21.感染性疾病及免疫学检测.pdf

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1、感染性疾病及其免疫检测 目录 CONTENTS 第一章 第二章 第三章 第四章 抗感染的免疫机制、类型和特点 感染免疫标志物 梅毒检测 乙肝标志物检测 感染-是病原体和人之间的斗争，是一种病理改变的过程。病原体可以来自体内体和体 外。 传染-病原体通过一定的方式在人体间相互传播的感染。病原体来自体外。 感染性疾病-是病原体以某种方式进入到人体后，并在人体内生长繁殖，释放毒素或导 致机体内微生态平衡失调，给人体的组织和器官造成一定的损伤而引起的疾病。分传染病和 非传染病。 传染病-指病原体感染人体后产生的有传染性、在一定条件下可造成流行的感染性疾病。 感染性疾病分类 细菌感染性疾病 真菌感染性疾

2、病 病毒感染性疾病 寄生虫感染性疾病 其它病原体感染性疾病 1. 感染可增强机体免疫功能。如：再次应答 感染对机体免疫功能状态的影响感染对机体免疫功能状态的影响 2. 感染使机体免疫功能降低, 免疫调节紊乱, 导致其他传染病、自身免 疫病及超敏反应性疾病的发生 .如:HIV在免疫细胞内增殖、或是抑制 免疫细胞的活化 抗感染免疫的机制 固有免疫 适应性免疫 免疫应答 感染性疾病的免疫学标志物 特异性标志物 非特异标志物 免疫检验 病原体抗原和 核酸、宿主血 清抗体 急性时像蛋白、 补体细胞因子 等 机体对病原体产生的免疫应答过程中产生足够多的病原体标志物 反映疾病的产生，发展，治疗和预后 检验方

3、法： 凝集反应， 沉淀反应， 免疫扩散， 免疫印迹， 免疫电泳， 标记技术 流式细胞检测技 术等 双抗夹心法/竞争抑制法/间接法/捕获法 抗细菌特异性免疫应答 T细胞介导的细胞免疫应答 （抗细胞内细菌感染主要效应机制） B细胞和抗体介导的体液免疫应答 （抗细胞外细菌感染） 细菌感染-非特异性标志物 （一）急性时相反应蛋白 急性炎症、细菌感染、组织损伤时 C-反应蛋白在数小时内出现， 而疾病治愈后又很快就消失。 h-CRP3mg/L（新生儿) CRP0.5ng/L 0.1-0.5ng/L 0.1ng/L （二）降钙素原（PCT) 是无激素活性的降钙素前肽物质 全身性细菌，真菌和寄生虫感染显著升高

4、 与感染程度相关 与预后相关 鉴别全身性细菌感染和脓毒症与病毒感染和无 菌性炎症 实验方法：双抗体夹心免疫化学发光 通过性传播的疾病有20余种 根据我国具体情况,卫生部性病专家咨询组确认为性病的种类有8种: 梅毒、淋病、非淋菌性尿道炎、软下疳、性病性淋巴肉芽肿、生殖器疱疹、 尖锐湿疣和艾滋病。 性病的实验室诊断分为：微生物检验，免疫学检验以及基因诊断等 性传播性疾病（sexually transmitted disease,STD）： 是指通过各种性接触而传播的疾病，简称性病（venereal disease） 性传播疾病(STD) 梅毒螺旋体感染 梅毒（syphilis） 是由梅毒螺旋体(t

5、reponema pallidum，TP) 引起的一种危害性严重的性传播性疾 病,早期主要侵犯皮肤与黏膜，晚期可侵犯全身各组织器官，特别易侵犯心脏与神经 系统。 梅毒感染分三个阶段：硬性下疳；梅毒疹；累及心、肝、神经系统、骨等 传播方式：性传播途径、垂直传播途径 机体感染梅毒螺旋体，可产生梅毒螺旋体的特异性抗体与非特异性抗体（抗类脂质 抗原的抗体） 梅毒螺旋体 暗视野显微镜检查 免疫荧光染色或直接荧光抗体试验 梅毒螺旋体银染色梅毒螺旋体银染色 生物学性状 是苍白密螺旋体苍白亚种 人类是梅毒唯一传染源 孕妇可通过胎盘感染胎儿 感染产生抗体，终生存在不具保护作用 免疫学检测： 非特异类脂抗原（初筛

