12基因工程的基本操作程序.pptx

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1、根据基因工程的有关知识,回答下列问题:(1)限制性限制性核酸核酸内切内切酶切割酶切割DNA分子后产生的片段分子后产生的片段,其末端其末端类型类型有有_和和_。(2)质粒运载体用质粒运载体用EcoR切割后产生的片段如下切割后产生的片段如下:AATTCGGCTTAA为使运载体与目的基因相连为使运载体与目的基因相连,含有目的基因的含有目的基因的DNA除可用除可用EcoR切割外切割外,还可用另一种限制性内切酶切割还可用另一种限制性内切酶切割,该酶必须该酶必须具有的特点具有的特点是是_。(3)按其来源不同按其来源不同,基因工程中所使用的基因工程中所使用的DNA连接酶有两类连接酶有两类,即即_DNA连接酶

2、连接酶和和_DNA连接酶。连接酶。(4)基因工程中除质粒外基因工程中除质粒外, _ 和和_也也可作为运可作为运载体载体。（5）作为载体需具备的条件）作为载体需具备的条件_。基因工程培育抗虫棉的简要过程：基因工程培育抗虫棉的简要过程：棉花细胞棉花细胞(含抗虫基因含抗虫基因)苏云金芽苏云金芽孢杆菌孢杆菌普通棉花普通棉花(无抗虫特性无抗虫特性)棉花植株棉花植株(有抗虫特性有抗虫特性)基因工程基本操作的四个步骤基因工程基本操作的四个步骤1 1、目的基因的获取、目的基因的获取2 2、基因表达载体的构建、基因表达载体的构建3 3、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞4 4、目的基因的检测与鉴定、

3、目的基因的检测与鉴定一一、获取获取目的基因（目的基因（ ？）？）1. 目的基因：目的基因：（1）编码蛋白质的基因）编码蛋白质的基因（主要）；（主要）；（2）具有调控作用的因子）具有调控作用的因子2、目的基因的、目的基因的来源来源：（1）从自然界已有的物种中分离；）从自然界已有的物种中分离；（2）人工合成）人工合成3、获取目的基因的、获取目的基因的方法方法：（1）从基因文库中获取；）从基因文库中获取；（2）PCR技术扩增；技术扩增；（3）化学方法人工合成）化学方法人工合成真核细胞真核细胞的基因结构的基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点内

4、含子内含子 外显子外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子启动子终止子终止子编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 内含子：内含子： 外显子：外显子： 真真核核细细胞胞的的 基基因因结结构构编码区编码区非编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用的核苷酸序列，：有调控作用的核苷酸序列， 包括位于编码区上游的包括位于编码区上游的RNARNA 聚合酶结合位点。聚合酶结合位点。非编码序列：非编码序列： 包括

5、非编码区和内含子包括非编码区和内含子结构基因外显子内含子转录、加工修饰mRNA原核细胞原核细胞的基因结构的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 与与RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点启动子启动子终止子终止子能能转录相应的信使转录相应的信使RNARNA，能编码合成蛋白质能编码合成蛋白质 非非编编码码区区原核细胞的原核细胞的 基因结构基因结构调控调控遗传信息表达遗传信息表达的的 核苷酸序列核苷酸序列编编码码区区编码区上游编码区下游RNA聚合酶结合位点RNA聚合酶结合位点编码蛋白质调控调控原核细胞原核细胞真核细胞真核细胞 cDNA:以目

6、的基因转录成的以目的基因转录成的信使信使RNA为模为模板，再板，再反转录酶反转录酶的催化下反转录成互补的的催化下反转录成互补的单链单链DNA，然后在，然后在DNA聚合酶聚合酶的作用下合的作用下合成双链成双链DNA，即，即cDNA，从而获得所需的，从而获得所需的基因。基因。思考思考：cDNA与与DNA在结构上的区别？在结构上的区别？1. 从基因文库中获取目的基因从基因文库中获取目的基因基因文库：基因文库：将将含有含有某种生物不同基因某种生物不同基因的许多的许多DNA片断片断，导导入到入到中，各个受体菌中，各个受体菌分别含有这种生物分别含有这种生物的不同的不同基因。基因。思考：思考：获取某种生物发

