上师大分子生物学2009 试卷A.doc

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1、上海师范大学标准试卷2009 2010学年 第一学期 考试日期 2009年 月 日 科目 分子生物学（A卷） 专业 本、专科 年级 班 姓名 学号 题号一二三四五总分 得分我承诺，遵守上海师范大学考场规则，诚信考试。 签名：_一名词解释(本项合计20分，每个名词2分)1 外显子: 是真核生物基因的一部分，在剪接后仍会保存下来，并可在蛋白质合成过程中被表达为蛋白质。2 Ti质粒：在根瘤农杆菌细胞中存在的一种染色体外自主复制的环形双链DNA分子，通常将目的基因插入到T-DNA区后用于转化。重组的T-DNA转化到根瘤农杆菌细胞中，该农杆菌携带无T-DNA、改造过的Ti质粒（卸甲T-DNA穿梭质粒）。

2、3 报告基因 ：是一个其表达产物（蛋白或酶）非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。4 半保留复制：DNA在复制过程中，每条链分别作为模板合成新链，产生互补的两条链。这样新形成的两个DNA分子与原来的DNA分子的碱基顺序完全一样，因此，每个子代分子的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的的复制方式。5 染色体步移：通过不断从文库中分离相邻的基因组克隆来克隆目的基因（位置克隆）的方法过程,称为染色体步移可以有效获取与已知序列相邻的未知序列。6 细菌

3、人工染色体：BAC载体是基于大肠杆菌天然的染色体外F因子，BAC 能容纳长达300350kb的插入序列。比YAC短，但BAC的优点是: 稳定、容易转化。7 Southern杂交：Southern于1975年首先设计发明的，用一种或多种限制酶消化基因组DNA，通过琼脂糖凝胶电泳按大小分离所得的片段，随后使DNA在原位发生变性，并从凝胶转移至固相支持体（尼龙膜）上。DNA转移至尼龙膜的过程中，DNA片段的相对位置保持不变，用标记好的DNA探针与固着于膜上的DNA杂交，经放射自显影确定与探针互补的电泳条带的位置, 然后进行分析。8 端粒：存在于真核细胞线状染色体末端的一小段DNA-蛋白质复合体，它与

4、端粒结合蛋白一起构成了特殊的“帽子”结构，作用是保持染色体的完整性和控制细胞分裂周期。端粒DNA是由简单的DNA高度重复序列组成，端粒酶可用于给端粒DNA加尾，DNA分子每次分裂复制，端粒就缩短一点。9 切除修复：切除突变的碱基（糖苷水解酶）和核苷酸（DNA切割酶）片段。10感受态细胞：通过理化方法诱导细胞，如CaCl2法、电转化法等，使其处于最适摄取和容纳外源DNA的生理状态。二选择题（本项合计20分，每题2分）( B ) 1.关于DNA复制不正确的是_A ) DNA复制机制的核心在于DNA双螺旋中的两条链都携带相同信息，它们的碱基是互补的B) 通常两个复制叉从起始点向三个方向进行复制C)

5、每个复制叉中的前导链是连续复制的D) 所有起始点都在双链最初解链处均富含AT序列( C ) 2.适用于所有DNA的稳定形式的螺旋链形式为_A) A型 B)Z型 C) B型 D) B型和Z型( B ) 3.在哺乳动物细胞中，一种可能传递信号使得表达基因位点处的染色体保持适当的包装水平的重要化学修饰是_A) 磷酸化 B) CpG甲基化C) 糖基化 D) 加帽( C ) 4.真核生物复制叉以每秒约_bp的速度推移。A）40 B）60 C）50 D）30( B ) 5.在DNA克隆中常用于修复双链DNA骨架断裂的酶是_A) EcoR I B) Hind IIIC) T4 连接酶 D) 碱性磷酸酶( D

6、 ) 6.DNA电泳中常用的染色剂是_A) 溴酚兰 B) 龙胆紫 C) 醋酸洋红 D) 溴化乙锭( A )7.在可见光存在的情况下，_可将环丁烷嘧啶二聚体在分解为单体。A) DNA光解酶 B) 烷基转移没酶C) 内切核酸酶 D) DNA修复酶( B )8.20世纪50年代所提出的著名分子生物学的中心法则即_A) DNARNADNA B) DNARNA蛋白质C) RNADNA蛋白质 D) RNADNARNA( A )9.Southern blotting主要用于_的检测A)DNA B)RNA C)蛋白质 D)多糖( B )10.Taq DNA聚合酶的最佳反应温度是_. A37；B.72；C.16

7、；D.92三填空题（本项合计20分，每空1分）1. DNA分子通常以 双链 形式存在。两条独立的 反向 向平行的单链DNA分子以 右 手螺旋方式相互缠绕。2在强酸条件下，核酸可以水解成 含氮碱基 ，戊糖 和 磷酸 。3. DNA合成的方向是从 5 端到 3 端的方向。4. 染色质中的主要蛋白质是组蛋白 。51953年Watson和Crick提出 DNA双螺旋结构 ，奠定了分子生物学的新纪元。6DNA所带电荷为 负 电荷；在琼脂糖凝胶电泳过程中DNA泳动的方向是从 负 极到 正 极。7载体根据功能可以分为 克隆载体 ， 表达载体 和 整合载体 。8染色质有两种类型分别是常染色质 和异染色质 。9

