2022年2022年过氧化氢酶米氏常数的测定 .pdf

《2022年2022年过氧化氢酶米氏常数的测定 .pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2022年2022年过氧化氢酶米氏常数的测定 .pdf（3页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、过氧化氢酶米氏常数的测定一、 实验目的了解并掌握米氏常数的意义和测定方法二、 实验原理H2O2被过氧化氢酶分解出H2O和 O2，未分解的 H2O2用 KMnO4在酸性环境中滴定，根据反应前后H2O2的浓度差可求出反应速度。2H2O2 = 2H2O + O22KMnO4 + 5H2O2 + 3H2SO4 = 2MnSO4 + K2SO4 + 5O2 + 8H2O 本实验由马铃薯提供过氧化氢酶。在保持恒定的条件下，用相同浓度的过氧化氢酶催化不同浓度的H2O2分解。在一定限度内，酶促反应速度与H2O2浓度成正比。用双倒数作图法(即以 1/ v 对 1/S 作图) 可求得过氧化氢酶的Km值。三、 实验

2、器材锥形瓶 (6 个) 吸管、酸式滴定管四、 实验试剂1、0.02mol/L 磷酸缓冲液 (pH=7) 2、0.004 mol/L KMnO4( 需标定 ) 3、0.05 mol/L H2O2( 需标定 ) 4、25% H2SO4五、实验操作1、酶液的提取 ：称取马铃薯（去皮） 5 克，加 0.02mol/L 磷酸缓冲液 10mL ，再加少量海砂，研磨成匀浆，离心(3000r/ min，10min)，上清液即为酶液。2、滴定 ：取干燥锥形瓶 6 只，按下表顺序加入试剂：名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理

3、 - - - - - - - 第 1 页，共 3 页 - - - - - - - - - 瓶号试剂/mL 0 1 2 3 4 5 0.05mol/L H2O20 1.00 1.25 1.67 2.50 5.00 蒸馏水9.50 8.50 8.25 7.83 7.00 4.50 酶液0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 先加好 0.05mol/L H2O2及蒸馏水 ，加酶液后立即混合，依次记录各瓶的起始反应时间。各瓶时间达5min 时立即加 2.0mL 25% H2SO4终止反应，充分混匀。用 0.004 mol/L KMnO4滴定各瓶中剩余的H2O2至微红色 ，记录消耗的 KMnO4

4、体积。六、实验计算分别求出 15 瓶的底物浓度 S 和相应的反应速度v 。C1V110 S = 5 2C2V2C1V1 v = 式中 S：为底物物质的量浓度 (mol/L) C1：为 H2O2物质的的量浓度 (mol/L) 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 3 页 - - - - - - - - - V1：为 H2O2的体积 (mL) 10：反应的总体积v ：反应速度 (mmol/min) C2: KMnO4物质的量浓度 (mol/L) V2：KMnO4的体积 (mL) 以 1/ v 对 1/S 作图求出 Km 。七、实验注意事项( 1 ) 按表先加 H2O2及蒸馏水 。( 2 ) 准确控制各瓶中酶促 反应时间 尽量一致。( 3 ) 各种试剂的加量应准确。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页，共 3 页 - - - - - - - - -