实验二 细菌的人工培养.ppt

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1、实验二细菌的人工培养,西安医学院 病原生物学与免疫学教研室,Xian edical University,微免教研室,目的要求,掌握常用培养基的细菌接种法。 掌握常用细菌生化反应的原理、检查方法。 熟悉常用培养基的种类。 了解细菌培养基的制备原则及其基本程序。 了解细菌培养物的各种性状。,Xian edical University,微免教研室,实验内容,一、细菌的培养技术（录像） 二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象 三、细菌的接种法 四、细菌的生化反应,Xian edical University,微免教研室,思考讨论,何谓培养基？其制备原则是什么？常用培养基的种类及其用途？ 用什么方法

2、检查细菌的动力？有何实际意义？,Xian edical University,微免教研室,实验报告,1、记录细菌的生长现象。 2、记录并分析细菌的生化反应。,Xian edical University,微免教研室,培养基的制备原则,二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象,1、充足的营养物质； 2、合适的酸碱度； 3、必须经过灭菌处理。,培养基的制备过程,配料、溶化、测定及矫正pH、过滤、分装、灭菌备用,Xian edical University,微免教研室,培养基的种类（性状）,二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象,液体培养基、半固体培养基、固体培养基,培养基的种类（用途）,1、基础培养

3、基：如肉汤培养基 2、营养培养基：如血平板 3、鉴别培养基：如糖发酵管 4、选择培养基：如SS培养基 5、厌氧培养基：如庖肉培养基,Xian edical University,微免教研室,细菌的生长现象,二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象,1、液体培养基：混浊生长、沉淀生长、菌膜生长 2、半固体培养基：扩散生长、非扩散生长 3、固体培养基：菌落、菌苔,Xian edical University,微免教研室,三、细菌的接种法,琼脂平板培养基的分区划线接种法 琼脂斜面培养基的接种法 半固体培养基接种法 液体培养基接种法,Xian edical University,微免教研室,三、细菌的接

4、种法,琼脂平板培养基的分区划线接种法 琼脂斜面培养基的接种法 半固体培养基接种法 液体培养基接种法,Xian edical University,微免教研室,四、细菌的生化反应,各种细菌具有的酶不完全相同，对营养物质的分解能力不一致，代谢产物有别。据此特点，利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生化反应。,Xian edical University,微免教研室,原理： 细菌 糖（醇）有机酸，pH（指示剂呈酸性反应） 甲酸解氢酶 甲酸CO2+H2（倒置小试管中有气泡） 方法：大肠埃希菌、伤寒沙门菌分别接种于葡萄糖、乳糖等发酵管，37培养18h24h观察。 结果：,糖发酵试验,四、细菌的生化

5、反应,Xian edical University,微免教研室,四、细菌的生化反应,糖发酵试验,Xian edical University,微免教研室,四、细菌的生化反应,靛基质（吲哚）试验,原理： 细菌 吲哚试剂 色氨酸吲哚玫瑰吲哚 方法：大肠埃希菌、伤寒沙门菌分别接种于蛋白胨水，37培养18h24h后，加入吲哚试剂观察。 结果：,Xian edical University,微免教研室,四、细菌的生化反应,靛基质（吲哚）试验,(+),(),Xian edical University,微免教研室,四、细菌的生化反应,硫化氢试验,原理： 细菌 含硫氨基酸H2S+FeSO4FeS（黑色） 方

6、法：大肠埃希菌、肖氏沙门菌分别接种于硫酸亚铁培养基，37培养18h24h观察。 结果：,Xian edical University,微免教研室,四、细菌的生化反应,硫化氢试验,(+),(),Xian edical University,微免教研室,I - 吲哚（indol）试验 M - 甲基红（methyl red）试验 Vi- VP（Voges-Proskauer）试验 C - 枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验,四、细菌的生化反应,IMViC试验,Xian edical University,微免教研室,四、细菌的生化反应,葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇（pH5.4

7、） 混合酸（ pH4.5） 甲基红指示剂 KOH+空气 丁二醇 双乙酰 -萘酚+肌酸 红色化合物 红色 （VP试验阳性） （甲基红试验阳性） VP试验与甲基红试验原理,Xian edical University,微免教研室,方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水，37培养18h24h后，按每毫升培养基加入含0.3%肌酸或肌酐的0.1ml 40% KOH溶液，4850水浴2h或37 4h，充分摇动后观察。 方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水，37培养18h24h后，滴加甲基红指示剂观察结果。,四、细菌的生化反应,VP试验,甲基红试验,Xian edical Univ

8、ersity,微免教研室,四、细菌的生化反应,枸橼酸盐利用试验,原理： 细菌利用铵盐作为唯一氮源，并利用枸橼酸盐作为唯一碳源时，可在枸橼酸盐培养基上生长，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，并分解铵盐生成氨，培养基呈碱性反应。 方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于枸橼酸盐培养基，37培养18h24h观察。 结果：,Xian edical University,微免教研室,大肠埃希菌 + + - - 产气杆菌 - - + +,四、细菌的生化反应,IMViC试验,Xian edical University,微免教研室,四、细菌的生化反应,尿素酶试验,原理： 细菌若有尿素酶，能分解培养基中的尿素产生氨，使培养基变为碱性，酚红指示剂呈深酒红色。 方法：大肠埃希菌、变形杆菌分别接种于尿素培养基，37培养18h24h观察。 结果：,Xian edical University,微免教研室,尿素酶试验,四、细菌的生化反应,