基因工程-复习题-长理研究生.docx

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1、精品文档，仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除单项选择题1.因研究重组准技术而获得诺贝尔奖的科学家是（C）A A.Kornherg B.W.Gilbert C. P,Berg D. B.McClintock2.第一个作为重组NM载体的质粒是（C）A.pBR322 B.ColEl C.pSC101D.pUCI83.下面哪一种不是产生星号活性的主要原因？（D）A.甘油含量过高B.反应体系中含有有机溶剂C.含有非Mg2+的二价阳离子D.酶切反应时酶浓度过低4.型限制性内切核酸酶：（B）A.有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列B.仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供C.限制性识别

2、非甲基化的核苷酸序列D.仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供5.第一个被分离的类酶是：（C）A.Ecok B.Hind C.Hindl D.EcoB6.在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?（B）A.反应时间B.酶量C.反应体积D.酶反应的温度7.限制性内切核酸酶可以特异性地识别：（B）A.双链DNA的特定碱基对B.双链DNA的特定碱基序列C.特定的三联密码D.以上都正确8.限制性内切核酸酶的星号活性是指：（A）A在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性B.活性大大提高C.切制速度大大加快D.识别序列与原来的完全不同9.关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下描述中只有

3、（B）不太恰当A.由作用于同一DNA序列的两种酶构成B这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶C这一系统中的修饰酶玉要是通过甲基化作用对DNA进行修饰D.不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统10.下列哪一种酶作用时需要引物？（C）A.限制酶 B。末端转移酶 C.反转录酶 D.DNA连接酶？11.S1核酸酶的功能是（）A.切割双链的DNAB.切割单链的RNAC.切割发夹环D.以上都是正确的12.下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?（C）A.质粒B.黏粒C.酵母人工染色体（YAC）D.入噬菌体13.松弛型质粒：（D）A.在寄主细胞中拷贝数较多B.可用氯霉素扩增C.一般没有选择标记D.上述（

4、a）、（b）两项正确14.同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是（B）A.OCDASCDNALDNA B.SCDNALDNAOCDNAC.LDNAOCDNASCDNA D.SCDNAOCDNALDNA15.关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确？（B）A.在不同的宿主中具有不同的复制机制B.在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点C.在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶D.在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率16.关于cDNA的最正确的说法是：（C）A同mRNA互补的单链DNAB.同mRNA互补的双链DNAC.以mRNA为模板合成的双链DNAD.以上都正确17.用碱法分离质

5、粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：（C）A.染色体DNA断成了碎片B.染色体DNA分子量大，而不能释放C.染色体变性后来不及复性D.染色体未同蛋白质分开而沉淀18.黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（C）A.产生新切点B.易于回收外源片段C.载体不易环化D.影响外源基因的表达19.关于DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确？（D）A.给外源DNA添加适当的切点B、人工构建载体C.调整外源基因的可读框D.增加调控元件20.cDNA文库包括该种生物的（A）A.某些蛋白质的结构基因B.所有蛋白质的结构基因C.所有结构基因D.内含子和调控区21.关于感受态细胞性质的描述，

6、下而哪一种说法不正确?（C）A.具有可诱导性B.具有可转移性C.细菌生长的任何时期都可以出现D.不同细菌出现感受态的比例是不同的22.用下列方法进行重组体的筛选，只有（C）说明外源基因进行了表达。A.Southen印迹杂交B.Northem印迹杂交C.Western印迹D.原位菌落杂交23.在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是（A）A.诱导宿主的a肽的合成B.诱导宿主的肽的合成C.作为酶的作用底物D.作为显色反应的指示剂24.用免疫化学法筛选重组体的原理是（A）A.根据外源基因的表达B.根据载体基因的表达C.根据mRNA同DNA的杂交D.根据DNA同DNA的杂交25.下列关于

7、建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的?（A）A.从特定组织或细胞中提取DNA或RNAB.用反转录酶合成mRNA的对应单链DNAC.以新合成的单链DNA为模板合成双链DNAD.新合成的双链DNA甲基化26.要对一双链的DNA分子进行3末端标记，可用（C）A.Klenow酶B.DNM聚合酶IC.T4DNA聚合酶D.T7DNA聚合酶27.Klenow 酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了（C）的活性。A.5，-3，合成酶，B.3，-5，外切酶C.5，-3，外切酶D.转移酶28.在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用（D）A.T4DNA聚合酶B.Klenow酶。C.大肠杆菌DNA聚合酶

