最新同化激素类幻灯片.ppt

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1、7.1 概述概述（3）睾酮）睾酮 白色或类白色结晶粉末，白色或类白色结晶粉末，无臭，在氯仿中极易溶解，无臭，在氯仿中极易溶解，在乙醇或乙醚中易溶，在在乙醇或乙醚中易溶，在醋酸乙酯中溶解，在植物醋酸乙酯中溶解，在植物油中略溶，在水中不溶。油中略溶，在水中不溶。17.2.2 外源性激素外源性激素 外源性激素是一类蛋白同化作用强、雄激外源性激素是一类蛋白同化作用强、雄激素作用较弱的睾酮衍生物。药理作用和不素作用较弱的睾酮衍生物。药理作用和不良反应与雄激素有许多相同之处，促进蛋良反应与雄激素有许多相同之处，促进蛋白质合成能力强，雄性化的不良影响较雄白质合成能力强，雄性化的不良影响较雄激素小。激素小。（

2、1）去氢甲睾酮）去氢甲睾酮 蛋白同化作用强于雄激素样作用，孕激素蛋白同化作用强于雄激素样作用，孕激素样活性小样活性小 能促进蛋白质合成，抑制蛋白质异生，增能促进蛋白质合成，抑制蛋白质异生，增进食欲，使肌肉生长，体重增加进食欲，使肌肉生长，体重增加 促进钙磷在骨中沉积，加速骨骼生长促进钙磷在骨中沉积，加速骨骼生长 促进组织新生和创伤修复促进组织新生和创伤修复 降低血清胆固醇降低血清胆固醇（2）司坦唑醇）司坦唑醇 蛋白同化作用强，为甲睾酮的蛋白同化作用强，为甲睾酮的30倍，雄激倍，雄激素活性仅为其四分之一素活性仅为其四分之一 能促进蛋白质合成，抑制蛋白质异生能促进蛋白质合成，抑制蛋白质异生 降低血

3、清胆固醇，甘油三酯水平降低血清胆固醇，甘油三酯水平 促进钙磷在骨中沉积，减轻骨髓抑制促进钙磷在骨中沉积，减轻骨髓抑制 男性不良反应小男性不良反应小 主要用于预防遗传性血管性水肿主要用于预防遗传性血管性水肿（3）醋酸甲羟孕酮）醋酸甲羟孕酮 作用与黄体酮相似作用与黄体酮相似,孕激素活性强孕激素活性强,无雌激素无雌激素和雄激素活性和雄激素活性,有抗雌激素作用。有抗雌激素作用。 内服、注射均有效。内服在胃肠道吸收内服、注射均有效。内服在胃肠道吸收,在在肝内降解。肌内注射后肝内降解。肌内注射后23天血药浓度达到天血药浓度达到峰值。血药峰值越高峰值。血药峰值越高,药物清除越快。肌注药物清除越快。肌注150

4、mg后后69个月血中才检不出药物。个月血中才检不出药物。（4）去甲睾酮）去甲睾酮 牛注射去甲睾酮后牛注射去甲睾酮后,脂肪中残留能被检出脂肪中残留能被检出,并并持续持续73天天;尿中残留低于尿中残留低于1g/kg。 内服后脂肪中残留未被检出内服后脂肪中残留未被检出,但尿中残留可但尿中残留可检出。检出。（5）醋酸甲地孕酮）醋酸甲地孕酮 本品为孕激素对垂体促性腺激素的释放有本品为孕激素对垂体促性腺激素的释放有一定的抑制作用一定的抑制作用,但比左炔诺孕酮和炔诺酮但比左炔诺孕酮和炔诺酮为弱。不具有雌激素和雄激素样活性为弱。不具有雌激素和雄激素样活性,但有但有明显抗雌激素作用。与雌激素合用明显抗雌激素作用

5、。与雌激素合用,抑制排抑制排卵。卵。 动物致畸试验表明对家兔具有死胎率增加动物致畸试验表明对家兔具有死胎率增加和致畸作用。和致畸作用。（6）醋酸美仑孕酮）醋酸美仑孕酮 内服时孕激素作用约为黄体酮的内服时孕激素作用约为黄体酮的75倍倍,无雌无雌激素和雄激素活性激素和雄激素活性,具有显著排卵抑制作用。具有显著排卵抑制作用。 小母牛用药后小母牛用药后,母药和代谢物主要由粪便排母药和代谢物主要由粪便排出。停药出。停药6h,肝、脂肪、肾和肌肉组织中的肝、脂肪、肾和肌肉组织中的残留量分别为残留量分别为915g/kg、78g/kg、1.21.8g/kg和和0.51g/kg。脂肪、肝、肾。脂肪、肝、肾和肌肉中

