最新叶绿体提取及观察精品课件.ppt

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1、叶绿体提取及观察叶绿体提取及观察叶绿体的发育过程 叶绿体含有叶绿素和类胡萝卜素，是光合作用的场所。主要由叶绿体膜、类囊体和基质三部分构成，其中类囊体包括基粒类囊体和基质类囊体。 叶绿体是由分生组织中小而无色的、未分化的前质体（proplastid）发育而来。黑暗条件下，前质体形成白化体（etioplast），当植物转入光下生长时，白化体即转化为叶绿体。 2密度梯度离心当不同颗粒存在浮力密度差时，在离心力场下，在密度梯度介质中，颗粒或向下沉降，或向上浮起，一直移动到与它们各自的密度恰好相等的位置上形成区带，从而使不同浮力密度的物质得到分离。 差速离心分离叶绿体 细胞经过破碎后制成匀浆，在等渗介质

2、中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。利用细胞各组分质量大小、形状和密度的不同，选择不同的离心力和离心时间，即可分离得到所需要的细胞器或大分子组分。分离完整叶绿体有三个主要困难： 1）有细胞壁包裹。 2）叶绿体中由于淀粉积累成致密颗粒,会在离心过程中使叶绿体破碎。 3）匀浆过程中，液泡中储藏的有毒物质酚类化合物会释放出来。菠菜是分离完整叶绿体的极好材料，其细胞中所含的质体较大，而且它们都能在不积累淀粉和酚类物质的条件下生长。 一、器材 主要设备：普通离心机、粗天平、光学显微镜。 小型器材： 研钵，滴管，50ml烧杯，离心管，漏斗，脱脂棉，玻璃载片和盖片二、材料 新鲜菠菜三、试剂 0.35mo

3、l/L氯化钠溶液 实验方法实验方法一、叶绿体的分离和观察一、叶绿体的分离和观察1、选取新鲜的菠菜叶子，洗净擦干或吸干表面水滴后，去除叶梗及粗脉，称取10g于50ml，0.35 mol/L NaCl溶液中。2、将菠菜和NaCl溶液一起在瓷研体中研磨，磨成匀浆为止。 3、将匀浆用脱脂棉过滤于烧杯中。4、取滤液4ml在1 000r/min下离心4min；弃去沉淀。5、将上清液在3000r/min下离心3min.弃去上清液，将沉淀即为叶绿体（混有部分细胞核）。6、将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮。 实验结果观察实验结果观察一、用胶头滴管取叶绿体悬液分别在载玻片上滴一滴，加盖玻片后即可在普通光学显微镜下观察叶绿体的形态 。二、在载玻片上滴一滴0.35mol/LNaCL溶液，用手术刀刮取一定的叶肉，将叶肉置于NaCL液滴中。然后用盖玻片盖紧，进行观察。 实验作业实验作业 菠菜叶手切片在光学显微镜下能看见到几种细胞？