[理学]细胞和基因工程.ppt

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1、理学理学细胞和基因工程细胞和基因工程生命的基本单位生命的基本单位直观：直观：一个受精卵一个受精卵成年人（约婴儿的成年人（约婴儿的30-50倍）倍）婴儿（约婴儿（约2万亿个细胞）万亿个细胞）细胞类别：细胞类别：原核细胞原核细胞真核细胞真核细胞动物细胞动物细胞植物细胞植物细胞细胞液泡液泡细胞核细胞核内质网内质网微管微管质膜质膜细胞壁细胞壁线粒体线粒体叶绿体叶绿体微丝微丝高尔基体高尔基体细胞核细胞核溶酶体溶酶体内质网内质网高尔基体高尔基体微丝微丝微管微管质膜质膜线粒体线粒体中心体中心体细胞学说的内容n细胞学说是18381839年间由德国的植物学家施莱登（Schleiden）和动物学家施旺（Schwa

2、nn）所提出,直到1858年才较完善。它是关于生物有机体组成的学说。n主要内容有：n 细胞是有机体， 一切动植物都是由单细胞发育而来， 即生物是由细胞和细胞的产物所组成；n 所有细胞在结构和组成上基本相似；n 新细胞是由已存在的细胞分裂而来；n 生物的疾病是因为其细胞机能失常；n 细胞是生物体结构和功能的基本单位；n 生物体是通过细胞的活动来反映其功能的。细胞学说的意义n它从细胞水平提供了有机界统的证据，证明了植物和动物有着细胞这共同的起源。即所有的植物和动物组织都是由细胞构成的。虽然植物的细胞在形状上与动物的细胞有很大的不同，但是，由于在系统的发生上，所有的植物和动物都是由原始的单细胞生物演

3、化而来的，而且在个体发生上，所有细胞都是由细胞分裂或细胞融合所产生的，因此般细胞都有相同的基本结构和成分。 细胞融合技术细胞融合技术n细胞融合（Cell fusion）也叫细胞杂交（cell hybridization）是指使用人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术， 诞生于20世纪60年代。 n 由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术在创造新细胞、培育新品种方面意义重大，也被广泛应用于细胞生物学和医学研究的相关领域。原生质体n1 1、原生质体概念、原生质体概念: :原生质体是细胞去壁后的原生质体是细胞去壁后的裸露部分裸露部分原生质体（原生质体（p

4、rotoplastprotoplast），其特点是：），其特点是：比较容易摄取外来的遗传物质，如比较容易摄取外来的遗传物质，如DNADNA；便于进行细胞融合，形成杂交细胞；便于进行细胞融合，形成杂交细胞；与完整细胞一样具有全能性与完整细胞一样具有全能性原生质体融合的过程n 原生质体制备原生质体制备 除去胞间层，使单个细胞能除去胞间层，使单个细胞能游离出来，然后再除去细胞壁游离出来，然后再除去细胞壁 细胞壁的去除主要有两种方法细胞壁的去除主要有两种方法 机械法：研磨、剪切、超声波法机械法：研磨、剪切、超声波法 酶法酶法原生质体的制备原生质体的制备原生质体的制备主要是在高渗压溶液中加入原生质体的制

5、备主要是在高渗压溶液中加入细胞壁分解酶细胞壁分解酶，将细胞壁分离剥离，结果剩下由原生质膜包住的类似球状的将细胞壁分离剥离，结果剩下由原生质膜包住的类似球状的细胞，它保持原细胞的一切活性。细胞，它保持原细胞的一切活性。在放线菌和细菌中，制备原生质体主要采用在放线菌和细菌中，制备原生质体主要采用溶菌酶溶菌酶；酵母和；酵母和霉菌一般可用霉菌一般可用蜗牛酶蜗牛酶或或纤维素酶纤维素酶等。等。n 融合融合 (1) 同种细胞在培养时同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自个靠在一起的细胞自发合并，称自发融合发合并，称自发融合 (2) 异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合，称诱导