7、育的某个时期的所表达的基因？获取某种生物发育的某个时期的所表达的基因？ 或者是获取某个器官或组织中特异性表达的基因？或者是获取某个器官或组织中特异性表达的基因？ 启动子终止子起始密码子终止密码子本质作用基因组文库基因组文库cDNA文库文库基因组文库基因组文库和和cDNA文库文库的的比较：比较：外显子部分片段，外显子部分片段，无内含子，启动无内含子，启动子，终止子等子，终止子等小小大大部分基因可以部分基因可以某种生物某种生物的的部分部分基因基因某种生物某种生物的的全部全部基因基因可以可以完整基因，含有完整基因，含有内含子，启动子，内含子，启动子，终止子等终止子等一种生物一种生物可以可以有多种有多

8、种一种生物一种一种生物一种思考思考：如何如何从基因文库中得到所需要的基因？从基因文库中得到所需要的基因？依据：目的基因的有关信息。依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列；如：根据基因的核苷酸序列； 基因的功能；基因的功能； 基因在染色体上的位置；基因在染色体上的位置； 基因的转录产物基因的转录产物mRNA； 基因翻译产物蛋白质等特性。基因翻译产物蛋白质等特性。注意：注意：基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌，菌中含基因。2、利用、利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因（1)1)概念概念：PCRPCR全称为全称为_，是一项，是一项 在生物在生物_复制复制_的核酸合成技术

9、。的核酸合成技术。 (3) (3)前提前提条件条件：_ _ (2) (2)原理原理：_多聚酶多聚酶链式反应链式反应体外体外特定特定DNADNA片段片段DNADNA复制复制已知的目的基因部分核苷酸已知的目的基因部分核苷酸序列序列(4)(4)反应体系反应体系条件：条件： 模板模板DNADNA； 特异性引物；特异性引物； 酶：酶：耐高温耐高温DNADNA聚合酶聚合酶 原料：原料： 能量：能量： 酶促反应所需离子等酶促反应所需离子等 四种四种脱氧核苷三磷酸脱氧核苷三磷酸变性、退火、延伸三步曲变性：加热至9095双链DNA解链成为单链DNA退火：冷却至5560部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配

10、对和结合延伸：加热至7075以目的基因为模板，合成互补的新DNA链变性变性退火退火延伸延伸(5)过程：PCR的基本反应的基本反应步骤：步骤：变性变性90-95C延伸延伸70-75C退火退火55-60C2、利用、利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因模板DNA95PCR反应条件PCR过程PCR的特点50引物1引物2DNA引物PCR反应条件PCR过程PCR的特点引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶PCR反应条件PCR过程PCR的特点72第1轮结束第2轮开始PCR反应条件PCR过程PCR的特点955072TaqTaqTaqTaqPCR反应条件PCR过程PCR的特点72第2轮结束PCR技术技

11、术DNA复制复制相相同同点点原则原则碱基互补配对碱基互补配对原料原料四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸条件条件模板、酶模板、酶不不同同点点解旋方式解旋方式DNA在高温下变性解旋在高温下变性解旋解旋酶催化解旋酶催化场所场所体外复制体外复制主要在细胞核内主要在细胞核内酶酶热稳定的热稳定的DNA聚合酶聚合酶(Taq酶酶)细胞内含有的细胞内含有的DNA聚合酶聚合酶结果结果在短时间内形成大量的在短时间内形成大量的DNA片段片段形成整个形成整个DNA分分子子PCR技术与技术与DNA复制的复制的比较：比较：3、化学方法人工合成目的、化学方法人工合成目的基因基因1、反转录法：利用mRNA合成目的基因2、通过DNA合

12、成仪用化学方法人工合成适用条件： 基因基因较小，核苷酸序列已知，可以利用较小，核苷酸序列已知，可以利用DNA合成合成仪直接人工仪直接人工合成合成提取目的基因的三种方法的应用情况：提取目的基因的三种方法的应用情况：(1)如果不知道目的基因的核苷酸序列，可以通过构建基因文库的方法，即通过用受体菌储存并扩增目的基因后，从基因文库中去获取目的基因。(2)如果知道目的基因的核苷酸序列，而且基因比较小，可以通过DNA合成仪利用化学方法人工合成。(3)如果知道扩增目的基因及两端的核苷酸序列，而且基因又比较大，则可以通过PCR技术扩增目的基因。二、二、基因表达载体基因表达载体的的构建构建（基因工程的核心）基因