8、ID.T7DNA聚合酶29.关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确?（D）A.溶液I的作用是悬浮菌体B.溶液的作用是使DNA变性C.溶液的作用是使DNA复性D.质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性30.下面关于用T4多核苷酸酶标记5端制备探针的描述中（B）是不正确的，A.既能标记DNA，又能标记RNAB.既能标记双链DNA又能标记单链DNAC.只能标记突出的5端不能标记其他类型末端D.DNA或RNA必须有5-0H的存在填空题1. 切口移位（nick translation）法标记DNA的基本原理在于利用 DNA聚合酶I的 5一3外切核酸酶和5一3合成酶的作用。2. 欲将

9、某一具有突出单链未端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用S1核酸酶切割或DNA聚合酶补平。3. 反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有 核酸水解酶H的作用，可以将DNA-RNA杂种双链中的 RNA 水解掉。4.基因工程中有3种主要类型的成体： 质粒DNA，病毒DNA，质粒和病毒DNA杂合体。5.就克隆一个基因（DNA片段）来说，最简单的质程载体也必需包括三个部分： 复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。6.一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫 质

10、粒消除(或治愈) 7.pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于 pMBl ，它的四环素抗性基因来自于 pSCl01 ，它的氮苄青霉素抗性基因来自于pSF2124(R质粒)。8.YAC的最大容载能力是1000kb，BAC载体的最大容载能力是 300kb 9.pSC101是一种 严紧 复制的质粒。10.pUC18质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过pBR322和M13两种质粒改造而来。它的复制子来自 pMBl ，Amp抗性基因则是来自转座子11.噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是 它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增； ；二是 对某些噬菌

11、体(如l噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽。12.野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是 没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和选择标记。13.黏粒（cosmid）是质粒一噬菌体杂合载体，它的复制子来自质粒、COS位点序列来自l噬菌体，最大的克隆片段达到45 kb。14.野生型的入噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1) 分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记 15噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是复制区，而来自噬菌体的主要结构是IG区16. 入噬菌体载体由于受到包装的限则，插入外源DNA片段后，总

12、的长度应在噬菌体基因组的 75105范围内。17在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠，共目的是螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性18.用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加入单价的阳离子，如NaCl和NaAc，其目的是 中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力。19.Clark发现用Tag DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基未端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的 T载体名词解释1. 基因工程：对不同的遗传物质在体外进行剪切、组合和拼接，使遗传物质重新组合，然后通过载体转入微生物、植物和动物细胞内，进行无性繁殖，并使所

13、需的基因在细胞中表达，产生人类所需的产物或新生物类型2. 质粒：是独立于染色体以外的能自主复制的双链闭合环状DNA分子。存在于细菌、霉菌、蓝藻、酵母等细胞中。3. 基因：是一个含有特定遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。4. 转化：外源遗传物质(如质粒DNA等)进入细菌的过程。5. 分子杂交：不同的DNA片段之间，DNA片段与RNA片段之间，如果彼此间的核苷酸排列顺序互补也可以复性，形成新的双螺旋结构。这种按照互补碱基配对而使不完全互补的两条多核苷酸相互结合的过程6. 基因文库：将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小合适的片断，并将所有这些片断都与适当的载体连接，引入相应的宿主

14、细胞中保存和扩增。 理论上讲，这些重组载体上带有了该生物体的全部基因，称为基因文库7. 载体：在基因工程操作中，把能携带外源DNA进入受体细胞的DNA分子叫载体。8. PCR：聚合酶链式反应，是一种用于在体外放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术9. 不完全酶切：只有有限数量的酶切位点被切开。（通过缩短保温时间、降低反应温度或减少酶的用量可达到局部消化的目的。）10. 目的基因：人们准备要分离、改造、扩增或表达的基因。11. 操纵子：是指数个功能上相关的结构基因串联在一起，构成信息区，连同其上游的调控区（包括启动子和操纵基因）以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位，所转录的RNA为多顺反

