最新十章化学发光免疫分析技术ppt课件.ppt
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1、进入夏天,少不了一个热字当头,电扇空调陆续登场,每逢此时,总会进入夏天,少不了一个热字当头,电扇空调陆续登场,每逢此时,总会想起那一把蒲扇。蒲扇,是记忆中的农村,夏季经常用的一件物品。记想起那一把蒲扇。蒲扇,是记忆中的农村,夏季经常用的一件物品。记忆中的故乡,每逢进入夏天,集市上最常见的便是蒲扇、凉席,不论男女老忆中的故乡,每逢进入夏天,集市上最常见的便是蒲扇、凉席,不论男女老少,个个手持一把,忽闪忽闪个不停,嘴里叨叨着少,个个手持一把,忽闪忽闪个不停,嘴里叨叨着“怎么这么热怎么这么热”,于是三,于是三五成群,聚在大树下,或站着,或随即坐在石头上,手持那把扇子,边唠嗑五成群,聚在大树下,或站着
2、,或随即坐在石头上,手持那把扇子,边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳,热得满头大汗,不时听到边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳,热得满头大汗,不时听到“强子,别跑强子,别跑了,快来我给你扇扇了,快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套,跑个没完,直到累气喘吁吁,。孩子们才不听这一套,跑个没完,直到累气喘吁吁,这才一跑一踮地围过了,这时母亲总是,好似生气的样子,边扇边训,这才一跑一踮地围过了,这时母亲总是,好似生气的样子,边扇边训,“你你看热的,跑什么?看热的,跑什么?”此时这把蒲扇,是那么凉快,那么的温馨幸福,有母亲此时这把蒲扇,是那么凉快,那么的温馨幸福,有母亲的味道!蒲扇是中国传统工艺品,在我国
3、已有三千年多年的历史。取材的味道!蒲扇是中国传统工艺品,在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树,制作简单,方便携带,且蒲扇的表面光滑,因而,古人常会在上于棕榈树,制作简单,方便携带,且蒲扇的表面光滑,因而,古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名,实即今日的蒲扇,江浙称之为面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名,实即今日的蒲扇,江浙称之为芭蕉扇。六七十年代,人们最常用的就是这种,似圆非圆,轻巧又便宜的蒲芭蕉扇。六七十年代,人们最常用的就是这种,似圆非圆,轻巧又便宜的蒲扇。蒲扇流传至今,我的记忆中,它跨越了半个世纪,也走过了我们的扇。蒲扇流传至今,我的记忆中,它跨越了半个世纪,也走过
4、了我们的半个人生的轨迹,携带着特有的念想,一年年,一天天,流向长长的时间隧半个人生的轨迹,携带着特有的念想,一年年,一天天,流向长长的时间隧道,袅道,袅第十章第十章 化学发光免疫化学发光免疫 分析技术分析技术第一节第一节 慨慨 述述一、化学发光一、化学发光二、化学发光效率二、化学发光效率第二节第二节 化学发光剂和标记技术化学发光剂和标记技术一、化学发光剂一、化学发光剂二、发光剂的标记技术二、发光剂的标记技术 化学发光化学发光(chemiluminescence)是指伴随化学反是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。某些物质应过程所产生的光的发射现象。某些物质( (发光剂发光剂) )在化学反应
5、时,吸收了反应过程中所产生的化学能,在化学反应时,吸收了反应过程中所产生的化学能,使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态,当电子从激发态回复到基态时,以发迁到激发态,当电子从激发态回复到基态时,以发射光子的形式释放出能量,这一现象称为化学发光。射光子的形式释放出能量,这一现象称为化学发光。一、化学发光一、化学发光 一些化学反应能释放足够一些化学反应能释放足够的能量把参加反应的物质激的能量把参加反应的物质激发到能发射光的电子激发态,发到能发射光的电子激发态,若被激发的是一个反应产物若被激发的是一个反应产物分子,则这种反应过程叫直分子,则