13、工程的核心）区别于载体区别于载体 1 1、基因表达基因表达载体载体的作用：的作用：（1 1）使目的基因在受体细胞中稳定）使目的基因在受体细胞中稳定存在，存在， 并并可以遗传给下一代；可以遗传给下一代；（2 2）使目的基因能够表达和发挥作用。）使目的基因能够表达和发挥作用。 科学家在培育抗虫棉时，经历了多次失败，才获得成功。 起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。 然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入

14、棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。 资资 料料:思考：思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 不可以。 因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。 （1 1） 生物之间进行基因交流，只有使用生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自受体生物自身基因身基因的启动子才能比较有利于基因的表达；的启动子才能比较有利于基因的表达；（2 2） 通过通过cDNAcDNA文库文库获得的目的基因没有启动子，只获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录；将编码序列导入受体生物中无法转录；（3 3） 目的基

15、因是否导入受体生物中需要有筛选标记；目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记；（4 4） 为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如些其他调控元件，如增强子增强子（增强基因启动子工作效率（增强基因启动子工作效率的顺式作用序列，能够在相对于启动子的任何方向和任的顺式作用序列，能够在相对于启动子的任何方向和任何位置何位置( (上游或下游上游或下游) )上都发挥作用。）等；上都发挥作用。）等；（5 5） 有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做什么部

16、位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋白成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋白基因等。基因等。2 2、基因表达、基因表达载体的组成：载体的组成：a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因3 3、基因表达载体构建过程：（以质粒为例）、基因表达载体构建过程：（以质粒为例）质粒质粒DNADNA分子分子限制酶限制酶处理处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNADNA连接酶连接酶重组重组DNADNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）图为重组质粒形成示意图。将此重组质粒导入图为重组质粒形成示意图。将

17、此重组质粒导入大肠杆菌，然后将大肠杆菌放在四种培养基中培大肠杆菌，然后将大肠杆菌放在四种培养基中培养：养：a-无抗生素的培养基，无抗生素的培养基，b-含四环素的培养基，含四环素的培养基，c-含氨苄青霉素的培养基，含氨苄青霉素的培养基，d-含四环素和氨苄青含四环素和氨苄青霉素的培养基。含重组质粒的大肠杆菌能生长的霉素的培养基。含重组质粒的大肠杆菌能生长的是是 Aa Ba和c Ca和b Db和c下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：(1)一个

18、图一个图1所示的质粒分子所示的质粒分子经经Sma切割前后，切割前后，分别分别含有含有_个游离的磷酸基团。个游离的磷酸基团。(2)若对图中质粒进行改造若对图中质粒进行改造，插入插入的的Sma酶切位点越多酶切位点越多，质粒质粒的热稳定性越的热稳定性越_。(3)用图中的质粒和外源用图中的质粒和外源DNA构建构建重组质粒，不能使用重组质粒，不能使用Sma 切割，切割，原原因是因是_。 (4)与只使用与只使用EcoR相比较，使用相比较，使用BamH和和Hind 两种限制酶同两种限制酶同时处理质粒、外源时处理质粒、外源DNA的优点在于的优点在于可以可以防止防止 _。(5)为了获取重组质粒，将切割后的为了获

19、取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入质粒与目的基因片段混合，并加入_酶。酶。(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为为了了_(7)为了从为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，的大肠杆菌突变体，然后然后在在_的的培养基中培养培养基中培养，以完成，以完成目的基因表达的初步检测。目的基因表达的初步检测。 (1)0、2(2)高高(3)Sma会破坏质粒的抗会破坏质粒的抗性基因、外源性基因、外源DNA中的目的基因中的目的基因(4)质粒和质粒和

20、含目的基因的外源含目的基因的外源DNA片段自身环化片段自身环化(5)DNA连接连接(6)鉴别和筛选含有目的基因的鉴别和筛选含有目的基因的细胞细胞(7)蔗糖为唯一含碳营养物质蔗糖为唯一含碳营养物质三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：常用的受体细胞：大肠杆菌大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和和动植物动植物细胞等。细胞等。转化转化： 目的基因进入目的基因进入_内，并且在内，并且在 受体细胞内维持受体细胞内维持_和和_的的过程。过程。受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达1.将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法农杆菌转化