15、子。12. SD序列：存在于原核生物的起始密码子AUG上游712个核苷酸处的一种47个核苷酸的保守片段。13. DNA重组：又称基因工程，指不同的DNA片段按照预先的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状的技术。14. 核酸探针：核酸探针是指能识别特异碱基顺序的带有标记的一段DNA或RNA分子。15. 粘性末端：当限制性核酸内切酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA的两条链分别切开是，产生的是粘性末端。16. 同尾酶：识别位点不同，但切出的DNA片段具有相同的末端序列，这些酶称为同尾酶。17. 融合蛋白： 通过DNA重组技术得到的两个基因重组后

16、的表达产物18. 转染：指外源基因通过病毒或噬菌体感染细胞或个体的过程。拷贝数19. 穿梭载体：是一类有人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的寄主细胞中存活的质粒载体简答题1. 影响DNA连接酶催化连接反应的因素？答：（1）DNA的纯度 （2）DNA甲基化的程度 （3）酶切消化反应的温度 （4）DNA的分子结构 （5）核酸内切限制酶的缓冲液 2. Sanger法测序原理答：DNA聚合酶催化的DNA链延伸是在3-OH末端上进行的。由于2，3-双脱氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3-位脱氧而失去游离-OH，当它参入到DNA链后，3-OH末端消失，使DNA链的延伸终止。PCR反应

17、体系包含单链模板、引物、4种dNTP和DNA聚合酶。共分四组，每组按一定比例加入一种2，3双脱氧核苷三磷酸，它能随机渗入合成的DNA链，一旦渗入DNA合成即终止，于是各种大小不同片段的末端核苷酸必定为该种核苷酸，经PAGE凝胶电泳，可从自显影图谱上直接读出DNA序列。3. PCR基本原理是什么？答：以需要扩增的DNA为模板，以一对分别与模板的5和3末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。4. 用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？答：至少要预先知道足够合成一对引物的靶

18、DNA序列。5. 如果知道一个蛋白质的氨基酸序列，通过何种方法克隆该基因？答：可以通过合成核苷酸探针或设计简并PCR引物从cDNA文库或基因组文库中筛选。或者利用相应的抗体从cDNA表达文库中筛选相应的克隆。6. 基因工程的含义是什么？答：基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。7. cDNA克隆与基因组克隆有何不同？答：基因组克隆包含所有不在cDNA中出现的内含子。8. 什么是蓝白斑筛选？答：这种方法

19、是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在l载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌-半乳糖苷酶的基因片段，携带有lac基因片段的l载体转入lac的宿主菌后，在含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷(X-gal)平板上形成浅蓝色的噬菌斑。外源基因插人lac(或lac基因部分被取代)后，重组的噬菌体将丧失分解X-gal的能力，转入lac-宿主菌后，在含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷(X-gal)平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。9. 怎样将一个平末端的DNA片段插入到EcoR位点中去？答：化学合成一些长为10bp含有EcoR 识别位点的短的DNA片段，然后与待克隆片段

20、两端连接起来，如果用EcoR 切割这种连接片段，就会产生EcoR 的单链末端。这种片段就可以插入到任何EcoR 的限制性核酸内切酶位点中。10. 如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆？答：抗性基因插入筛选：将带有完整抗体的基因的载体转化为无抗性细胞，则所有转入载体细菌都获得了抗性，即可筛选出获得抗性的阳性克隆。抗性基因插入失活筛选：当外源基因插入质粒的某一个抗性基因中，使该抗性基因不能正常表达，致使含有该质粒的细菌丢失控制，利用这种抗性变化，筛选出含有外源基因的重组子。LacZ基因失活筛选。11. 碱裂解法提取质粒DNA的原理？答：碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒D

21、NA变性，再将pH值调至中性使其复性，复性的为质粒DNA，而染色体DNA不会复性，缠结成网状物质，通过离心除去。12. 为什么质粒可作为基因载体？能在宿主细胞中复制繁殖，且有较高的自主复制能力。容易进入宿主细胞。容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。容易从宿主细胞中分离纯化出来。有容易被识别筛选的标志。13. 列举质粒必须具备的4个基本特性？答：(1)独立复制； (2)有选择标记； (3)有独特的酶切位点； (4)能转化但不扩散。14. 什么是同聚物加尾？方法？优缺点？ 所谓同聚物加尾法就是利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3端各加上一段寡聚核苷酸，制成人工黏性

