加强对本病的认识，提高临床诊断水平。方法：对255 例小儿 EB 病毒感染患儿进行回顾性分析及总结。结果：EB病毒感染多数以发热为首发症状（占63.1% ） ，其次以咳嗽（占 13.7% ） 、颈部肿块（占 4.7% ） 、 眼睑浮肿（占 3.5% ） 、 肝脾肿大（占 3.1%） 、 咽痛 （占 2.7% ） 、皮疹（占 2.0% ）为首发的亦有较多， 较少见的尚有以头痛 （占 1.6% ） 、黄疸（占名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 13

29、 页，共 21 页 - - - - - - - - - 1.2%） 、口腔溃疡（占 0.8%） 、肝炎（占 0.8%） 、皮肤出血点（占 0.8% ） 、腹胀（占 0.4%） 、心律失常（占0.4%） 、腮腺肿大（占0.4% ） 、惊厥（占 0.4% ） 、声嘶（占 0.4%）为首发症状的。 EB 病毒感染大多数引起传染性单核细胞增多症（占 51.8% ） ， 其他相关性疾病包括呼吸道感染 （占 22.4% ） 、 扁桃体炎 （占 9.0% ） 、淋巴结炎（占4.3%） 、病毒性心肌炎（占2.0% ） 、病毒性脑炎（占1.6% ） 、噬血细胞综合征（占 1.6%） 、肝炎（占 1.6%） 、川

30、崎病（占 1.2% ） 、镜下血尿（占1.2%） 、恶性淋巴瘤（占0.8% ） 、溃疡性口炎（占0.8% ） 、腮腺炎（占 0.4% ） 、喉炎（占 0.4% ） 、组织细胞增生症 （占 0.4%） 、恶性网状细胞增生症 （占 0.4% ）和血小板减少性紫癜（占0.4% ） 。结论： EB 病毒感染可累及全身各个系统，临床表现多种多样，临床医生应综合分析，结合相关实验室检查，尽早明确诊断，减少误诊。五、防治原则目前有二种疫苗问世，其中之一为我国用基因工程方法构建的同时表达EBV gp320和 HBsAg的痘苗疫苗，重点使用在鼻咽癌高发区。另一为提纯病毒gp320膜蛋白疫苗，正在英国大学生患者中

31、作小规模接种，以期观察该疫苗是否能降低传染性单核细胞增多症的发病率。无环鸟苷（ AC）和丙氧鸟苷（ DHPG ）可抑 EBV 复制，均有一定疗效。病毒的致瘤机制人乳头瘤病毒为例HPV 能引起人类皮肤和粘膜的多种良性乳头状瘤或疣，某些型别感染还具潜在名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 14 页，共 21 页 - - - - - - - - - 的致癌性。 HPV 与生殖道肿瘤的发生有密切关系，并与口腔、咽、喉、气管等处的乳头状瘤和皮肤的疣等良性病变有关，其中与宫颈癌发生的关

32、系最引人关注。随着分子生物学和分子流行病学的迅速发展，病毒感染与肿瘤的关系受到广泛重视。自 Durst等应用核酸杂交技术在宫颈癌组织中检测到HPV16 型和 18 型DNA 以来， 众多学者从临床到分子生物学等不同方面对HPV 与宫颈癌的相关性进行了大量研究。其与宫颈肿瘤的病因学关系也日益明了，WHO 于 1992 年宣布 HPV 是引起宫颈癌的首要因素 ,是仅次于乙肝病毒与肝癌相关强度的一个病毒致癌因子。E5 蛋白HPV16 的 E5 蛋白是一个含 84 个氨基酸的疏水膜蛋白，主要散在分布在内质网及高尔基体上。 HPV16E5 不能永生化原始的人角质细胞C；但能协同E6和 E7，发挥很重要的

33、补充作用。E5 蛋白主要生物活性是通过结合溶酶体ATP 酶上 16 kD 的脂蛋白 l2o J，抑制 H 通过，使 EGFR 降解受阻， EGFR 数目增多， EGF与 EGFR 作用后所激活的各种信号通路兴奋时间延长。如表达HPV16E5 的细胞在予以EGF 后，可观察到 MAP 激酶活性增强，C Fos和 C-Jun 的表达增加。这提示E5 可能通过MAP 激酶途径来发挥其致癌作用。大多数HPV 的上游调节区域包括AP1 的结合位点，并存在于表达E5 的细胞中，由于CFos 和 CJun 的表达增加，HPV 的上游调节区启动子转录水平有所增加，因此HPV E5 蛋白对于 E6 和 E7蛋白

