实验三-五、细菌的染色ppt课件.ppt

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1、实验二实验二 细菌的细菌的革兰氏染色法革兰氏染色法 细菌的细菌的芽孢染色法芽孢染色法革兰氏染色革兰氏染色一、目的和要求一、目的和要求 1. 了解革兰氏染色法原理及其在细菌分类鉴定了解革兰氏染色法原理及其在细菌分类鉴定 中的重要性。中的重要性。 2. 掌握革兰氏染色的基本步骤。掌握革兰氏染色的基本步骤。 二、原理二、原理 G G+ +、G G- -细菌的细胞壁成分和结构不同。细菌的细胞壁成分和结构不同。 G G+ +的的CWCW主要有肽聚糖形成的网状结构组成，在染色过程主要有肽聚糖形成的网状结构组成，在染色过程中，当用中，当用95%95%乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的乙醇处理时，由于脱水

2、而引起网状结构中的孔径变小，细胞壁通透性降低，使结晶紫孔径变小，细胞壁通透性降低，使结晶紫- -碘复合物被保留碘复合物被保留在细胞壁内而不易脱色，因此呈蓝紫色。在细胞壁内而不易脱色，因此呈蓝紫色。 G G- -的细胞壁中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，当用的细胞壁中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫晶紫- -碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染上碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染上了复染剂的颜色，因此呈现红色。了复染剂的颜色，因此呈现红色。 四、操作四、操作三、三、 菌种菌种

3、： 大肠杆菌大肠杆菌Esherichia coli 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 染液染液：革兰氏染液，：革兰氏染液， 具体步骤具体步骤 制片制片 固定固定 初染（结晶紫染液）初染（结晶紫染液）1-2min 1-2min 水洗水洗 媒染（碘液）媒染（碘液）1min 1min 水洗水洗 脱色（脱色（95%95%乙醇至无色）乙醇至无色） 水洗水洗 复染（番红复染复染（番红复染6-8 6-8 min/min/或复红染液或复红染液1-2 1-2 min min ） 水洗水洗 干燥干燥 镜检镜检 五、实验报告五、实验报告简述各菌株的染色结果，并分别绘图示其形态特征。简述各菌

4、株的染色结果，并分别绘图示其形态特征。革兰氏染色的关键环节革兰氏染色的关键环节 涂片不宜过厚，以免脱色不完全，造成假阳性。涂片不宜过厚，以免脱色不完全，造成假阳性。 乙醇脱色时间乙醇脱色时间 菌龄：应选择活跃生长期的幼培养物作革兰氏染菌龄：应选择活跃生长期的幼培养物作革兰氏染 色。培养时间过长，或死亡及部分自溶，改变色。培养时间过长，或死亡及部分自溶，改变 了细菌细胞壁的通透性，造成阳性菌的假阴性反应。了细菌细胞壁的通透性，造成阳性菌的假阴性反应。 火焰固定不宜过热火焰固定不宜过热 媒染剂的作用媒染剂的作用 媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或

5、吸附力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使之吸附力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使之 不易脱落。不易脱落。芽孢染色法芽孢染色法 一、目的和要求一、目的和要求 1.1. 学习并掌握学习并掌握芽孢染色的基本原理芽孢染色的基本原理 2. 2. 初步了解芽孢杆菌的形态特征初步了解芽孢杆菌的形态特征二、原理二、原理 用着色力强的染色剂孔雀绿在加热条件用着色力强的染色剂孔雀绿在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而进入芽孢一经着色则很难被水洗脱色。当用进入芽孢一经着色则很难被水

6、洗脱色。当用复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更容易区分。孢和菌体更容易区分。三、三、 菌种：菌种： 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis培养物培养物 染液：染液：孔雀绿水溶液、番红水溶液孔雀绿水溶液、番红水溶液 四、操作步骤四、操作步骤 常规制片常规制片 孔雀绿经微波炉加热染色孔雀绿经微波炉加热染色2525秒秒 水洗水洗 番红复染番红复染3-5 min 水洗水洗 镜检镜检五、实验报告五、实验报告 绘图示枯草芽孢杆菌的形态特征绘图示枯草芽孢杆菌的形

7、态特征 革兰氏染色：革兰氏染色：制片制片 固定固定 初染（结晶紫染液）初染（结晶紫染液）1-2min 1-2min 水洗水洗 媒染（碘液）媒染（碘液）1min 1min 水洗水洗 脱色（脱色（95%95%乙醇乙醇至无色）至无色）水洗水洗复染（复染（番红复染番红复染6-8 6-8 min/min/或齐氏复红染液或齐氏复红染液1-2 1-2 minmin ） 水洗水洗干燥干燥 镜检镜检 简述各菌株的染色结果，并分别绘图示其形态特征。简述各菌株的染色结果，并分别绘图示其形态特征。 大肠杆菌大肠杆菌Esherichia coli , 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 芽孢染色：芽孢染色：常规制片常规制片 孔雀绿经微波炉加热染色孔雀绿经微波炉加热染色2525秒秒 水洗水洗 复染复染( (番红水溶液）番红水溶液）6-8 6-8 minmin 水洗水洗 镜检镜检