园艺植物组织培养第12章ppt课件.ppt

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1、12 种质贮存 12.2 超低温保存法 12.2.1超低温保存方法 （1）慢冷法慢冷法 先把材料以先把材料以0.54/min的冷却速度由的冷却速度由00冷却到冷却到- -100100，然后转入液氮。这个方法对于悬浮培养的细胞特，然后转入液氮。这个方法对于悬浮培养的细胞特别有效别有效 。（3）分步冷冻法）分步冷冻法 这种方法结合了慢冷法和快冷法二者的优点，先把材料这种方法结合了慢冷法和快冷法二者的优点，先把材料分步冷却（分步冷却（(1-5/min）到一个适宜的中间温度（）到一个适宜的中间温度（-30一一一一50)，在这个温度下停留约，在这个温度下停留约30 min,然后再投人到液氮然后再投人到液

2、氮中快速冷却。已经证明这个方法对于茎尖和芽的冷冻保存中快速冷却。已经证明这个方法对于茎尖和芽的冷冻保存最为有效。草毒茎尖经超速冷却后存活率为最为有效。草毒茎尖经超速冷却后存活率为40-60，但，但若采用分步冷冻法，存活率可提高到若采用分步冷冻法，存活率可提高到60-80%。此外，分。此外，分步冷冻法对于悬浮培养的细胞也同样有效。步冷冻法对于悬浮培养的细胞也同样有效。 （6） 原生质体的超低温保存原生质体的超低温保存 原生质体具有多种用途，特别是在开辟作物育种新途原生质体具有多种用途，特别是在开辟作物育种新途径方面有着广阔的应用前景。它是进行细胞杂交和基因工径方面有着广阔的应用前景。它是进行细胞

3、杂交和基因工程的基础材料，也是进行植物生理学和植物病理学研究的程的基础材料，也是进行植物生理学和植物病理学研究的良好的实验体系，对原生质体进行超低温保存的初步研究良好的实验体系，对原生质体进行超低温保存的初步研究结果表明，这种保存不仅是必要的，而且冷冻原生质体优结果表明，这种保存不仅是必要的，而且冷冻原生质体优于冷冻细胞，由于原生质体没有细胞壁，排除了冷冻期间于冷冻细胞，由于原生质体没有细胞壁，排除了冷冻期间细胞中产生的张力，所以受伤害较少，存活率提高，同时细胞中产生的张力，所以受伤害较少，存活率提高，同时能筛选出抗逆性强、生长处于优势的细胞系。但原生质体能筛选出抗逆性强、生长处于优势的细胞系。但原生质体的超低温保存由于操作复杂、技术难度大，故成功的例子的超低温保存由于操作复杂、技术难度大，故成功的例子不多。不多。