6、这种反应过程叫直接化学发光。反应过程可简单地描述如下:接化学发光。反应过程可简单地描述如下: A A十十B CB C* * C C* * C C hh其中其中为光子,为光子,C C* *表示表示C C处于单线激发态。处于单线激发态。 若激发能传递到另一个未参加化学反应若激发能传递到另一个未参加化学反应的分子的分子D D上,使上,使D D分子激发到电子激发态,分子激发到电子激发态,D D分子从激发态回到基态时发光,这种过分子从激发态回到基态时发光,这种过程叫间接化学发光。反应过程可表示如下:程叫间接化学发光。反应过程可表示如下: A A十十B CB C* * C C* *十十D CD C十十D
7、D* * D D* * D D十十hh 化学发光效率决定于生成激发态产物分子的化化学发光效率决定于生成激发态产物分子的化学激发效率(学激发效率(CE)和激发态分子的发射效率)和激发态分子的发射效率(EM)。)。化学发光反应的发光效率、光辐射的化学发光反应的发光效率、光辐射的能量大小以及光谱范围,完全由发光物质的性质能量大小以及光谱范围,完全由发光物质的性质所决定,每一个发光反应都具有其特征性的化学所决定,每一个发光反应都具有其特征性的化学发光光谱和不同的化学发光效率。发光光谱和不同的化学发光效率。二、化学发光效率二、化学发光效率第二节第二节 化学发光剂和标记技术化学发光剂和标记技术 在化学发光
8、反应中参与能量转移并最终在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物,称为以发射光子的形式释放能量的化合物,称为化学发光剂或发光底物。化学发光剂或发光底物。 一、化学发光剂一、化学发光剂能作为化学发光剂的条件:能作为化学发光剂的条件:发光的量子产率高;发光的量子产率高;它的物理它的物理- -化学特性要与被标记或测定的化学特性要与被标记或测定的 物质相匹配;物质相匹配;能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物;能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物; 其化学发光常是氧化反应的结果;其化学发光常是氧化反应的结果;在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性。在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性
9、。 直接化学发光剂直接化学发光剂 直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用,直接参与发光反应,它们需酶的催化作用,直接参与发光反应,它们在化学结构上有产生发光的特有基团,可直在化学结构上有产生发光的特有基团,可直接标记抗原或抗体。接标记抗原或抗体。 1. 1. 吖啶酯吖啶酯 在碱性条件下被在碱性条件下被H H2 2O O2 2氧化氧化时时, ,发出波长为发出波长为470nm470nm的光,具有很高的发的光,具有很高的发光效率,其激发态产物光效率,其激发态产物N-N-甲基吖啶酮是甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。该发光反应体系的发光体。 2 2三联
10、吡啶钌三联吡啶钌 三联吡啶钌三联吡啶钌 RU(bpy)3RU(bpy)32+2+是是电化学发光剂,它和电子供体三丙胺(电化学发光剂,它和电子供体三丙胺(TPATPA)在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。反应。 三联吡啶钌三联吡啶钌电化学发光剂反应原理电化学发光剂反应原理 酶促反应发光剂:酶促反应发光剂: 是利用标记酶的催化作用,使发光剂(底是利用标记酶的催化作用,使发光剂(底 物)发光,这一类需酶催化后发光的发光剂物)发光,这一类需酶催化后发光的发光剂 称为酶促反应发光剂。称为酶促反应发光剂。 1鲁米诺及其衍生物鲁米诺及其衍生物 2AMPPD1
11、 1鲁米诺鲁米诺鲁米诺发光原理鲁米诺发光原理鲁米诺增强发光反应原理鲁米诺增强发光反应原理 2AMPPD3-(2-3-(2-螺旋金刚烷螺旋金刚烷)-4-)-4-甲氧基甲氧基-4-(3“-4-(3“-磷酰氧基磷酰氧基) )苯苯-1,2-1,2-二氧杂环丁烷二氧杂环丁烷1. 1. 碳二亚胺(碳二亚胺(EDCEDC)缩合法)缩合法 二、发光剂的标记技术二、发光剂的标记技术2. 2. 过碘酸钠氧化法过碘酸钠氧化法 3 3重氮盐偶联法重氮盐偶联法 4. N-4. N-羟基琥珀酰亚胺活化法羟基琥珀酰亚胺活化法 1 1发光剂的选择发光剂的选择 2 2被标记蛋白质的性质被标记蛋白质的性质 3 3标记方法的选择标
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