6、融合。合，称诱导融合。 诱导细胞融合的方法有诱导细胞融合的方法有: :生物方法（病毒）生物方法（病毒）化学方法（聚乙二醇化学方法（聚乙二醇PEGPEG）物理方法（电激和激光）物理方法（电激和激光） n原生质体的融合过程包括原生质体的融合过程包括3个主要阶段：个主要阶段：1）两）两个或多个原生质体的质膜彼此靠近；个或多个原生质体的质膜彼此靠近；2）局部）局部区域质膜紧密粘连，彼此融合；区域质膜紧密粘连，彼此融合；3）融合完成，）融合完成，形成球形的异核体或同核体。形成球形的异核体或同核体。 n诱导动物细胞融合，仙台病毒诱导动物细胞融合，仙台病毒HVJHVJ诱导、诱导、PEGPEG法、法、电融合法

7、都适用；电融合法都适用；植物细胞融合植物细胞融合常用常用PEGPEG法和法和电融合法；电融合法；微生物细胞融合微生物细胞融合多采用多采用PEGPEG法法。n 杂种细胞的筛选杂种细胞的筛选n细胞融合是一个随机的物理过程，经融合后细胞将以多种形式出现，需要通过培养和筛选，除去不需要的细胞，分离出需要的杂种细胞，从而解决融合细胞的选择问题。nA与B融合过程中，你能预见有哪些形式的细胞吗？nA-B，A-A，B-B。nA-A-A，B-B-B等多聚体。n未融合的A，B。n互补选择互补选择: 利用不同细胞的互补特性、如叶绿素缺失利用不同细胞的互补特性、如叶绿素缺失互补、营养缺陷互补、抗性互补等来筛选杂种细胞

8、。互补、营养缺陷互补、抗性互补等来筛选杂种细胞。例如，粉兰烟草与郎氏烟草原生质体的融合，由于两例如，粉兰烟草与郎氏烟草原生质体的融合，由于两个亲本原生质体的生长需要外源生长激素，而杂种细个亲本原生质体的生长需要外源生长激素，而杂种细胞具有激素自主性，这样融合处理后转入无激素培养，胞具有激素自主性，这样融合处理后转入无激素培养，能生长的就是杂种细胞。能生长的就是杂种细胞。微生物原生质体融合微生物原生质体融合植物原生质体融合的过程示意图植物原生质体融合成功范例白菜白菜-甘蓝甘蓝植物原生质体融合成功范例植物原生质体融合成功范例微生物原生质体融合应用微生物原生质体融合应用n纤维素降解菌原生质体融合n芳

9、香族降解菌的构建微生物原生质体融合应用微生物原生质体融合应用n原生质体融合技术在污水工程菌构建上的应用利用原生质体融合技术在污水工程菌构建上的应用利用微生物处理及利用污水是一个很有效的方法，但是微生物处理及利用污水是一个很有效的方法，但是这一技术的应用往往涉及多种微生物，多种菌的优这一技术的应用往往涉及多种微生物，多种菌的优化组合是一个很复杂的课题，原生质体融合技术可化组合是一个很复杂的课题，原生质体融合技术可以将多个功能组合到一个菌上，为其在污水处理上以将多个功能组合到一个菌上，为其在污水处理上的应用提供了良好的条件。的应用提供了良好的条件。n许燕滨等采用原生质体融合技术，将两株具有含氯许燕

10、滨等采用原生质体融合技术，将两株具有含氯有机化合物降解特性的菌假单胞菌有机化合物降解特性的菌假单胞菌T1T1和诺卡氏菌和诺卡氏菌RB1RB1融合构建成一株高效降解含氯有机化合物工程融合构建成一株高效降解含氯有机化合物工程菌，应用于造纸漂白废水，融合菌去除菌，应用于造纸漂白废水，融合菌去除CODCrCODCr和和TCLTCL的能力比混合菌分别提高了的能力比混合菌分别提高了72.05%72.05%和和19.0%19.0%。原生质体融合应用原生质体融合应用n周德明采用原生原体融合技术将球形红假单胞菌和周德明采用原生原体融合技术将球形红假单胞菌和酿酒酵母构建成高效降解工程菌，工程菌用于废水酿酒酵母构建

