]病毒学总论解读.ppt

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1、 病毒病毒(virus)的发现的发现1892年发现第一个病毒即烟草花叶病毒年发现第一个病毒即烟草花叶病毒1898年发现动物口蹄疫病毒年发现动物口蹄疫病毒首先被证实对人类有致病性的是黄热病毒（首先被证实对人类有致病性的是黄热病毒（1901年发现）年发现）病毒的特点：病毒的特点：1、体积微小，必须用电子显微镜观察；、体积微小，必须用电子显微镜观察；2、只有一种遗传物质；、只有一种遗传物质；3、必须在活细胞内显示生命活性；、必须在活细胞内显示生命活性；4、无完整的细胞结构。、无完整的细胞结构。病毒学病毒学: 即研究病毒的本质、病毒与宿主相即研究病毒的本质、病毒与宿主相互作用和规律的生物学科。互作用和

2、规律的生物学科。医学病毒学医学病毒学: 即研究人类病毒的本质及其与人类即研究人类病毒的本质及其与人类疾病关系的一门学科。疾病关系的一门学科。1、临床约、临床约70-80%传染病是由病毒引起的传染病是由病毒引起的;2、病毒性疾病对人类健康危害极大、病毒性疾病对人类健康危害极大;3、近、近20年来，新病毒不断被发现，由此引年来，新病毒不断被发现，由此引发的病毒性疾病正越来越多的被人们所关注发的病毒性疾病正越来越多的被人们所关注.第一节第一节 病毒的形态结构与分类病毒的形态结构与分类病毒体（病毒体（virion)完整的具有传染完整的具有传染性的病毒颗粒，有典型的形态和传染性的病毒颗粒，有典型的形态和

3、传染性。性。1 1、测量单位、测量单位纳米（纳米（nmnm） 3 3、观察工具、观察工具电子显微镜电子显微镜2 2、大多数病毒的直径小于、大多数病毒的直径小于150 nm150 nm一一 病毒的大小与形态病毒的大小与形态 葡萄球菌葡萄球菌1000nm立克次体立克次体450nm衣原体衣原体390nm390nm痘苗病毒痘苗病毒300250nm250nm烟草花叶病病毒烟草花叶病病毒100nmnm流感病毒流感病毒40nmnm乙脑病毒乙脑病毒30nmnm脊髓灰质炎病毒脊髓灰质炎病毒70nmnm腺病毒腺病毒6595nm95nm噬菌体噬菌体病毒的形态：病毒的形态： 多为球型多为球型，还有杆状、子弹状、砖块状

4、及蝌蚪，还有杆状、子弹状、砖块状及蝌蚪状等。状等。1 1、病毒核酸、病毒核酸 (1) (1)化学成分为化学成分为DNADNA或或RNARNA，据此将病毒分，据此将病毒分DNADNA病病毒和毒和RNARNA病毒。病毒。 (2)(2)核酸可线型或环型、分单股或双股，一般核酸可线型或环型、分单股或双股，一般DNADNA病毒为双股，病毒为双股，RNARNA病毒为单股；大小相差悬殊。病毒为单股；大小相差悬殊。 (3)(3)携带病毒的全部遗传信息，是病毒的基因携带病毒的全部遗传信息，是病毒的基因组，控制病毒的生殖、遗传和变异。组，控制病毒的生殖、遗传和变异。2、病毒衣壳：由多肽构成的壳微粒组成，有三种排列

5、方式：螺旋对称立体对称复合对称3、病毒包膜包膜子粒、包膜子粒、 刺突刺突包膜（包膜（envelopeenvelope）: :包绕在核衣壳外，上常有刺突（包绕在核衣壳外，上常有刺突（spikespike），），是病毒的表面抗原。是病毒的表面抗原。包膜包膜4 4、病毒的蛋白质、病毒的蛋白质结构蛋白：是组成病毒体的蛋白成分，可离心沉结构蛋白：是组成病毒体的蛋白成分，可离心沉淀后分离纯化。淀后分离纯化。 （1 1）衣壳蛋白：）衣壳蛋白： （2 2）基质蛋白：）基质蛋白： （3 3）包膜蛋白：）包膜蛋白：非结构蛋白：可存在于病毒体内也可仅存在于宿非结构蛋白：可存在于病毒体内也可仅存在于宿主细胞内。主细胞

6、内。 （1 1）病毒内所有的重要的酶类；）病毒内所有的重要的酶类； （2 2）抑制宿主细胞生物合成或抑制病毒抗）抑制宿主细胞生物合成或抑制病毒抗原经原经MHCMHC递呈的蛋白；递呈的蛋白； （3 3）转化宿主细胞的作用；）转化宿主细胞的作用； （4 4）抗细胞因子或抗细胞凋亡作用。）抗细胞因子或抗细胞凋亡作用。三、病毒的分类三、病毒的分类分类原则：分类原则：1、核酸类型和结构；、核酸类型和结构； 2、病毒体的形状和大小；、病毒体的形状和大小； 3、病毒体的形态结构；、病毒体的形态结构； 4、对脂溶剂的敏感性。、对脂溶剂的敏感性。1、DNA病毒类；病毒类；2、RNA病毒类；病毒类； 3、DNA和