21、法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法（1 1）农杆菌转化法）农杆菌转化法特点：特点： 易感染易感染双子叶植物和裸双子叶植物和裸子植物，子植物，对大多数单子叶植对大多数单子叶植物没有感染物没有感染能力。能力。原理：原理： TiTi质粒上的质粒上的T-DNAT-DNA可以转移到受体细胞，可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的并整合到受体细胞染色体的DNADNA上。上。转化过程转化过程: :受体细胞：受体细胞： 受体受体细胞细胞受精卵受精卵体细胞体细胞植物组织培养植物组织培养个体（转基因植物）个体（转基因植物）个体（转基因植物）个体（转基因植物）知识点总结：知识点总结：(1)完成基因表达

22、载体的构建，需要限制性核酸完成基因表达载体的构建，需要限制性核酸内切酶和内切酶和DNA连接酶。连接酶。(2)基因表达基因表达载体载体(重组质粒重组质粒)导入农杆菌的常用导入农杆菌的常用方法是用方法是用Ca2处理法。处理法。(3)目的基因能够在植株细胞内稳定维持和表达目的基因能够在植株细胞内稳定维持和表达其遗传特性的关键是目的基因是否插入到受体其遗传特性的关键是目的基因是否插入到受体细胞染色体细胞染色体DNA上。上。(4)由棉株细胞形成抗虫棉需要植物组织培养技由棉株细胞形成抗虫棉需要植物组织培养技术。术。 基因枪法又称微基因枪法又称微弹轰击法，是利用压弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，缩气体产

23、生的动力，将包裹在金属颗粒表将包裹在金属颗粒表面的面的表达载体表达载体DNADNA打打入受体细胞中，使目入受体细胞中，使目的基因与其整合并表的基因与其整合并表达的方法。达的方法。（2 2）基因枪法）基因枪法（3 3）花粉通道法）花粉通道法2.将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞 显微注射法显微注射法操作过程操作过程: :提纯含目的提纯含目的基因的表达载体基因的表达载体取卵取卵显微注射显微注射含目的基因的受精卵含目的基因的受精卵子宫或输卵管子宫或输卵管早期胚胎早期胚胎早期胚胎培养早期胚胎培养胚胎移植胚胎移植转基因动物转基因动物发育发育受体细胞：受体细胞：受精卵受精卵早期胚胎培养早期胚胎培

24、养胚胎移植胚胎移植个体个体 常用常用法法：CaCa2+2+处理法（感受态细胞法）处理法（感受态细胞法） 微生物微生物作受体细胞原因：作受体细胞原因：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少过程：过程：CaCa2+2+处理大处理大肠杆菌肠杆菌感受态感受态细胞细胞基因表达基因表达载体载体与感与感受态细胞受态细胞混合混合感受态感受态细胞吸细胞吸收收DNADNA3.将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞 利用利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛大肠杆菌可以生产出人的胰岛素。若要生产人的糖蛋白，可以用素。若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？大肠杆菌吗？思考：思考：类型类

25、型 步骤步骤检测内容检测内容方法方法结果显示结果显示分子分子检测检测导入导入检测检测目的基因是否目的基因是否导入受体细胞导入受体细胞DNA分子杂交技术分子杂交技术(DNA和和DNA之间之间)是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带表达表达检测检测目的基因是否目的基因是否转录出转录出mRNA分子杂交技术分子杂交技术(DNA和和mRNA之间之间)是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带目的基因是否目的基因是否翻译出蛋白质翻译出蛋白质蛋白质分子杂交蛋白质分子杂交(抗抗原和抗体之间原和抗体之间)是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带个体生物个体生物学水平的学水平的鉴定鉴定确定是否具确定是否具有抗性及

26、抗性有抗性及抗性程度程度基因工程产基因工程产品与天然产品品与天然产品的活性是否相的活性是否相同同抗虫或抗病的接抗虫或抗病的接种实验种实验基因工程产品与基因工程产品与天然产品活性的比天然产品活性的比较较是否赋予了是否赋予了预期抗性或预期抗性或蛋白质活性蛋白质活性1 1、导导入检测：检测入检测：检测转基因生物染色体的转基因生物染色体的DNADNA上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因 首先取出转基因生物的基因组首先取出转基因生物的基因组DNADNA；（1 1）方法）方法: :DNADNA分子杂交分子杂交（2 2）过程）过程: : 将含目的基因的将含目的基因的DNADNA片段用放射性同位素等片段用