11、成高效降解工程菌，工程菌用于废水处理的比降解率明显提高。处理的比降解率明显提高。n程树培等将光合细菌与酵母菌进行原生质体融合，程树培等将光合细菌与酵母菌进行原生质体融合，用于连续发酵豆制品废水处理。用于连续发酵豆制品废水处理。n程树培等由单亲株灭活法获得的酿酒酵母与热带假程树培等由单亲株灭活法获得的酿酒酵母与热带假丝酵母原生质体融合而成的杂种酵母细胞，在净化丝酵母原生质体融合而成的杂种酵母细胞，在净化味精废水产生单细胞蛋白方面优于双亲菌株，为提味精废水产生单细胞蛋白方面优于双亲菌株，为提高废水的净化效率，增加单细胞蛋白的产量，创造高废水的净化效率，增加单细胞蛋白的产量，创造了极为有利的条件。了

12、极为有利的条件。 基因工程一、理论方面的三个重要的发现一、理论方面的三个重要的发现1.生物遗传物质生物遗传物质DNA的发现的发现S型R型n将S型细菌中的多糖、蛋白质、脂类和DNA等分别提取出来，分别与R 型细菌进行混合。n预期结果：只有DNA与R型细菌进行混合，才能使R型细菌转化成S型细菌。n实验结果：与预期结果吻合。n但是，格里菲斯转化实验所使用的DNA中仍然含有极少量的蛋白质。因此人们认为不能完全排除蛋白质的作用。那么，还有没有更具有说服力的方法来证明DNA是遗传物质呢？n噬菌体侵染细菌的实验DNA是遗传物质亲代噬菌体寄主细胞内子代噬菌体实验结论第一组实验32P标记DNA有32P标记DNA

13、DNA有32P标记DNA分子具有连续性，是遗传物质第二组实验35S标记蛋白质无35S标记蛋白质外壳蛋白质无35S2. DNA双螺旋结构和半保留复制机理的建立双螺旋结构和半保留复制机理的建立 19531953年，沃森年，沃森(Watson(Watson） 和克里克和克里克 （CrickCrick） 首次提出首次提出了了DNADNA双螺旋结构和半保留复制机理。这一重大发现大大双螺旋结构和半保留复制机理。这一重大发现大大地促进了现代生物科学的发展。地促进了现代生物科学的发展。3.遗传信息传递方式的确立遗传信息传递方式的确立核酸（核酸（DNA）是一种线形多聚核苷酸，基本组成单位是核苷酸。）是一种线形多

14、聚核苷酸，基本组成单位是核苷酸。DNA 的元素组成的元素组成: C H O N P （恒定，（恒定，910%）DNA的结构和化学组成的结构和化学组成腺嘌呤腺嘌呤A A鸟嘌呤鸟嘌呤G G胸腺嘧啶胸腺嘧啶T T（中为尿嘧啶）（中为尿嘧啶）胞嘧啶胞嘧啶所有生命体的所有生命体的DNADNA基本结构都是一致的基本结构都是一致的（1 1）DNADNA的双螺旋结构的双螺旋结构（19531953年年Watson and CrickWatson and Crick发现）发现）两链之间碱基以氢键配对互补，两链之间碱基以氢键配对互补，A AT T，GCGC； nDNADNA是遗传信息的载体，故亲代是遗传信息的载体，

15、故亲代DNADNA必须以自必须以自身分子为模板准确的复制成两个拷贝，并分身分子为模板准确的复制成两个拷贝，并分配到两个子细胞中去，完成其遗传信息载体配到两个子细胞中去，完成其遗传信息载体的使命。而的使命。而DNADNA的双链结构对于维持这类遗传的双链结构对于维持这类遗传物质的稳定性和复制的准确性都是极为重要物质的稳定性和复制的准确性都是极为重要的。的。DNADNA的半保留复制的半保留复制DNADNA的半保留复制的半保留复制nDNADNA在复制过程中，首先打开碱基在复制过程中，首先打开碱基间的氢键，形成两条单链，然后间的氢键，形成两条单链，然后以每条单链分别作为模板，在以每条单链分别作为模板，在

16、DNADNA聚合酶和游离核苷酸作用下，按聚合酶和游离核苷酸作用下，按照碱基互补配对的原则形成磷酸照碱基互补配对的原则形成磷酸二酯键，形成了一条新的互补链。二酯键，形成了一条新的互补链。由此产生的两个子代由此产生的两个子代DNADNA分子与亲分子与亲代代DNADNA分子的碱基顺序完全一样，分子的碱基顺序完全一样，并且在每个子代并且在每个子代DNADNA分子中都保留分子中都保留了一条亲代的了一条亲代的DNADNA链，故称之为半链，故称之为半保留式复制保留式复制(semiconservative (semiconservative replication)replication)。遗传信息的传递遗传