34、的产生非常重要。另外，EGF是人角质细胞通过G 期所必需的细胞因子，名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 15 页，共 21 页 - - - - - - - - - E5 的活性提示它可通过EGF来促进细胞周期进展。HPV11 和 16 E5 蛋白在 N1H3T3 细胞株中能抑制p21 抑癌基因的表达，并使人角质细胞永生化。提示p21 基因的表达受抑可能是癌基因所介导的生长刺激的机制之一 21 。E6 蛋白E6 蛋白是一个含 151 个氨基酸的蛋白，包括2 个锌指状结构。

35、E6 蛋白能有效地使人乳腺上皮细胞永生化，与E7 协同作用使人包皮角质细胞(HFK)永生化。E6 的主要功能是通过与p53 和一种泛素连接酶E6 AP 形成复合物，使 p53泛素化分解而失去作用。 E6 还能通过将 p53 阻滞在胞浆内来阻止p53 作用。E6对 p53 的抑制作用在 HPV 感染过程中非常重要，因为HPVE7 单独表达时，可以提高 p53 含量； HPVE2 能诱导依赖 p53 的凋亡作用。 p53 升高以及诱导依赖 p53 的凋亡很可能在病毒复制前即可杀死感染细胞。表达E6 的细胞能阻滞p53 所诱导的细胞周期停滞及凋亡，因此，E6 对 p53 的作用是增殖感染的重要部分，

36、它的这一功能使有基因异常的细胞得以持续增殖。有文献报道，HPV16E6蛋白能通过抑制p53 的联合兴奋因子CBPp300 来抑制 p53 的作用。由于p3O0 ，CBP 的一些目标基因参与细胞因子及免疫信号的产生，如IL-6 ，IL-8 。HPVE6 对 0300 CBP 的抑制作用，是 HPV 感染的免疫抑制机制之一名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 16 页，共 21 页 - - - - - - - - - 除了与 p53 作用，HPV18E6 还能通过 E6-AP

37、蛋白泛肽作用降解凋亡前蛋白Bak，这种与 Bak 的作用可能是不依赖p53 的凋亡抑制作用。另有实验表明E6通过形成 Cmyc E6 一 E6AP 复合物来阻止 Cmyc 所介导的凋亡，以保证病毒感染的持续存在。与 E7 类似， E6 同样也能绕过多种细胞周期负性因子的调控，如pl6 和 p27所致的 G 期细胞周期停滞，使细胞进入DNA 合成期 (S 期)。22-25 E7 蛋白E7蛋白是包括 98 个氨基酸的磷酸化核酸蛋白， 共分为 3 个功能区 CR1， CR2，CR3。E7 通过位于 c 末端的锌指状结构形成二聚体；N 末端的 CR1 和 CR2 区对 E7 蛋白的体外转化有重要作用。

38、 E7 是 HPV 的主要致癌蛋白，高危型 HPV(16 、18、31)E7 单独即能使人角质细胞 (HFK)永生化。E7 通过 CR2 区的 LXCXE 结构特异地与 Rb 第 649 772 位氨基酸的口袋结构结合，并释放核转录因子E2F，使细胞进入DNA合成期。有趣的是LXCXE结构的氨基酸序列在许多病毒蛋白及细胞内Rb 结合蛋白中亦存在 ? ，如腺病毒的 E1A 蛋白、猿病毒 40 大 T 抗原(SV40LTAG)、CyclinD 和组氨酸去乙酰化酶(HDAC) 等。这个区域的高度保守性提示， 病毒蛋白与 pRb 结合在其致病过程中具有重要作用，且E7 能与细胞内蛋白竞争结合pRb 。

39、最近的研究表明， E7 c末端区域 (CR3)能与 pRb 的第 803 位氨基酸至第 841 位氨基酸之间的区域相作名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 17 页，共 21 页 - - - - - - - - - 用，导致 E2F 因子游离，游离的E2F 因子进入核内，与一系列具有共同特殊序列的基因启动子结合，如CMyc ，CMyb ，CDC2，腺苷酸激酶，二氢叶酸还原酶和 DNA 聚合酶 Or基因，结合后的复合物不仅能诱发DNA 复制(S期)所需基因的转录；同时能诱导产

40、生 G 期调节因子，包括 CyclinA 和 CyclinE ，进一步对 pRb 磷酸化，导致 G 期的调节失控。 E7 对 CyclinE 和 CyclinA 的影响。能延长宿主细胞终未分化时间，有利于病毒自身复制。高危型 HPV 和低危型 HPV E7 与 Rb 的结合力是不同的E2。 这与 LXCXE 结构附近的序列有关， HPV6E7 蛋白第 20 位氨基酸是甘氨酸，而HPV16E7 蛋白在相应位置则为天冬氨酸。E7 对 E2F 的影响，除了依赖pRb 途径， E7 还能直接结合 E2F，并兴奋其转录活性E2。E7 还能通过结合组氨酸去乙酰化酶复合物(HDAC 1)组成部分Mi2 B