6、）： 性病研究实验室试验（VDRL) 不加热血清反应素试验USR 快速血浆反应素试验RPR 甲苯胺红不加热血清实验TRUST 特异性密螺旋体抗体（确证） 荧光密螺旋体抗体吸附FIA-ABS 密螺旋体颗粒凝集TP-PA ELISA、化学发光法、免疫层析、免疫印记检测抗-TP 快速血浆反应素试验RPR 密螺旋体颗粒凝集TP-PA 梅毒血清试验阳性 只提示类脂抗体或TP抗体存在，不作为感染依据 梅毒血清学试验结果解释（梅毒临床诊断参考依据） *该结果解释不适用与胎传梅毒和神经梅毒 抗抗-TP特异性检测特异性检测 阴性反应阴性反应 RPR阴性阴性 RPR阳性 阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应 报告抗报

7、告抗-TP/TPPA/RPR阳性阳性 报告阴性报告阴性 TP实验室检测结果报告流程 阳性反应阳性反应RPR试验试验 报告抗报告抗-TP阳性阳性/TPPA/RPR阴性阴性 报告抗报告抗-TP阳性阳性 RPR阳性阳性 TP-PA复查复查 临床常见病毒性肝炎临床常见病毒性肝炎 甲甲乙乙丙丙丁丁戊戊 IgM IgG 体液免疫系统抗感染体液免疫系统抗感染 HBsAg HBcAg HBV DNA DNAP DNA聚合酶聚合酶 （外膜蛋白）（外膜蛋白） （核衣壳蛋白）（核衣壳蛋白） 有包膜的双链DNA病毒 ，双层壳膜结构 （二）乙型肝炎病毒 DaneDane 完整HBVHBV： DaneDane parti

8、cleparticle；球形，42 nm42 nm，双层壳膜结构 小球形颗粒：22 nm22 nm，乙肝表面抗原（ HBsAgHBsAg）, ,不含 DNADNA 丝状( (管状) )颗粒：直径22 nm22 nm，长短不等，HBsAg,HBsAg,不含 DNADNA HBVHBV基因组结构基因组结构 pre-s1 pre-s2 S P P C C pre-c X HBV DNA 3.2 kb 乙乙 肝肝 pre-S1 pre-S1蛋白蛋白 pre-S2 pre-S2蛋白蛋白 S HBsAg pre-C HBeAg C HBcAg P DNAP DNA聚合酶聚合酶 X HBxAg 编码产物编码

9、产物 HBsAg pre-S2 pre-S1 乙乙 肝肝 （三）乙肝的发病机理（三）乙肝的发病机理 1. HBV进入肝细胞的过程进入肝细胞的过程： 肝 细 胞 肝 细 胞 PHSAPHSA受体受体 （人多聚血清蛋白）（人多聚血清蛋白） HBVHBV PHSAPHSA 乙乙 肝肝 2. HBV在体内的复制过程在体内的复制过程是一个逆转录过程是一个逆转录过程 HBV DNAHBV DNAcccDNAcccDNA前基因组前基因组RNARNA 3. HBV损伤肝细胞的机理损伤肝细胞的机理 以细胞免疫介导的肝损伤为主，以细胞免疫介导的肝损伤为主，HBV本身无细胞致病性本身无细胞致病性 三 类 淋 巴 细

10、 胞 参 与 三 类 淋 巴 细 胞 参 与 NK细胞：不需致敏细胞：不需致敏 CTL(CD8+)：主要靶抗原为肝细胞膜上：主要靶抗原为肝细胞膜上HBcAg 抗体依赖性淋巴细胞抗体依赖性淋巴细胞 （ADCC） 抗抗-LSP 抗抗-LMP 自身免疫自身免疫 乙型肝炎关键标志物 5 5 3 3 5 5 3 3 42 nm42 nm HBsAg,preSHBsAg,preS HBcAgHBcAg HBV DNAHBV DNA HBeAgHBeAg 不是HBVHBV本身的成分 是HBcAgHBcAg的裂解产物 能释放到细胞外外周血能测到 病毒复制在血清中出现 能释放到细胞外 外周血能测到 不能释放到细