17、信息的传递-中心法则中心法则遗传信息是由遗传信息是由DNADNA通过通过”转录转录”流向流向RNA,RNA,再由再由RNARNA通过通过”翻译翻译”流向蛋白质流向蛋白质 基因工程（基因工程（genetic engineering）是指在基因水平上，）是指在基因水平上，采用与工程设计十分类似的方法，采用与工程设计十分类似的方法， 按照人类的需要进行按照人类的需要进行设计，然后按设计方案创建出具有某种新的性状的生物设计，然后按设计方案创建出具有某种新的性状的生物新品系，并能使新品系，并能使 之稳定地遗传给后代。之稳定地遗传给后代。 基因工程的研究内容基因工程的研究内容基因的概念基因的概念n基因是生

18、命密码，是生物中控制性状及其遗传规基因是生命密码，是生物中控制性状及其遗传规律的律的DNADNA上特定的多核苷酸区段，它记录和传递着上特定的多核苷酸区段，它记录和传递着遗传信息。遗传信息。n科学家发现人类基因数目约为科学家发现人类基因数目约为.万至万至.万个，万个，仅比果蝇多万个。仅比果蝇多万个。n如人的长相、性格、高矮、智商、健康、寿命等，如人的长相、性格、高矮、智商、健康、寿命等，即生、老、病、死是由基因决定的。即生、老、病、死是由基因决定的。n植物的千姿百态、花色、籽粒大小、动物的奔跃植物的千姿百态、花色、籽粒大小、动物的奔跃特性、颜色与毛发等等也都是由基因来控制特性、颜色与毛发等等也都

19、是由基因来控制。人与大鼠的基因人与大鼠的基因90%是相同的是相同的基因怎样携带遗传信息nDNADNA分子的碱基排列顺序怎样储存和编码大量的遗传分子的碱基排列顺序怎样储存和编码大量的遗传信息？这是遗传学上的重要问题。信息？这是遗传学上的重要问题。n虽然碱基只有虽然碱基只有4 4种，但种，但DNADNA分子巨大（含分子巨大（含4 4千千4040亿个亿个脱氧核苷酸），且脱氧核苷酸），且4 4种脱氧核苷酸排列顺序是随机的，种脱氧核苷酸排列顺序是随机的，如果一段如果一段DNADNA含含10001000个碱基，则可能有个碱基，则可能有4 410001000个排列组个排列组合形式，这是一个巨大的天文数字。合

20、形式，这是一个巨大的天文数字。 n像人的像人的DNADNA分子含有分子含有3030亿个碱基对，其不同的排列组亿个碱基对，其不同的排列组合方式可想而知！合方式可想而知！ 基因工程n定义定义用人为的方法将所需的某一供体生物的遗传物质用人为的方法将所需的某一供体生物的遗传物质 DNA DNA大大分子提取出来，在离体条件下用适当的工具酶进行切割后，分子提取出来，在离体条件下用适当的工具酶进行切割后，把它与作为载体的把它与作为载体的DNADNA分子连接起来，然后与载体一起导分子连接起来，然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中，以让外源物质在其入某一更易生长、繁殖的受体细胞中，以让外源物质在其中

21、中“安家落户安家落户”，进行正常的复制和表达，从而获得一种，进行正常的复制和表达，从而获得一种新物种的一种崭新技术。新物种的一种崭新技术。生物工程中最重要生物工程中最重要的工具酶，主要从的工具酶，主要从原核生物中提取；原核生物中提取；它能识别双链它能识别双链DNADNA分分子中的特异性核苷子中的特异性核苷酸序列，使它在特酸序列，使它在特定的位点水解定的位点水解. .（1 1）、限制性内切酶）、限制性内切酶1、基因工程的酶学基础G A A T T CC T T A A G并做如下切割：并做如下切割：5 N N N N G A A T T C N N N 3 3 N N N N C T T A A