6、母药残留量分别占总残留的和肌肉中母药残留量分别占总残留的80%、37%、30%和和45%。 美国美国FDA规定休药期规定休药期48h,但欧盟禁止使用。但欧盟禁止使用。17.3 样品处理样品处理17.3.1 提取提取 液体样品液体样品(奶、血液、尿液奶、血液、尿液)提取前需要脱脂提取前需要脱脂肪肪,通常在通常在4 、7000g离心离心,除去浮在上层的除去浮在上层的脂肪，用水或磷酸盐缓冲液稀释。脂肪，用水或磷酸盐缓冲液稀释。半固体样品半固体样品(肌肉、肝、肾肌肉、肝、肾)先要用切碎机或先要用切碎机或匀浆器进行组织破碎，提取均质，匀浆器进行组织破碎，提取均质，40-60 下加热，使脂肪融化成液体。下

7、加热，使脂肪融化成液体。 粗提取液的净化方法包括液粗提取液的净化方法包括液-液萃取、固相液萃取、固相萃取法、液相色谱、免疫亲和色谱和超临萃取法、液相色谱、免疫亲和色谱和超临界流体色谱等。为了达到更好的纯化效果界流体色谱等。为了达到更好的纯化效果,可将几种方法结合应用。可将几种方法结合应用。 液液-液萃取大多是去除水溶性提取液中的脂液萃取大多是去除水溶性提取液中的脂肪肪,例如例如,乙腈或甲醇提取液中加入正己烷或乙腈或甲醇提取液中加入正己烷或异辛烷异辛烷,可脱去脂类物质。可脱去脂类物质。17.3.2 净化净化固相萃取法固相萃取法 固相萃取法具有简便、快速、经济等优点固相萃取法具有简便、快速、经济等

8、优点,已广泛应用于激素类药物的净化。正相柱已广泛应用于激素类药物的净化。正相柱常用硅胶、氧化铝、氰基型和氨基型吸附常用硅胶、氧化铝、氰基型和氨基型吸附剂剂,反相柱常用反相柱常用C18和和C8吸附剂。吸附剂。 固相萃取柱的净化效果有时并不能满足质固相萃取柱的净化效果有时并不能满足质谱检测的要求谱检测的要求,因此有人将固相萃取法与色因此有人将固相萃取法与色谱法相结合谱法相结合,对样品提取液作更高的纯化。对样品提取液作更高的纯化。17.4 分析方法分析方法 生物样品中同化激素类的生物样品中同化激素类的分析主要采用色谱法分析主要采用色谱法,包括薄层包括薄层色谱法、气相色谱法和液相色色谱法、气相色谱法和

9、液相色谱法。谱法。17.4.1 薄层色谱法薄层色谱法 薄层色谱法具有快速、经济等优点薄层色谱法具有快速、经济等优点,适合残适合残留分析的初筛。为了提高薄层色谱分析的留分析的初筛。为了提高薄层色谱分析的灵敏度和选择性灵敏度和选择性,在显色剂研究上做了大量在显色剂研究上做了大量的工作的工作,一些与雌酮、雌二醇、己烯雌酚、一些与雌酮、雌二醇、己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉烯醇发生显色反应玉米赤霉醇和玉米赤霉烯醇发生显色反应的染料被相继报道。的染料被相继报道。 重氮基染料与雌激素反应重氮基染料与雌激素反应,形成重氮基衍生形成重氮基衍生物、酚基和二羟基苯甲酸内酯类的雌激素物、酚基和二羟基苯甲酸内酯类的雌

10、激素衍生物衍生物,它们的色泽强度各不相同。此外它们的色泽强度各不相同。此外,科科林斯红和快蓝林斯红和快蓝BB与激素反应成盐后与激素反应成盐后,具有很具有很强的色泽。强的色泽。17.4.2 气相色谱法气相色谱法 20世纪世纪80年代出现的毛细管年代出现的毛细管GC使使GC-MS结结构简化、仪器成本下降。毛细管构简化、仪器成本下降。毛细管GC和和SIM检测方式使检测方式使GC-MS发展成为一种成熟的、发展成为一种成熟的、集高效分离、高灵敏度检测和结构鉴定为集高效分离、高灵敏度检测和结构鉴定为一体的分析技术。一体的分析技术。 同化激素及其代谢产物的结构中含有多个同化激素及其代谢产物的结构中含有多个羟