27、放射性同位素等作标记作标记, ,以此做以此做探针探针； 使探针和转基因生物的基因组杂交使探针和转基因生物的基因组杂交, ,若显示若显示出杂交带出杂交带, ,表明染色体已插入染色体表明染色体已插入染色体DNADNA中。中。（一（一）分子水平检测）分子水平检测DNA附着在膜上硝酸纤维素膜加探针基因探针变性DNA分子杂交abcd（1 1）特）特点点：是：是一段带有检测标记一段带有检测标记，与，与目的基目的基因互补因互补的单链的单链DNADNA片段片段。 （2 2）原理）原理：碱基互补配对：碱基互补配对基因探针：基因探针：2 2、表达检测（之一）：检测、表达检测（之一）：检测目的基因是否转录目的基因是

28、否转录出出mRNAmRNA3 3、表达检测（之二）：检测、表达检测（之二）：检测目的基因是否翻译目的基因是否翻译成蛋白质成蛋白质方法方法: :分分 子子 杂杂 交交方法方法: : 抗原抗原- -抗体杂交抗体杂交过程过程: :用上述探针和转基因生物的用上述探针和转基因生物的mRNAmRNA杂交杂交, ,若出现杂交带若出现杂交带, ,表明目的基因转录出了表明目的基因转录出了mRNAmRNA。提取苏云金杆菌Bt毒素蛋白将Bt毒蛋白注射小鼠体内从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体抗体蛋白质 出现杂交带脱分化组织培养抗原抗原- -抗体杂交抗体杂交没有抗虫基因没有抗虫基因的棉植株的棉植株有抗虫基因的有

29、抗虫基因的棉植株棉植株棉铃虫棉铃虫虫没有死虫没有死虫被杀死虫被杀死目的基目的基因表达因表达（二（二）个体生物学水平个体生物学水平鉴定鉴定抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等类型类型步骤步骤检测内容检测内容方法方法结果显示结果显示分子分子检测检测导入导入检测检测目的基因是否目的基因是否导入受体细胞导入受体细胞DNA分子杂交技术分子杂交技术(DNA和和DNA之间之间)是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带表达表达检测检测目的基因是否目的基因是否转录出转录出mRNA分子杂交技术分子杂交技术(DNA和和mRNA之间之间)是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带目的基因是否目的

30、基因是否翻译出蛋白质翻译出蛋白质蛋白质分子杂交蛋白质分子杂交(抗抗原和抗体之间原和抗体之间)是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带个体生物个体生物学水平的学水平的鉴定鉴定确定是否具确定是否具有抗性及抗性有抗性及抗性程度程度基因工程产基因工程产品与天然产品品与天然产品的活性是否相的活性是否相同同抗虫或抗病的接抗虫或抗病的接种实验种实验基因工程产品与基因工程产品与天然产品活性的比天然产品活性的比较较是否赋予了是否赋予了预期抗性或预期抗性或蛋白质活性蛋白质活性基因工程是在基因工程是在DNADNA分子水平上进行设计施工的。分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配在基因操作的

31、基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是对的步骤是 C C A A、获取获取目的目的基因基因 B B、目的基因与运载体结合、目的基因与运载体结合 C C、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞 D D、目的基因的检测和表达、目的基因的检测和表达 采用采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的作法正确的是（）的基因的作法正确的是（）A.A.将毒素蛋白注射到受精卵中将毒素蛋白注射到受精卵中B.B.将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNADNA序列，与质粒重组，导序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织入细菌，用该细菌感染棉的体细胞

32、，再进行组织培养培养C.C.将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNADNA序列，与质粒重组，注序列，与质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵射到棉的子房并进入受精卵D.D.将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNADNA序列，注射到棉受精卵序列，注射到棉受精卵中中下列实践活动包含基因工程技术的是下列实践活动包含基因工程技术的是( () )A A水稻水稻F1F1花药经培养和染色体加倍，获得花药经培养和染色体加倍，获得基因型纯合新品种基因型纯合新品种B B抗虫小麦与矮秆小麦杂交，通过基因重抗虫小麦与矮秆小麦杂交，通过基因重组获得抗虫矮秆小麦组获得抗虫矮秆小麦C C将含抗病基因的重组将含抗病基因的重组DNA