11、胞外 外周血不能测到 外周血无游离HBV DNAHBV DNA 检测时先裂解HBVHBV HBVHBV示意图 病毒直接标志物病毒直接标志物 病毒抗原： HBsAg、HBeAg、Pre-S1、Pre-S2 病毒核酸： HBV DNA 抗病毒抗体： HBsAb、HBeAb、HBcAb 乙型肝炎化验关键标志物 病毒间接标志物病毒间接标志物 HBV感染后，机体免疫系统针对各病毒抗原的特异性抗体感染后，机体免疫系统针对各病毒抗原的特异性抗体 27 普通实验室乙肝标志物的检测手段 ELISAELISA、 免疫渗滤/ /层析 核酸检测PCRPCR MEIAMEIA检测 CLIACLIA检测 定性定性 半定量

12、半定量/ /定量定量 定量定量 结果以浓度表示结果以浓度表示 有抗原性而无传染性有抗原性而无传染性 HBV S 基因基因 整合整合 肝细胞肝细胞 DNA 持续表达持续表达 “空心汤团”“空心汤团” HBsAg 乙乙 肝肝 HBsAg 的亚型的亚型 adr adw ayr ayw 长江以北长江以北 长江以南长江以南 新疆、西藏、内蒙等新疆、西藏、内蒙等 慢性乙肝HBsAg 表达模式 乙型肝炎表面抗原 (HBsAg) 生物学性状 存在于Dane颗粒的表面 4种亚型 判断HBV感染的指标之一 刺激机体产生抗-HBs 乙乙 肝肝 HBVHBV血清标志物及其临床意义血清标志物及其临床意义 （1）HBsA

13、g 出现时间：出现时间：HBV感染后感染后26个月（潜伏期），阳性存在感染个月（潜伏期），阳性存在感染 持续时间：持续时间： 急性自限性肝炎：急性自限性肝炎：6个月内可消失个月内可消失 慢性肝炎或慢性慢性肝炎或慢性HBsAg携带者：可持续阳性机体清除携带者：可持续阳性机体清除 可能性较小可能性较小 临床意义 （1）乙肝的筛选和普查。 （2）HBsAg阴性不能完全排除乙型肝炎。 （3）同时出现HBsAg和抗-HBs，可能是不同亚型重复感染 （4）如果仅表现为HBsAg阳性者，传染性较弱。 是一种保护性抗体 位于病毒表面 是机体感染或接种乙肝疫苗的标志 如一过性HBsAg阳性，则抗-HBs可以为阴

14、性 临床意义 （1）抗-HBs阳性提示急性感染后的康复。 （2）在接受抗-HBs阳性血液的受血者中，可出现短暂性的抗-HBs阳性。 （3）HBV疫苗接种后，可出现抗-HBs阳性。 （4）抗-HBs与HBsAg同时阳性可见于暴发性肝炎或慢性活动性肝炎患者。 （5）HBsAg含量消失同时伴抗-HBs的出现，是目前临床上慢性乙型肝炎 治疗的最终目标。 （2）HBsAb 是乙肝传染性的标志 急性肝炎早期，HBeAg阳性可能性越大 HBsAg效价越高检出率就越高 HBeAg阳性标志着较强的感染和传染性 HBeAg的血清转换是治疗慢性乙肝的近期目标。 （3）HBeAg HBeAg是病毒复制和传染性的标志是

15、病毒复制和传染性的标志 乙乙 肝肝 （3）HBeAg HBeAg是是HBcAg的降解产物的降解产物 HBV CHBV C基因基因 前前C区区 C 区区 前前C / / C 蛋白蛋白 HBeAg HBcAg 表表 达达 切割、加工切割、加工 分泌到细胞外分泌到细胞外 HBeAg只存在于血清中只存在于血清中 血清血清HBeAg阳性者中，阳性者中， HBV DNA阳性率为阳性率为92% 左右左右 在在HBVHBV感染的自然史中，伴随感染的自然史中，伴随HBeAgHBeAg的阴转往往是的阴转往往是HBVHBV病毒病毒 血症的消失血症的消失 或炎症的或炎症的静息静息。 但在一部分感染者中如但在一部分感染