41、来抑制 HDAC 1 作用 E4，HDAC 1 能与 pRb 协作抑制 E2F 转录因子活性，在细胞周期调控中有重要作用。E7 与 HDAC 之间的作用提供了E7 能减弱基因转录抑制的另一个机制。除了对 E2F 转录因子的作用， E7 能与 AP-1(acti vator protein-1)转录因子家族作用。 AP-1 转录因子家族包括C-Jun ，JunB，C-Fos 等，AP-1 转录因子介导早期有丝分裂。有研究发现，一方面E7 锌指状结构能与CJun 的第224 249 位氨基酸结合，激活细胞周期早期进展基因，在E7 转化过程中起重要作用。另一方面E7 的 LXCXE 结构能抑制 pR

42、b 对 CJun 转录的兴奋，使细名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 18 页，共 21 页 - - - - - - - - - 胞分化脱离细胞周期进展。HPVE7 对细胞分化及细胞周期进展的影响是通过一个复杂的模式进行的。 E7还能与一些基本的转录因子结合(如 TATA结合蛋白 TBP和 TBP 相关因子 -110) 来介导它对基因转录的影响。E7 蛋白的表达导致多种细胞周期负性调控的信号失效，包括 p53 介导的生长停滞，TGF-p 介导的生长抑制、 p16 所介导的

43、细胞周期停滞p21 和 p27 所介导G S 期阻滞等。体外实验表明， HPVE7 能结合并灭活 p21 ，克服 p21 介导的对 CyclinE 和 CyclinA 相关激酶 CDK2 的抑制，并能阻滞p21 对依赖增殖细胞核抗原 (PCNA)DNA复制的抑制作用， 从而减弱 p21 的双重抑制作用。由于 p21也可不依赖 pRb 来抑制 E2F 活性，因此导致 p21 抑制作用的进一步丧失。 尽管E7 能使细胞免于 p53 所介导的细胞周期阻滞，但表达E7 细胞凋亡水平升高，这可能与 DNA 复制末期 E7 直接与 CyclinA 作用，导致依赖 CyclinA 的 E2F 失活过程的失效

44、有关 26-29 。噬菌体 MOI 值及其意义MOI 是 multiplicity of infection的缩写，中文译为感染复数。传统的MOI 概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu 。 一般认为 MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来 MOI 被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - -

45、- - 第 19 页，共 21 页 - - - - - - - - - 然而， 由于病毒的数量单位有不同的表示方式， 从而使 MOI 产生了不同的含义。能产生细胞裂解效应的病毒例如腺病毒、单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu 表示病毒数量，因此其 MOI 的含义与传统的概念相同。 而对于某些病毒如 AAV 病毒，无法用 pfu 表示病毒的数量， 而是采用 TU、 IU、 病毒颗粒（viral particles, v.p）或基因组数量（ vector genome,v.g.）来表示病毒数量，因此其MOI 就有了不同含义。 采用 TU 或 IU， MOI 的含义便是 TU number/cell 或

46、IU number/cell。采用 v.p.，MOI 的含义便是 v.p. number/cell 。采用 v.g，MOI 的含义便是 v.g. number/cell。可以将上述不同的MOI 表示方式分为 2 种：1） 以活性单位表示病毒数量，如pfu, TU, IU 。这时 MOI 的含义是指平均每个细胞感染病毒的活性单位数。2） 以病毒颗粒或基因组数表示病毒数量，如v.p. 或 v.g. 。这时 MOI 的含义是指平均每个细胞感染病毒的病毒颗粒或基因组数。值得一提的是， 上述 2 种不同的 MOI 表示方式在含义和数值上都有所不同。 前一种是传统意义上的MOI ，后一种 MOI 表示方式

47、的含义更为简化和直观，也逐步被一些研究者采用。传统意义上的MOI的测定，其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson 分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数（MOI ） 。其公式为： P(k) = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或 m = -InP （0） 。 其中： P(k) 为被感名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 20 页，共 21 页 - - - - - - - - - 染细胞的百分率 ,p(0)为未被感染细胞的百分率,m 为 MOI 值。例如，如果要感染培养皿中99% 的培养细胞，则： P(0) = 1% = 0.01 m = -In(0.01)= 4.6 pfu/cell 。由此可以看出，由于病毒特性和研究者习惯的不同，MOI的单位由原来约定俗成的 pfu number/cell变成多种表示单位。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 21 页，共 21 页 - - - - - - - - -