EB病毒感染的实验室指标.doc

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1、-作者xxxx-日期xxxxEB病毒感染的实验室指标【精品文档】EB病毒感染的实验室指标2016-03-08儿科助手EBNA二聚体带状模型EB病毒（Epstein-Barrvirus，EBV）属于4型疱疹病毒，类似其他疱疹病毒科的病毒，EBV感染包括增殖性感染（或称活动性感染）和潜伏感染两种状态，EBV感染人淋巴细胞和上皮细胞，初次感染后病毒可长期在人上呼吸道上皮细胞或淋巴组织中潜伏，潜伏感染和终生携带是EBV感染的重要特征。人群对EBV普遍易感，大多数人初次感染发生在儿童或青少年时期并可终生携带，在中国，8岁以上人群90以上血清学阳性。传染性单核细胞增多症（infectious mononu

2、cleosis，IM） 是典型的EBV初次感染表现；值得注意的是在免疫抑制（如器官移植）、遗传缺陷（如X连锁淋巴组织增生）或潜伏感染的反复激活的情况下，EBV感染可能导致不良预后，如发展成为慢性活动性EB病毒感染（CAEBV）和EBV相关的噬血性淋巴组织增生（EBV-HLH）。另外EBV还与儿童及成人的淋巴瘤等多种肿瘤发病有关。因而及时准确的实验室诊断有助于临床对EBV感染的时相、机体状况和发生不良转归的风险进行评估，这对于儿童EBV感染性疾病的诊断及预后至关重要。一、EBVDNA测定EBV-DNA阳性是EBV存在的直接证据。由于潜伏感染的存在，正常人外周血单个核细胞中也常有低载量的EBV-D

3、NA检出（通常低于200拷贝数m1）。在活动感染发生时EBV在人淋巴细胞中大量增殖（IM患者一般可达103105拷贝数m1）并释放到血浆或淋巴液中。随着感染的控制，EBV感染进入潜伏状态，血浆或淋巴液中的病毒颗粒迅速消失，而外周血淋巴细胞中的EBV仍将以潜伏状态保持较高滴度数月1年。对于复发性感染外周血EBV-DNA载量会更高，CAEBV可达105106拷贝数ml甚至更高，EBV-HLH一般在104106拷贝数ml之间。由于不同感染状态下病毒的状态和分布不同，EBV-DNA测定结果的解释因标本来源的不同而有不同。1全血：淋巴细胞是EBV感染的靶细胞，淋巴细胞中潜伏期EBV的存在和活动感染后长达

4、数月的持续阳性使得该检测结果不能反映现症感染，也不适合急性感染如IM的诊断。因此外周血单个核细胞EBV-DNA定量测定更适合复发感染如CAEBV、EBV-HLH或移植相关EBV感染的诊断和检测。本方法的一个缺陷在于单个核细胞分离步骤繁琐，自动化程度低，定量结果受单个核细胞的分离效率影响较大。为解决这一问题，有研究者使用吸附法抽提全血DNA进行定量，现有大量商品化的抽提系统可供使用，抽提步骤自动化程度大大提高，且定量结果与分离单个核细胞的测定结果具有良好的相关性。2血浆或血清：血浆中的EBV-DNA来自活动感染期由感染淋巴细胞中释放的病毒颗粒，感染被控制后血液中游离的病毒颗粒和EBV-DNA又被

5、免疫系统迅速廓清。因此血浆或血清中的EBV-DNA只有活动期感染时为阳性，恢复期和潜伏感染为阴性，这使得血浆EBV-DNA成为一个很好反映活动感染的指标，在IM、EBV-HLH和淋巴瘤等急慢性活动感染患者的血浆中均可检出，而潜伏感染者多为阴性。3上呼吸道标本如唾液、口腔含漱液和咽喉拭子：具有取材方便的优点，但由于EBV在绝大多数人咽喉部定植，无论潜伏感染或活动性感染均可检出，常用于流行病学调查和鼻咽癌方面的一些检查，对IM和其他儿科相关EBV感染的诊断价值有限。就EBV-DNA检测的方法学而言，商品化的EBV-DNA测定试剂盒自20世纪90年代末上市以来，EBV-DNA的测定经历了从半定量、竞

