阿托品讲稿.pdf

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1、硫酸阿托品及其制剂的分析硫酸阿托品及其制剂的分析 硫酸阿托品是消旋莨菪碱的硫酸盐，为酯类药物，易水解，水解产物可用于鉴别。分子 结构中，氮原子位于桥环上，碱性较强，易与酸成盐。硫酸阿托品虽具有不对称碳原子，但 为外消旋体，故无旋光性。硫酸阿托品是目前最常用的 M 胆碱受体阻断剂，临床用途十分 广泛。 硫酸阿托品硫酸阿托品 一、主要理化性质一、主要理化性质 1、 水解性水解性 硫酸阿托品中具有酯的结构， 易水解， 可水解生成茛菪醇 （I） 和茛菪酸 （II） 。 茛菪醇（茛菪醇（I）茛菪酸（茛菪酸（II） 2、旋光性旋光性 硫酸阿托品中含有一个手性碳原子，这个不对称碳原子来自莨菪酸。但值得 注意

2、的是，临床使用的硫酸阿托品为外消旋体，无旋光性。 3、碱性、碱性硫酸阿托品分子结构中，五元酯环上有叔胺氮原子，因此具有较强的碱性， 易与酸成盐。硫酸阿托品的 pKb1为 4.35，可与硫酸成盐。 4、紫外光吸收特性、紫外光吸收特性硫酸阿托品具有苯环结构，因此它具有紫外光吸收的特性。 硫酸阿托品紫外吸收光谱硫酸阿托品紫外吸收光谱 二二、鉴别试验鉴别试验 1、 Vitali 反应反应Vitali 反应是托烷生物碱类的特征鉴别反应， 收录于药典第四部通则中。 反应结果生成的产物显深紫色。方法如下： 取供试品约 10mg，加发烟硝酸 5 滴，置水浴上蒸干，得黄色残渣，放冷，加乙醇 23 滴湿润，加固体

3、氢氧化钾一小粒，即显深紫色。 上述反应的原理是： 茛菪烷类生物碱结构中的酯键水解后生成茛菪酸， 经发烟硝酸加热 处理，转变为三硝基衍生物而显黄色，再与氢氧化钾的醇溶液和固体氢氧化钾作用脱羧，产 物共轭程度增加，颜色加深。 2、SO 2 4 的反应的反应本品为硫酸盐，水溶液显硫酸盐的鉴别反应。照中国药典通则一般鉴 别试验”项下“硫酸盐”的鉴别方法试验： (1)取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成 BaSO4的白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或 硝酸中均不溶解。 (2)取供试品溶液，滴加醋酸铅试液，即生成 PbSO4的白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵 试液或氢氧化钠试液中溶解。 (3)取供试品溶液，加盐酸，

4、不生成白色沉淀(与硫代硫酸盐区别)。 三、检查三、检查 1. 莨菪碱莨菪碱阿托品为莨菪碱的外消旋体，莨菪碱因消旋不完全而引入。莨菪碱具有旋 光性，为左旋体， 中国药典规定对其进行检查，方法如下： 取本品，按干燥品计算，加水制成每 1ml 中含 50mg 的溶液，依法测定，旋光度不得过 0.4。已知莨菪碱的比旋度为32.5，本法控制莨菪碱的限量为 24.6。 2其他生物碱其他生物碱其他生物碱系指在硫酸阿托品的制备过程中，可能引入的莨菪碱、颠 茄碱等生物碱杂质。 检查是依据其他生物碱的碱性要比阿托品的碱性弱的性质来进行的， 当 在硫酸阿托品的盐酸溶液中加入氨试液时，若有其他生物碱存在则立即游离，发

5、生浑浊。方 法为：取本品 0.25g，加盐酸溶液(91000ml)1ml 溶解后，用水稀释成 15ml，分取 5ml，加 氨试液 2ml，振摇，不得立即发生浑浊。 除以上检查项目外，硫酸阿托品还需检查“酸度”、“干燥失重”和“炽灼残渣”等项目。 四四、含量测定含量测定 莨菪酸莨菪酸 1.非水溶液滴定法非水溶液滴定法 本法属于容量分析法，一般用于碱性药物原料药的含量测定。 非水溶液滴定法包括酸量法与碱量法，本法是碱量法。主要用于有机碱及其氢卤酸盐、硫酸 盐、磷酸盐以及有机酸碱金属盐类的测定。 需要注意的是，虽然硫酸是二元酸，在水溶液中可以发生二级解离，生成 SO42-；但在 冰醋酸非水介质中，只