11、基或酮基等极性基团羟基或酮基等极性基团,为高极性、难挥发、为高极性、难挥发、热稳定差的化合物热稳定差的化合物,GC法难以直接分析法难以直接分析,因因此需衍生化使形成易挥发、热稳定性好的此需衍生化使形成易挥发、热稳定性好的衍生物衍生物,以提高其色谱性能。以提高其色谱性能。17.4.3 液相色谱法液相色谱法 HPLC比比GC更常用于激素的分析。分析极更常用于激素的分析。分析极性较大的雌激素结合物常采用阴离子交换性较大的雌激素结合物常采用阴离子交换色谱法或反相离子对色谱法色谱法或反相离子对色谱法,尤其是后者分尤其是后者分离效果更好。离效果更好。 环糊精色谱也被用于雌激素的分析环糊精色谱也被用于雌激素

12、的分析,该法能该法能有效地分离结构异构的雌激素结合物。有效地分离结构异构的雌激素结合物。 雌二醇和雌三醇在雌二醇和雌三醇在200nm处有一中等强度处有一中等强度的较尖的紫外吸收峰的较尖的紫外吸收峰,在在280nm处有一较宽处有一较宽的弱吸收峰。的弱吸收峰。 孕酮和睾酮在孕酮和睾酮在240nm处有较强紫外吸收处有较强紫外吸收,紫紫外检测外检测RP-HPLC法是分析生物样品的主要法是分析生物样品的主要方法。一般紫外检测可获得足够的灵敏度方法。一般紫外检测可获得足够的灵敏度,但荧光检测更适合于组织样品的测定。但荧光检测更适合于组织样品的测定。 RP-HPLC和和NP-HPLC均被用于雄激素的分均被用

13、于雄激素的分析。体液中睾酮含量较高时析。体液中睾酮含量较高时,可采用紫外检可采用紫外检测测;否则否则,可将睾酮与衍生化试剂反应制备成可将睾酮与衍生化试剂反应制备成荧光衍生物后再用紫外检测荧光衍生物后再用紫外检测,或采用高灵敏或采用高灵敏度的荧光检测器进行检测。度的荧光检测器进行检测。 LaganaLagana等报道等报道LCLC法检测鸡肉、牛肉和牛肝法检测鸡肉、牛肉和牛肝中中9 9种同化激素种同化激素( (群勃龙、睾酮、孕酮、雌群勃龙、睾酮、孕酮、雌二醇、己烯雌酚、左环十四酮酚、玉米赤二醇、己烯雌酚、左环十四酮酚、玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮、玉米赤霉醇霉烯醇、玉米赤霉烯酮、玉米赤霉醇) )残留

14、。残留。 AndresenAndresen等报道了等报道了LCLC法测定脂肪中醋酸美法测定脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮的仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮的残留量。残留量。 万美梅等采用万美梅等采用LC-LC-电化学检测法测定动物组电化学检测法测定动物组织中己烯雌酚残留量。织中己烯雌酚残留量。 DavoliDavoli等报道了在线萃取液相色谱等报道了在线萃取液相色谱/ /快速原快速原子轰击质谱法测定鼠和牛尿中己烯雌酚的子轰击质谱法测定鼠和牛尿中己烯雌酚的残留。残留。 FangFang等报道了等报道了LC-MS/MSLC-MS/MS法测定鸡和兔肝中法测定鸡和兔肝中玉米赤霉醇残留量。玉米赤霉醇残留量。 秦燕等建立了不同动物肌肉中类固醇同化秦燕等建立了不同动物肌肉中类固醇同化激素激素( (表睾酮、丙酸睾酮、表睾酮、丙酸睾酮、19-19-去甲基睾酮、去甲基睾酮、甲基睾酮、孕酮、甲羟孕酮、雌二醇、雌甲基睾酮、孕酮、甲羟孕酮、雌二醇、雌三醇、炔雌醇、雌酮三醇、炔雌醇、雌酮) )多残留的多残留的LC-MS/MSLC-MS/MS分分析方法。析方法。谢谢大家！谢谢大家！29 结束语结束语