16、者中如重型肝炎患者，感染起始即为重型肝炎患者，感染起始即为HBeAgHBeAg阴性阴性；另一；另一 部分感染者中如慢性肝炎患者，部分感染者中如慢性肝炎患者，HBeAgHBeAg阴转并不意味着炎症活动的停止。阴转并不意味着炎症活动的停止。 肾功能衰竭同时感染肾功能衰竭同时感染HBVHBV的患者中发现，的患者中发现，HBVHBV核心核心基因部分缺失基因部分缺失的变异的变异 株，缺失序列负责编码株，缺失序列负责编码HBeAgHBeAg抗原决定簇（抗原决定簇（HBelHBel）1818，推测分泌性的，推测分泌性的 HBeAgHBeAg抗原性将大大降低，所以应用常规多克隆抗体法（酶免疫法）检不抗原性将大

17、大降低，所以应用常规多克隆抗体法（酶免疫法）检不 出血清出血清HBeAgHBeAg。 研究表明，研究表明，当乙肝病毒的前核心区发生点突变时当乙肝病毒的前核心区发生点突变时，可使得，可使得HBeAgHBeAg无法表无法表 达，表现为血清达，表现为血清HBeAgHBeAg或抗或抗HBeHBe测定持续为阴性，测定持续为阴性，但血清但血清HBsAgHBsAg或或HBV HBV DNADNA或或Pre S1AgPre S1Ag可表现为阳性可表现为阳性。 乙乙 肝肝 （4）抗）抗-HBe 出现时间：随着出现时间：随着HBeAg的消失而出现的消失而出现 标志着病毒复制减少、传染性降低标志着病毒复制减少、传染

18、性降低 抗抗-HBe阳性者中，阳性者中，16.3%30%左右左右HBV DNA仍阳性仍阳性 可能与前可能与前C基因变异有关基因变异有关 易加重病情、易演变为肝硬化易加重病情、易演变为肝硬化 -干扰素疗效亦较差干扰素疗效亦较差 生物学性状 多出现于急性肝炎恢复期的病人中 比抗-HBs转阳要早 常在HBsAg即将消失或已经消失时检出 存在于乙肝恢复期及痊愈的病人血清中 也可出现于慢性肝炎 肝硬化或无症状的HBsAg携带者可长期存在 主要存在于主要存在于HBV感染的肝细胞内或感染的肝细胞内或DANE颗粒核心中，到血液中即颗粒核心中，到血液中即 被降解为被降解为HBeAg。 一般血清学方法检测不到一般

19、血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗，而只能检测到抗-HBc 可终身阳性可终身阳性 生物学性状生物学性状 是乙肝病毒存在的直接标志是乙肝病毒存在的直接标志 HBcAgHBcAg与与HBVHBV复制呈正相关复制呈正相关 可反映可反映HBVHBV的活动性及复制程度的活动性及复制程度 有助于乙肝疗效和预后的判断有助于乙肝疗效和预后的判断 临床意义 （1）急性乙肝的诊断 （2）预后判断 （3）区分慢性活动性或非活动性肝炎 （4）暴发型乙型肝炎诊断 （5）HBcAg 抗抗HBc-IgG：凡“有过”：凡“有过” HBV感染者均可阳性感染者均可阳性 抗抗HBc-IgM：是：是HBV近期感染或慢性感染

20、者病毒活动的标志近期感染或慢性感染者病毒活动的标志 HBcAg的免疫原性最强的免疫原性最强 抗抗HBc-IgM 生物学性状 早期HBV感染的特异性血清学标志 效价降低常提示预后较好 有助于区分慢性活动性或非活动性肝炎 暴发型乙型肝炎诊断 抗抗HBc-IgG 生物学性状 出现较早 不是保护性抗体 有流行病学调查意义 持续时间：持续时间：618个月个月 可终身阳性可终身阳性 （6）HBcAb 抗- -HBcHBc的意义 抗- -HBc IgGHBc IgG：长期存在，阳性时如HBsAgHBsAg阴性，既往感染 抗- -HBc IgMHBc IgM：短期存在，阳性时，通常HBsAgHBsAg也阳性；