33、DNA导入玉米细胞，导入玉米细胞，经组织培养获得抗病植株经组织培养获得抗病植株DD用射线照射大豆使其基因结构发生改变，用射线照射大豆使其基因结构发生改变，获得种子性状发生变异的大豆获得种子性状发生变异的大豆( (多选多选) )下列关于限制性核酸内切酶的说法中，下列关于限制性核酸内切酶的说法中，错误的是错误的是( () )A A限制性核酸内切酶被称为限制性核酸内切酶被称为“分子手术刀分子手术刀”B B限制性核酸内切酶跟其他的酶一样，具限制性核酸内切酶跟其他的酶一样，具有专一性有专一性C C一种限制性核酸内切酶可切割多种一种限制性核酸内切酶可切割多种DNADNA分子片段分子片段DD限制性核酸内切酶

34、能在特定部位的两个限制性核酸内切酶能在特定部位的两个核苷酸碱基之间切断氢键核苷酸碱基之间切断氢键凝乳酶凝乳酶能凝固牛奶成奶酪，传统上凝乳酶只能能凝固牛奶成奶酪，传统上凝乳酶只能从小牛的胃中提取，价格昂贵。从小牛的胃中提取，价格昂贵。1990年，美国年，美国辉瑞公司生产出了食品产业所需的第一个基因辉瑞公司生产出了食品产业所需的第一个基因工程产品工程产品CHYMAX牌凝乳酶，其化学组成牌凝乳酶，其化学组成与从小牛体内提取的完全相同，但其更加物美与从小牛体内提取的完全相同，但其更加物美价廉。生产过程如下图，据图回答问题：价廉。生产过程如下图，据图回答问题： (1)过程中从小牛体内提过程中从小牛体内提

35、取的凝乳酶基因通常需要取的凝乳酶基因通常需要通过通过_技术进行扩技术进行扩增，该技术的增，该技术的原理原理_。(2)基因工程的操作程序主基因工程的操作程序主要包括四个步骤，其核心要包括四个步骤，其核心是图中过程是图中过程_(填填序序号并写明过程名称号并写明过程名称)，在该，在该过程过程中使用中使用的工具的工具酶是酶是_。(3)过程中理想的受体细过程中理想的受体细胞是大肠杆菌，该类生物胞是大肠杆菌，该类生物具有的特点是具有的特点是_，要想把重组质粒导入大肠要想把重组质粒导入大肠杆菌，首先必须用杆菌，首先必须用_处理大肠杆菌，使其转化处理大肠杆菌，使其转化为为_细胞，然后将细胞，然后将重组质粒和大

36、肠杆菌在缓重组质粒和大肠杆菌在缓冲液中混合培养完成转化冲液中混合培养完成转化过程。过程。(4)过程将小牛凝乳酶基过程将小牛凝乳酶基因转入大肠杆菌后，能够因转入大肠杆菌后，能够准确表达的主要原因是准确表达的主要原因是_。(1)PCR(聚合酶链式反应)DNA双链复制(2)限制性核酸内切酶(或限制酶)和DNA连接酶(3)繁殖快、代谢旺盛、单细胞、遗传物质相对较少(至少答二点)Ca2感受态(4)所有生物共用一套密码子普通稻米不含维生素A，因此在以稻米为主食的地区，人们往往由于缺乏维生素A而出现健康问题。有人将相关的基因导入水稻体内使其生产的稻米含有丰富的-胡萝卜素（在人体内可转化为维生素A），因其颜色金黄而被称为“金米”。请回答：培养“金米”所采用的技术是 。若将目的基因导入水稻的受体细胞，可通过 技术培养成幼苗，这一技术的理论基础是 。（3）检测目的基因是否插入受体细胞的染色体DNA上，常用的检测方法是；检测目的基因是否成功表达产生相关的蛋白质，常用的检测方法是_。从理论上讲，能否将控制合成-胡萝卜素的相关的基因导入动物细胞内并使其表达？为什么？。(1)基因工程(2)构建基因表达载体限制性核酸内切酶和DNA连接酶(3)植物组织培养细胞的全能性(4)能。因为动、植物细胞中的DNA分子都由四种脱氧核苷酸组成，且均为双螺旋结构；动、植物的基因表达共用一套密码子。