6、能发生一级解离，生成 H SO4-，即只提供一个 H+。所以硫酸盐类药 物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐接滴，硫酸阿托品与高氯酸反应的化学计量摩尔比为 1:1。方程式如下： 中国药典硫酸阿托品的含量测定方法如下： 取本品约 0.5g，精密称定，加醋酸与醋酐各 10ml 溶解后，加结晶紫指示液 12 滴， 用高氯酸滴定液（0.1mol / L）滴定至溶液显蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。 硫酸阿托品的分子量为 676.82，所以 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于 67.68mg 无 水硫酸阿托品(C17H23NO2)2H2SO4，即滴定度为 67.68mg。滴定度的计算方法如下

7、： T= 0.1 mol/L x 1 ml x 676.82 g/mol=67.68 mg 2. 酸性染料比色法酸性染料比色法 中国药典硫酸阿托品的片剂和注射液采用酸性染料比色法进行含量测定。 硫酸阿托品的 药理活性较强，临床使用剂量较小（如硫酸阿托品片规格 0.3mg） 。酸性染料比色法是依据 生物碱类药物在一定的 pH 条件下，可与某些酸性染料结合显色，采用分光光度法测定药物 含量的方法。该法样品用量少，灵敏度高，适用于少量供试品、尤其是小剂量药物制剂的含 量测定及均匀度检查 （1）基本原理）基本原理 在适当的 pH 的水溶液中，碱性药物（B）可与氢离子结合成阳离子（BH+） ，而一些酸

8、性染料（磺酸肽类指示剂等） ，如溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、溴酚蓝等，可解离 成阴离子 （In-） ； 两种离子定量地结合， 即生成具有吸收光谱明显红移的有色离子对 （BH+In-） ， 该离子对可以定量地被有机溶剂萃取，测定有机相中有色离子对特征吸收波长处的吸光度， 即可以进行碱性药物的含量测定。 也可将呈色的有机相经碱化（如加入醇制氢氧化钠） ，使与有机碱结合的酸性染料释放 出来，测定其吸光度，再计算出碱性药物的含量。 （2）影响因素）影响因素 酸性染料比色法的影响因素较多。主要包括：水相的 pH、酸性染料的种类、有机溶剂 的种类与性质、有机相中的水分及酸性染料中的有色杂质等。 2.

9、1 水相最佳水相最佳 pH酸性染料比色法测定时，水相的 pH 选择极为重要。只有选择合适 的 pH，使有机碱性药物均成阳离子（BH+） ，而同一 pH 条件下酸性染料电离足够的阴离子 （In-） ，碱性药物才能定量生成离子对，并完全溶于有机溶剂中，而过量的染料完全保留在 水相中，才能保证定量的测定。 从上述平衡式可知，如 pH 过低，抑制了酸性染料的解离，使 In-浓度太低，而影响离子 对的形成；如 pH 过高，有机碱药物呈游离状态，使离子对的浓度也很低。因此，选择一个 最佳的 pH，使有机碱药物和酸性染料分别全部以 BH+和 In-状态存在，是酸性染料比色法至 关重要的试验条件。其选择方法一

10、般根据有机碱药物和酸性染料的 pK 值以及两相中分配系 数而定。 2.2 酸性染料酸性染料 浓度浓度选用的酸性染料，应该不仅能够与有机碱性药物定量地结合，而 且生成的离子对要在有机相中有较大的溶解度， 同时要求生成的离子对在其最大吸收波长处 有较高的吸光度。染料在有机相中则要不溶或很少溶解（不被提取，空白吸收很小） 。 酸性染料的浓度，一般认为对测定结果影响不大，只要有足够量即可。增加酸性染料的 浓度可以提高测定的灵敏度。但如果浓度太高，则易产生严重的乳化层，且不易去除，往往 影响测定结果。 2.3 提取有机溶剂提取有机溶剂 应选择对有机碱性药物与酸性染料形成的离子对萃取效率高、能与 离子对形