8、PCR 过程中，引物的A+T含量越高，引物的退火温度越 低 。10双链DNA 变性为单链，光吸收值增加的现象称为 增色效应 。四简答题（本项合计20分，每题5分）1. 简述蓝白斑筛选的原理及过程（5分）？在质粒lacZ的编码区中插入了一个多克隆位点，它并不破坏读框，能编码-半乳糖苷酶的N端，宿主细胞可编码-半乳糖苷酶C端。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可互补形成具有酶学活性的蛋白质。产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后破坏了互补作用，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。2简述cD

9、NA文库的构建步骤（5分）（1）mRNA分离纯化：使用寡聚(dT)的磁珠分离mRNA；（2）检测RNA完整性：翻译mRNA法、凝胶电泳分析法；（3）分离并富集mRNA：仅克隆某一特定基因而不是构建完整cDNA文库时，进行此步骤；（4）cDNA的合成：需要反转录酶, 引物(寡聚dT)及dNTP；（5）cDNA末端的处理（6）与载体的连接：碱性磷酸酶将载体去磷酸化(防止载体自连)，T4 DNA连接酶连接载体与Cdna;（7）鉴定:测定文库包含的克隆数，抽查克隆的质量和异质性，如果需要可适当扩增。3.简述Northern杂交的过程及应用（5分）？过程：将RNA样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移到

10、尼龙膜等固相膜上，用同位素或生物素标记的DNA和RNA特异探针对固定于膜上的mRNA进行杂交，洗膜去除非特异性杂交信号，对杂交信号进行分析，出现信号的尼龙膜所对应的。应用：测量真核生物RNA的量和大小，估计其丰度的4什么是基因文库？构建基因文库时，通常采用哪些载体？（5分）基因文库是来自某生物的不同DNA序列的总集，这些DNA序列都已被克隆进了载体以便于纯化、贮存与分析。分为基因组文库和cDNA文库。基因组文库：用基因组DNA的随机片段制备成的。然而用基因组文库来克隆真核生物基因组是非常低的，其中大量DNA是非编码的。cDNA文库:指用来自表达目的基因细胞或组织的mRNA作为来源构建成的文库。

11、经反转录将mRNA合成cDNA(DNA拷贝)后，插入载体构建成cDNA文库。用DNA文库来克隆目的基因是有效的，但克隆的仅是其编码区，而不包含编码区以外的基因组序列。常用载体：质粒10kb;噬菌体23kb;粘粒载体: 45kb;BAC载体：350kb;YAC载体: 1000kb。五论述题(本项合计20分，每题10分)1目前测序的主要方法及其原理？什么是人类基因组计划？该计划有何意义？（10分）（1）化学修饰法:待测序的DNA片段的一端进行标记后，进行碱基的特异切割后再胶分离。（2）Sanger双脱氧链终止法：DNA聚合酶能够利用单链DNA为模板合成出准确的互补链;利用双脱氧核苷三磷酸为底物,使

12、之掺入到寡核苷酸链的3末端,从而终止DNA链的生长。（3）改进后的sanger测序第二代第三代等测序，如焦磷酸测序是对产生的序列的荧光进行检测。人类基因组计划：美国科学家于1985年率先提出的，旨在阐明人类基因组30亿个碱基对的序列，发现所有人类基因并搞清其在染色体上的位置，破译人类全部遗传信息，使人类第一次在分子水平上全面地认识自我。1990年正式启动，美国、英国、法国、德国、日本和我国科学家共同参与了这一预算达30亿美元的人类基因组计划。截止到2005年，人类基因组计划的测序工作已经完成。意义：有助于人类认识许多遗传疾病以及癌症等疾病的致病机理,为分子诊断、基因治疗等新方法提供理论依据。破

13、译生命密码的人类基因组计划有助于人们对基因的表达调控有更深入的了解。2阐述PCR的定义，扩增原理，循环步骤及PCR假阳性的可能因素？（10分）定义：是一种 DNA 体外扩增技术。 1985 年美国的 Mullis 等人发明了 PCR 技术，在体外利用模板 DNA 、特定的寡聚核苷酸引物和 DNA 聚合酶，通过 DNA 变性、复性和延伸过程合成一条互补的 DNA 链。反复重复这一过程，模板 DNA 就可得到大量扩增。扩增原理：在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性，低温退火，引物延伸”三步反应的多次循环，使DNA片段在数量上呈指数增加，从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。循环步骤：94高温预变性4min，接着94变性30s，然后进行低温退火（50-65）退火30s，然后72根据片段长度设置延伸时间。并进行从变性-退火-延伸25-35个循环，然后72延伸7min，最后4低温保存.假阳性出现的原因：引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性；退火温度过低，出现非特异扩增；样品间交叉污染、PCR试剂的污染、PCR扩增产物污染、气溶胶污染等原因。