PCR技术的过程和意义.doc
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1、如有侵权,请联系网站删除,仅供学习与交流PCR技术的过程和意义【精品文档】第 4 页PCR技术的过程和意义一、PCR技术的基本原理类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性低温退火引物延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。在环境检测中,靶核酸序列往往存在于个复杂的混合物如细胞提取液中,且含量很低,对于探测这种复杂群体中的特异微生物或某个
2、基因,杂交就显得不敏感。使用PCR技术可将靶序列放大几个数量级,再用探针杂交探测对被扩增序列作定性或定量研究分析微生物群体结构。二、PCR技术的步骤PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:1、模板DNA的变性模板DNA经加热至93左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;2、模板DNA与引物的退火(复性)模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;3、引物的延伸DNA模板-引物结合 物在的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新
3、的与模板DNA 链互补的半保留复制链,重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 24分钟,23小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。 三、PCR技术的意义1、特异性强PCR反应的特异性决定因素为:引物与模板DNA特异正确的结合;碱基配对原则;Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;靶基因的特异性与保守性。其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循原则的。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(
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