最新四高效液相色谱法2ppt课件.ppt
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1、四高效液相色谱法四高效液相色谱法2 22022-8-14液相色谱仪(液相色谱仪(1)2022-8-14(2) 梯度淋洗装置梯度淋洗装置外梯度外梯度: 利用两台高压输液泵,将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室,混合后进入色谱柱。内梯度内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。2022-8-14(3) 进样装置进样装置 流路中为高压力工作状态, 通常使用耐高压的六通阀进样装置, 其结构如图所示:2022-8-14(4) 高效分离柱高效分离柱 柱体为直型不锈钢管,内径柱体为直型不锈钢管,内径16 mm,柱长柱长540 cm。发展趋势是减
2、小填料粒度和柱径以提高柱效。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。2022-8-14(5) 高效液相色谱检测器高效液相色谱检测器 紫外光度检测器(UV):最小检测量10-9gmL-1,对流量和温度的波动不敏感,可用于梯度洗脱。 最常用的检测器。2022-8-14光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器:光电二极管阵列检测器:1024个二极管阵列,各检测特个二极管阵列,各检测特定波长,计算机快速处理,三维立体谱图,如图所示。定波长,计算机快速处理,三维立体谱图,如图所示。2022-8-14三、三、影响分离的因素影响分离的因素 在高效液相色谱中, 速率方程中的分子扩散项B/
3、U较小,可以忽略不计,而只有两项,即: H = A + C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同,如图所示: 影响分离的主要因素有流动相的流量、性质和极性。影响分离的主要因素有流动相的流量、性质和极性。2022-8-141. 影响分离的因素影响分离的因素流速流速 流速大于0.5 cm/s时, Hu曲线是一段斜率不大的直线。降低流速,柱效提高不是很大。但在实际操作中,流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。2022-8-142. 固定相及分离柱固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱,其选用原则与气相色谱一样。 选择合适的固定相,降低填料粒度可显著提高柱效,但
4、在高效液相色谱中,分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作,一般很少自行制备。 选择短柱、细内径提高分析速度; 研制高效柱填料是一活跃领域。2022-8-143. 流动相及流动相的极性流动相及流动相的极性 (1)可显著改变组分分离状况的流动相选择在液相色谱)可显著改变组分分离状况的流动相选择在液相色谱中显得特别重要。中显得特别重要。 液相色谱的流动相又称为:淋洗液,洗脱液相色谱的流动相又称为:淋洗液,洗脱剂。剂。 (2)亲水性固定液常采用疏水性流动相,即流动相的极)亲水性固定液常采用疏水性流动相,即流动相的极性小于固定相的极性,称为正相液液色谱法,极性柱也称正性小于固定相的极性,称为正相液液色谱
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