22、 G N N N 5 限制性内切酶5 N N N N G A A T T C N N N 3 3 N N N N C T T A A G N N N 5 EcoREcoR I I识别序列：识别序列：什么叫平末端？什么叫平末端？（）（） DNADNA连接酶连接酶种类：种类：作用部位：作用部位：两类两类Ecoli DNA连接酶连接酶T4 DNA连接酶连接酶 磷酸二酯键磷酸二酯键 （2 2）连接酶）连接酶2、基因工程载体n外源基因（外源基因（DNADNA片段）很难直接透过受体细胞的细片段）很难直接透过受体细胞的细胞膜进入受体细胞，即使进入，也会受到细胞内胞膜进入受体细胞，即使进入，也会受到细胞内限制

23、性酶的作用而分解，一般很难进行复制和表限制性酶的作用而分解，一般很难进行复制和表达功能。要将外源达功能。要将外源DNADNA片段导入受体细胞，必须选片段导入受体细胞，必须选择适当的载体（择适当的载体（VectorVector），这是关键步骤之一。），这是关键步骤之一。 n载体是携带外源基因进入受体细胞的工具。载体是携带外源基因进入受体细胞的工具。载体的基本条件载体的基本条件n作为载体的DNA分子，需具备一些基本条件:n容易进入寄主细胞；n进入寄主细胞后能够独立进行自主的复制和表达；n容易从宿主细胞中分离纯化。 质粒是存在于细菌中的一类独立于染色体之质粒是存在于细菌中的一类独立于染色体之外外能自

24、主复制的双链环状能自主复制的双链环状DNADNA分子分子。一个质一个质粒就是一个粒就是一个DNADNA分子，分子，1kb-200kb1kb-200kb。质粒的存在与否对细菌的生长没有任何影响质粒的存在与否对细菌的生长没有任何影响 质粒载体染色体染色体质粒质粒3、基因工程的受体细胞n受体细胞也叫宿主细胞，是指为重组受体细胞也叫宿主细胞，是指为重组DNADNA分子复制、分子复制、转录、翻译、后加工等提供必要条件的细胞转录、翻译、后加工等提供必要条件的细胞n受体细胞有多种，原核细胞、低等真核细胞生物受体细胞有多种，原核细胞、低等真核细胞生物的细胞如酵母、植物细胞、哺乳动物细胞等。胰的细胞如酵母、植物

25、细胞、哺乳动物细胞等。胰岛素基因工程生产就是将外源岛素基因工程生产就是将外源DNADNA导入原核细胞大导入原核细胞大肠杆菌中进行表达实现的。兔免疫肠杆菌中进行表达实现的。兔免疫beta-beta-球蛋白的球蛋白的基因通过基因通过SV40(SV40(猴病毒猴病毒) )作为载体，并入侵入培养作为载体，并入侵入培养的猴肾细胞後，猴肾细胞就可大量产生兔的猴肾细胞後，猴肾细胞就可大量产生兔beta-beta-球球蛋白。蛋白。 1982年，世界上第一个基因工程药物-人胰岛素首次用大肠杆菌表达成功（1 1）微生物表达系统）微生物表达系统-啤酒酵母啤酒酵母中含有包括人体所必需的8种氨基酸在内的20多种氨基酸，

26、17种维生素和14种矿物质。因此，可以说几乎包括了维持人的生命活动所需的几乎所有的营养素。是很好的单细胞蛋白 天蓝色链霉菌天蓝色链霉菌链霉菌是一种土壤丝状细链霉菌是一种土壤丝状细菌，它们的一个显著特点菌，它们的一个显著特点是能产生多种抗生素，这是能产生多种抗生素，这些抗生素约占已知的微生些抗生素约占已知的微生物产生抗生素的一半以上。物产生抗生素的一半以上。链霉素、四环素、和红霉链霉素、四环素、和红霉素等都是由它们制造的。素等都是由它们制造的。 乳酸杆菌乳酸菌乳制品具有整肠作用，乳酸菌乳制品具有整肠作用，预防肠道疾病。预防肠道疾病。 乳酸菌乳制品能降低血清中胆乳酸菌乳制品能降低血清中胆固醇含量、

