实验一血清总补体活性的测定.ppt

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1、实验一,血清总补体活性的测定 CH50法,实验目的要求,1.掌握补体的溶细胞作用； 2.了解血清总补体活性测定的方法及实际意义。,MBL,复习理论知识,绵羊红细胞（sheep red blood cell, SRBC）与其相应的抗体（溶血素）结合形成抗原-抗体复合物，经经典途径活化补体系统，使绵羊红细胞溶解。当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和活性相关。将新鲜待检血清作不同稀释后，加入反应体系，测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清用量作为判定终点，可测知补体总溶血活性。,（一）CH50测定法的原理,溶血程度与补体含量的关系,在适当、稳定的反应系统中，溶血反应与补体的剂量依赖关

2、系呈现“S”形曲线 在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化对溶血程度的影响不大。但在3070%溶血时，补体量只要出现较小的变动，溶血程度就会发生较大的改变,补体量,实验材料 1仪器：水浴箱、离心机。 2材料：试管架、小试管、1毫升刻度吸管、待测血清、2%绵羊红细胞悬液、溶血素（2个单位）、pH7.4巴比妥缓冲液、50%溶血标准管、记号笔等。,（二）CH50测定方法,1取洁净小试管10支，依次编号，置于试管架上。 2取1ml刻度吸管4支，按下表加入各成分，摇匀。,试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 pH7.4巴比妥 缓冲液(ml) 1.40 1.35 1.30 1.25 1.20 1.15

3、 1.10 1.50 1:20稀释血清 (ml) 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 - 溶血素 (2个单位) 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 2%SRBC (ml) 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50,置37水浴箱中水浴30min,根据肉眼观察选定所要离心的管号，2500r/min，离心5min,实验结果计算: 将离心后各管与50%溶血标准管比较，判定50%溶血终点管。,1,50%溶血终点管的血清用量,血清稀释度,补体活性(U/ml)=,注意事项 1待检血清必须新鲜；

4、 2实验器材必须洁净； 3加液务必准确，吸管不能混用； 4加绵羊红细胞时应摇匀； 5. 用过的吸管等放到指定位置。,（三）方法评价与临床意义,方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体积成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反应温度有关 血清总补体活性的参考范围为50100U/ml 血清总补体活性增高见于： 急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等 血清总补体活性降低见于： 消耗增多:免疫复合物导致的补体活化和消耗增多,如SLE. 补体的大量丢失:主要见于大面积烧伤、失血及肾脏病患者。 补体合成不足:常见于肝脏疾病患者或营养不良的病人。,实验报告 血清总补体活性测定（CH50法）的原理、方法、结果及意义。 讨论题: 补体是如何发挥溶细胞作用的？,