22、末端，外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸，如dA(dG)和dT(dC),然后在DNA连接酶的作用下涟接成为重组的DNA。 这种方法的核心是利用末端转移酶的功能，将核苷酸转移到双链DNA分子的突出或隐蔽的3-OH上。以Mg2+作为辅助因子，该酶可以在突出的3-OH端逐个添加单核苷酸，如果用Co2+作辅助因子则可在隐蔽的或平末端的3-OH端逐个添加单个核苷酸。 优点：(1)首先不易自身环化 (2)所以连接效率较高。(3)用任何一种方法制备的DNA都可以用这种方法进行连接。缺点：(1)方法繁琐；(2)外源片段难以回收。（3）由于添加了许多同聚物的尾巴，可能会影响外源基因的表达。15

23、. Klenow片段有哪些活性，在基因工程中有什么作用？答：具有5 3聚合酶活性和3 5外切酶活性。（失去了5 3外切酶活性）。(1)修复反应，制备平末端：可用Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5或3突出末端，制备平末端(2) 标记DNA3突出末端 (3)其他的一些用途：包括用双脱氧末端终止法进行DNA序列分析、用于cDNA第二链的合成、在定点突变中用于合成第二链、用引物延伸法(primer extension)制备单链DNA探针等。16. 分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点？答：同：原理相同。琼脂糖、聚丙烯酰胺均为无反应活性的稳定支持介质，可降低对流运动，故使

24、电场中的分子电泳迁移率仅与分子的摩擦系数成反比。在一定电场强度下，DNA分子的迁移率取决于核酸分子的大小和构象。 凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙大小；浓度越高，空隙越小，其分辨能力也就越强；反之，浓度降低，空隙就增大，其分辨能力也就随之减弱。 异：琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为02.Kb-50Kb之间；而聚丙烯酰胺分辨DNA片段的范围为1-1000bp，分离小片段效果最好，分辨率极高，相差1bp的DNA也可分开。17. 叙述感受态细胞的制备过程？答：、取冰冻菌种，用划线法接种细菌于培养皿，于37培养过夜。、第二天，挑取单个菌落，接种至有LB培养液的试管中，37振荡培养过夜。次日取菌液1ml接

25、种至含有100ml LB培养基的烧瓶中，37剧烈震荡培养约23小时、当菌落600nm OD值达到0.30.4时，将烧瓶取出放置冰上1015分钟。在无菌条件下把菌液倒入50ml离心管中。4,4000g离心10分钟。、弃上清，将管倒置于干滤纸上1min，吸干残留的培养液。加10ml 0.1M的CaCl2到离心管中，振荡混匀，悬浮菌体，冰浴30分钟。、4,4000g离心10分钟，弃上清，将管倒置于干滤纸上1min，吸干残留的培养液.加4ml冰预冷的0.1M的CaCl2，重悬浮菌体。每管0.2ml分装，至4保存备用。18. 如何提高基因的表达效率？答：提高启动子强度。缩短启动子同克隆基因间距离。高效的

26、翻译起始序列。高效的转录终止区。提高质粒拷贝数及稳定性。用以下方法提高翻译水平：调整SD序列与AUG间的距离；用点突变的方法改变某些碱基；增加mRNA的稳定性的。减轻细胞的代谢负荷：诱导表达；表达载体的诱导复制。提高表达蛋白的稳定性，防止其降：克隆一段原核序列，表达融合蛋白；采用某种突变菌株；表达分泌蛋白质。19. 重组DNA技术包括哪些基本步骤？获得目的基因； 与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子； 用重组DNA分子转化受体细胞，并能在受体细胞中复制和遗传； 对转化子筛选和鉴定。在具体工作中选择哪条技术路线； 对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。主要取决于基因的来源、基因本身的性质和该项遗传工程的目的。【精品文档】第 10 页