27、预防心血管疾病固醇含量、预防心血管疾病 乳酸菌乳制品具有抗肿瘤效果乳酸菌乳制品具有抗肿瘤效果乳酸菌乳制品对胃病、便秘、乳酸菌乳制品对胃病、便秘、糖尿病、肝病等有一定的疗效糖尿病、肝病等有一定的疗效 乳酸菌乳制品具有防衰老和延乳酸菌乳制品具有防衰老和延年益寿之功年益寿之功 （2 2）植物细胞表达系统）植物细胞表达系统水稻、棉花、玉米、马铃薯、烟草水稻、棉花、玉米、马铃薯、烟草和拟南芥等和拟南芥等 3、基因工程的受体细胞（3 3） 动物细胞表达系统动物细胞表达系统昆虫细胞利用杆状病毒载体表达蛋白，既能表达原核昆虫细胞利用杆状病毒载体表达蛋白，既能表达原核基因，又可表达哺乳动物基因，且有较强的分泌能

28、力基因，又可表达哺乳动物基因，且有较强的分泌能力和蛋白质翻译后加工和蛋白质翻译后加工 哺乳动物细胞具有很强的蛋白质合成后的修饰能力并哺乳动物细胞具有很强的蛋白质合成后的修饰能力并将表达产物分泌到胞外，可用于表达人类各种糖蛋白，将表达产物分泌到胞外，可用于表达人类各种糖蛋白，但培养条件苛刻，成本较高，且易污染。目前常用的但培养条件苛刻，成本较高，且易污染。目前常用的动物受体细胞有动物受体细胞有L L细胞、细胞、HeLaHeLa细胞、猴肾细胞和中国仑细胞、猴肾细胞和中国仑鼠细胞等。鼠细胞等。动物乳腺生物反应器，如采用动物（如牛、羊）乳腺动物乳腺生物反应器，如采用动物（如牛、羊）乳腺分泌人类蛋白，它

29、具有表达水平高、产物活性强、无分泌人类蛋白，它具有表达水平高、产物活性强、无污染等其他表达系统不可替代的优越性。污染等其他表达系统不可替代的优越性。 3、基因工程的受体细胞基因工程的基本过程抽取抽取DNADNA切下鼠切下鼠DNADNA切开质粒切开质粒DNADNA将质粒导入宿主细胞将质粒导入宿主细胞混合、连接混合、连接 重重组组DNADNA技技术术基因工程的基本过程培养基中加抗生素培养基中加抗生素培养培养裂解细胞释放裂解细胞释放DNADNA分子分子杂交杂交分离扩增目的克隆分离扩增目的克隆重重组组DNADNA技技术术小结l基因工程主要包括几个过程：基因工程主要包括几个过程：l1 1、目的基因的制备

30、；、目的基因的制备；l2 2、选择合适的载体，将目的基因与载体相、选择合适的载体，将目的基因与载体相连接生成重组连接生成重组DNADNA分子；分子；l3 3、将重组、将重组DNADNA片段导入受体；片段导入受体；l4 4、选择，筛选；、选择，筛选；l5 5、观察目的基因的表达。、观察目的基因的表达。n降解石油的工程细菌降解石油的工程细菌n多质粒多质粒“超级细菌超级细菌”，可除去原油中，可除去原油中23的烃。浮的烃。浮油在一般条件下降解需一年以上时间，用油在一般条件下降解需一年以上时间，用“超级细超级细菌菌”只需几小时即可把浮油去除，速度快效率高。只需几小时即可把浮油去除，速度快效率高。n耐汞工

31、程菌耐汞工程菌n脱色工程菌的构建脱色工程菌的构建n降解工业废品、农药残留等基因工程菌降解工业废品、农药残留等基因工程菌基因工程与环境基因工程与环境转基因植物修复重金属污染土壤、水体n由北京大学生命科学院蛋白质工程国家重点实验室研究成功的转基因烟草和转基因蓝藻，可分别用于吸附并排除土壤、水域中重金属镉、汞、铅、镍污染，尤其是水稻、人参、中草药、茶叶等多种出口产品的污染和城市工业污水、矿业污水、电镀污水等，使其达到国际出口标准。 基因工程与环境基因工程与环境基因工程不足n技术上的不确定性技术上的不确定性 l如目的基因插入宿主的染色体的沉默区，则目的基因不能表达，或插入的基因破坏了宿主基因的结构l我们对活的生物体基因表达调控的机制还知之甚少，对多基因控制的性状，现有的基因工程几乎是束手无策n安全方面存在的不确定性安全方面存在的不确定性l基因工程产品的安全性问题l转基因生物的生态安全问题l基因歧视问题基因工程不足