11、成氢键、 不与或极少与水混溶的有机溶剂作为萃取溶剂。 常用的有机溶剂有三氯甲 烷、二氯甲烷等。其中，三氯甲烷最为常用，其具有能与离子对形成氢键、萃取效率较高、 选择性较好、在水中溶解度小、与其混溶的微量水分易于除去等特点，是较理想的溶剂；其 次是二氯甲烷。二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等尽管也适宜，由于毒性及环境污染不宜采 用。 2.4 水分水分水相中有过量的有色酸性染料，水分的混入又可能使有机相浑浊，从而影响 比色测定的准确性。所以，在萃取过程中，应该严防水分混入有机相中。一般多采用加入脱 水剂，或经干燥滤纸过滤的方法，除去混入的水分。 2.5 酸性染料中的有色杂质酸性染料中的有色杂质酸性染料

12、中的有色杂质混入萃取的有机相中， 会使测定结 果受到干扰。为了获得准确结果，可在加入供试品之前，将缓冲液与酸性染料的混合液先用 所选用的有机溶剂萃取弃去，以便除去酸性染料中的有色杂质。 中国药典硫酸阿托品片的含量测定方法如下： 取本品 20 片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硫酸阿托品 2.5mg） ，置 50ml 量瓶中，加水振摇使硫酸阿托品溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；另 取硫酸阿托品对照品约 25mg，精密称定，置 25ml 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀， 精密量取 5ml，置 100ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 精密量取供试品溶

13、液与对照品溶液各 2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷 10ml 的分液 漏斗中，各加溴甲酚绿溶液（取溴甲酚绿 50mg 与邻苯二甲酸氢钾 1.021g，加 0.2mol/L 氢氧 化钠溶液 6.0ml 使溶解，再用水稀释至 100ml，摇匀，必要时滤过）2.0ml，振摇提取 2 分钟 后，静置使分层，分取澄清的三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法（通则 0401） ，在 420nm 的波长处分别测定吸光度，计算，并将结果乘以 1.027，即得。 3. 高效液相色谱法高效液相色谱法 本品的眼膏剂中国药典采用高效液相色谱法测定。 高效液相色谱法具有分离模式多样、 适用范围广、 选择和专属性强、 检测

14、手段多样灵敏、 重复性好、分离速度快等优点。各国药典广泛采用 HPLC 法对茛菪烷类生物碱的含量和有 关物质进行直接分析测定的比例不断增加。 在反相液相色谱条件下呈离子状态的药物， 如有机碱类、 有机酸类， 色谱保留常常较弱， 从而影响到它们含量或有关物质的 HPLC 测定的专属性和准确度。通过调整流动相的 pH， 抑制它们的解离，以改变色谱保留行为。但并不都能获得满意的结果。采用离子对高效液相 色谱法，可以改善它们的色谱保留行为，实现准确测定。 离子对高效液相色谱法是在流动相中加入与呈解离状态的待测组分离子电荷相反的离 子对试剂， 形成离子对化合物后使待测组分在非极性固定相中的分配与溶解度增

15、大， 从而改 善其色谱保留与分离行为的色谱法。 分析碱性物质时常用的离子对试剂为烷基磺酸盐阴离子对试剂。 如戊烷磺酸钠、 庚烷磺 酸钠、十二烷基磺酸钠等。分析酸性物质时常用季铵盐阳离子对试剂。如四丁基溴化铵、四 丁基氢氧化铵等。 影响离子对形成的条件，均影响被测组分的保留。如反离子的种类、性质与浓度，流动 相的组成、pH 及离子强度等，均应选择恰当，以利于离子对在色谱柱上的保留与分离。离 子对试剂非极性部分越大，形成的离子对分配系数越大，反相色谱保留则越强。 中国药典硫酸阿托品眼膏的含量测定方法如下： 色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 0.0

16、5mol/L 磷酸二 氢钾溶液（含 0.0025mol/L 庚烷磺酸钠）-乙腈（84:16） （用磷酸或氢氧化钠试液调节 pH 值 至 5.0）为流动相；检测波长为 225nm，理论板数按阿托品峰计算不低于 3000。 测定法测定法 取本品适量（约相当于硫酸阿托品 10mg） ，精密称定，置 50ml 量瓶中，加水 适量，在 80C 水浴中强烈振摇 20 分钟使硫酸阿托品溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀， 冰浴中冷却 5 分钟，滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取 20l 注入液相色谱仪，记 录色谱图； 另取硫酸阿托品对照品， 精密称定， 加水溶解并定量稀释制成每 1ml 中约含 0.2mg 的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。