21、 见于急性感染或慢性携带者急性发作 实际工作中，抗- -HBcHBc阳性具有传染性 基本不正确 抗- -HBc IgMHBc IgM具有传染性正确 目前检测的抗- -HBcHBc是总抗体，包括IgGIgG、IgMIgM等，只要IgGIgG阳 性，抗- -HBcHBc即阳性；多数情况下，抗- -HBcHBc阳性仅是 IgGIgG抗体 阳性。 ?正确HBsAgHBsAg阳性具有传染性? ? Symptoms HBeAganti-HBe Total anti-HBc IgM anti-HBc anti-HBs HBsAg 0481216202428323652100 急性乙型肝炎恢复后典型的血清学检

22、测 周 0828 （7）HBV DNA 是病毒复制和有传染性最直接的证据是病毒复制和有传染性最直接的证据 检测方法：斑点杂交法、检测方法：斑点杂交法、PCR法法 （8）DNAP（DNA多聚酶）：是逆转录酶多聚酶）：是逆转录酶 也是直接反应病毒复制的指标之一也是直接反应病毒复制的指标之一 乙乙 肝肝 （9）HBxAg：也可作为病毒复制的标志：也可作为病毒复制的标志 HBxAg具有反向激活作用，可调控病毒基因转录水具有反向激活作用，可调控病毒基因转录水 平，并对宿主癌基因可能有激活作用。平，并对宿主癌基因可能有激活作用。 （10）乙肝病毒前 S1蛋白(pre-S1) 生物学性状 仅在HBV-DNA

23、阳性血清中检 出 是病毒复制指标 （与HBeAg检测率高度符合) 传播病毒的危险性明显高 Pre S1抗原作为临床判断乙肝病毒复制及传染性标志，可并入“两对半”或 “三对半”同步检测，既补充了“二对半”的不足，又可同时确诊乙肝病毒的 存在及复制情况。 Pre S1抗原具有反式转录激活功能，能够激活转化生长因子a（TGF a）启动子基因， 增加TGF a的表达水平。而TGF a表达水平增加，原发性肝癌的发生机率也会相应增加。 因此Pre S1抗原阳性的患者，较易发展成肝硬化甚至肝癌，预后较差。 生物学性状 有一个高免疫性的抗原决定簇 具有多聚蛋白受体 HBV的感染和复制有密切的关系 作为HBV复

24、制标志之一 与HBV-DNA活动呈正相关 （11）乙肝病毒前 S2蛋白(pre-S2) HBV血清学标物 临床意义血液传染性 HB sA g 抗 HB s 抗 HB c HB eA g 抗 HB e +-+-潜伏期或者急性乙肝早期高 +-+-急性或者慢性感染，以抗HBV-IgM鉴别 （“大三阳”） 高 +-+-+乙肝后期或者慢性携带者（“小三阳”）低 -+-+痊愈或者恢复期，有免疫力无 -+-痊愈，有免疫力无 -+-过去感染，但无法检出抗HBs；低水平慢性 感染 未知 -+-疫苗接种或者很早以前曾感染过无 不同血清标志物组合模式的临床意义 各种病原微生物（如细菌、病毒、立克次体、衣原体、螺旋体

25、、分枝杆菌、真菌及寄生虫 等）在适当的条件下均可感染人体，引发一系列组织、细胞的损伤及相应的临床症状、体 征。感染的早期诊断对疾病的诊断和治疗有着非常重要的意义。 部分病原体的感染属于机会性感染，大多数则是由外界侵入的，其与人体宿主之间相互作 用，由于病原体侵袭力、致病力及宿主免疫状态等多种因素的影响，相互作用的后果也各 异，从而产生各种不同的感染谱，即在感染过程中出现各种不同的表现形式。 小结 机体针对病原体的防御机制包括非特异性免疫及特异性免疫两大部分。不同的病原体（如细菌、 病毒、寄生虫）感染可能引发不同的免疫保护性机制。 感染性疾病的免疫学检验主要是针对病原体以及致病过程中的相关因素，采用抗原、抗体等免疫 学原理进行设计的，包括：凝集反应、沉淀反应、免疫扩散、免疫印迹、免疫电泳、标记免疫技 术、免疫荧光技术及流式细胞检测技术等。