6、争定量到荧光定量的演化，现一般采用荧光定量PCR的方法，分析性能良好，但迄今为止仍无权威的参考物质，市场上多数试剂盒仍使用自制的以质粒为基础的标准品，适宜的第三方质控品也不易得到，这为EBV-DNA测定的标准化带来了一定的障碍。二、EBV相关抗体测定EBV初次感染时，机体首先产生针对其壳抗原（viral capsid antigen，VCA）的IgM抗体（VCA-IgM），然后是壳抗原低亲和力的IgG抗体（VCA-IgG），随着抗体亲和力的成熟，感染后期机体将产生高亲和力的VCA-IgG和核心抗原抗体（EBNA-IgG）并持续终身。在急性感染中后期还会一过性早期抗原抗体（EA-IgG）出现。而

7、IgA型的抗体与EBV进入上皮细胞有关，持续高滴度的IgA抗体被认为和鼻咽癌有关。血清中的EBV相关抗体主流检测方法为ELISA、化学发光和免疫荧光法，临床应用非常广泛，但由于针对不同抗原或不同亚类的抗体具有不同的临床意义，相关抗体的组合测定有助于感染类型和时相的判断，检验项目的合理选择和正确解释就显得非常重要。VCA-IgM是最常用的EBV初次感染的指标，然而部分患者可能因VCA-IgM缺失而导致漏诊；低亲和力的VCA-IgG在初次感染的早期出现，也可作为初次感染的诊断指标。EBNA-IgG和高亲和力的VCA-IgG都在感染后期才出现并可终生携带，被视为恢复期或既往感染的指标；对于免疫功能正

8、常的个体，EBNA-IgG与VCA-IgG结合可用于初次感染和复发感染以及感染时相的判断。 EA-IgG产生晚于VCA-IgG，慢性活动感染时可持续阳性，根据荧光模式差异EA可分为弥散型（D）和局限型（R）。结合其他抗体检测结果，EA抗体通常用于复发感染相关疾病的诊断。 三、EB病毒感染的其他检验除EBV核酸和抗体检测外，感染者的细胞免疫功能检测、恶性EBV感染性疾病易感基因检测以及EBV基因分型也正越来越引起临床的重视。1感染者的细胞免疫功能检测：EBV感染者的细胞免疫功能通常通过流式细胞术进行测定，淋巴细胞亚群方面IM患者主要体现在CD3+和CD8+细胞的增高；EBV-HLH患儿典型特征为

9、NK细胞减少；而CAEBV患者的典型特征为2系以上血细胞计数的减低。抗EBV免疫依赖于特异性的细胞免疫，T细胞向ThlTh2的极化状态很大程度上决定了免疫杀伤和免疫逃避，通过测定细胞因子、极化相关转录因子以及外周血白细胞CCR3CCR5表达水平可反映T细胞的极化状态，从而对机体抗病毒免疫功能进行评估。2恶性EB病毒相关疾病易感基因检测：X连锁淋巴组织增生是一种X染色体连锁的先天性免疫缺陷病，患者对EBV感染高度敏感，发病急，常表现为暴发性IM、HLH、低丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤等，预后很差，70以上患儿于10岁前死亡，因此早期诊断并及时进行骨髓移植至关重要，相关的遗传学突变包括X染色体上的S

10、H2D1A和XIAP等基因。另外基因PRFl、UNC13D、STXll、STXBP2也可能与原发性HLH有关。 四、总结EBV作为儿童时期感染的一种常见病毒，具有导致严重疾病的潜能，常规的血清学、分子生物学和分子病理学手段已广泛应用于EBV感染及EBV相关疾病的诊断。EBV的血清学检查和核酸载量测定是当前EBV感染相关疾病实验室检查的最主要手段，VCA-IgM和低亲和力的VCA-IgG对现症EBV感染具有重要意义，对于IM等急性、亚急性EBV感染而言，血清学检查优于在恢复期还保持很高载量的EBV-DNA。婴幼儿、器官（或骨髓）移植者、HIV感染者、肿瘤化疗患者等免疫功能不全的受检者，血清学检查可能带来漏诊，对于此类患者还应结合EBV-DNA载量进行判断。 EBV-DNA载量的检测对CAEBV、EBV-HLH的诊断价值高于VCA-IgM血清学检查。相对于EBV的核酸以及血清学检测，对EBV感染患儿的免疫学功能评估、易感基因的检测等近年来正成为EBV相关疾病实验室诊断研究新的热点。随着方法学的成熟和诊断价值的进一步明确，可望成为EBV相关疾病诊断、监控及预后判断新的强有力的工具。资料来源：马展，张泓儿童EB病毒感染的实验室诊断中华检验医学杂志2015，38（4）：223-225【精品文档】