7、和RNA逆转录病毒类。逆转录病毒类。三、其他：三、其他：1、卫星病毒、卫星病毒(satellites):基因组缺陷的病毒，基因组缺陷的病毒，一类为可编码自已衣壳蛋白；另一为一类为可编码自已衣壳蛋白；另一为RNA分子，需要分子，需要辅助病毒的衣壳蛋白。辅助病毒的衣壳蛋白。500-2000核苷酸，引起植物病变核苷酸，引起植物病变2、类病毒、类病毒(viroids):植物病毒，单链杆状植物病毒，单链杆状RNA有二级结构，有二级结构，200-400核苷酸，核苷酸，无包膜，不含蛋白质无包膜，不含蛋白质3、朊粒、朊粒(prion):3.0104的蛋白质，引起疯牛病的蛋白质，引起疯牛病第二节第二节 病毒的增

8、殖病毒的增殖 遗传与变异遗传与变异一、病毒的培养：一、病毒的培养：（一）动物接种（一）动物接种 1 1、不同的病毒，易感动物不同，常用、不同的病毒，易感动物不同，常用动物有：小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴等；动物有：小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴等； 2 2、接种的途径也有多种，可：皮下、接种的途径也有多种，可：皮下、皮内、脑内、腹腔、静脉等接种；皮内、脑内、腹腔、静脉等接种； 3 3、病毒、病毒动物动物动物出现感染症状，动物出现感染症状，据症状鉴定病毒或取病变组织进一步检查。据症状鉴定病毒或取病变组织进一步检查。 （二）鸡胚培养（二）鸡胚培养1 1、接种途径有：、接种途径有：尿囊腔尿囊腔、羊膜腔羊膜腔、

9、卵黄囊卵黄囊、绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜2 2、培养数天后，观察鸡胚情况或取培养物进一步鉴定、培养数天后，观察鸡胚情况或取培养物进一步鉴定尿囊腔接种羊膜腔接种尿尿囊囊腔腔羊羊膜膜腔腔（三）组织培养（三）组织培养（最常用细胞培养）（最常用细胞培养） 1 1、优点：、优点： （1 1）便于纯化病毒；）便于纯化病毒； （2 2）可直接观察细胞变化（包括细胞出现病）可直接观察细胞变化（包括细胞出现病变或转化）；变或转化）； （3 3）可对病毒的复制进行基础性研究；）可对病毒的复制进行基础性研究； （4 4）可进行空斑纯化病毒克隆；）可进行空斑纯化病毒克隆； （5 5）可滴定病毒含量。）可滴定病毒含量。 2、

10、细胞种类：、细胞种类： （1）原代细胞：）原代细胞： 以无菌手续采动物等的组织切碎洗净后用胰蛋以无菌手续采动物等的组织切碎洗净后用胰蛋白酶消化得分散的单个细胞，加培养液在细胞瓶内白酶消化得分散的单个细胞，加培养液在细胞瓶内培养所获得的单层贴壁细胞为培养所获得的单层贴壁细胞为原代细胞原代细胞； 原代细胞消化、重新分装并培养所得细胞为原代细胞消化、重新分装并培养所得细胞为次次代细胞代细胞。 特点：对病毒易感性高，主要作为自标本中分特点：对病毒易感性高，主要作为自标本中分离的工具。离的工具。 （3）二倍体细胞：）二倍体细胞： 在体外分裂在体外分裂50-100代后仍保持其二倍染色代后仍保持其二倍染色体

11、数目的单型细胞，常用人胚肺二倍体成纤维体数目的单型细胞，常用人胚肺二倍体成纤维细胞。细胞。 （2）传代细胞系：）传代细胞系： 能在体外持续增殖传代的细胞系，多由癌细能在体外持续增殖传代的细胞系，多由癌细胞或二倍体细胞突变而成。胞或二倍体细胞突变而成。 3、病毒在细胞内增殖的检查与鉴定、病毒在细胞内增殖的检查与鉴定（1）观察细胞变化）观察细胞变化(cytopathic effect,CPE)：CPE病毒感染细胞后引起的细胞病变。病毒感染细胞后引起的细胞病变。正常成纤维细胞 （2）病毒的定量测定：）病毒的定量测定：TCID50(50%tissue culture infective dose)：

12、将病毒进行系列稀释后行细胞培养，观察能将病毒进行系列稀释后行细胞培养，观察能使半数细胞培养孔或试管内的细胞发生细胞病变使半数细胞培养孔或试管内的细胞发生细胞病变（CPE）时的病毒量，即）时的病毒量，即TCID50。病毒感染细胞后形成嗜酸性或嗜碱性包涵体病毒感染细胞后形成嗜酸性或嗜碱性包涵体 狂犬病毒感染后在脑细胞的胞浆内出现嗜酸性圆形或椭圆形的包涵体，可供辅助诊断.（一）病毒的增殖过程（一）病毒的增殖过程 增殖方式增殖方式自我复制自我复制(selfreplication)(selfreplication) 复制周期：复制周期：1 1、吸附和穿入、吸附和穿入(absorption and pen

13、etration)(absorption and penetration)2 2、脱壳、脱壳(uncoating)(uncoating)3 3、生物合成、生物合成(biosynthesis)(biosynthesis)4 4、装配与释放、装配与释放(assembly and release)(assembly and release)（一）吸附和穿入（一）吸附和穿入(absorption and penetration)(absorption and penetration)吸附：病毒的表面配体位点与细胞表面特异性受体结合；吸附：病毒的表面配体位点与细胞表面特异性受体结合；穿入：病毒进入宿主细

14、胞。穿入：病毒进入宿主细胞。（三）生物合成（三）生物合成(biosynthesis)(biosynthesis)：早早 期：期： 基因组在细胞内合成非结构蛋白（病毒复基因组在细胞内合成非结构蛋白（病毒复制酶及抑制细胞正常生物合成的抑制酶）。制酶及抑制细胞正常生物合成的抑制酶）。晚晚 期：期： 根据基因组的指令在细胞内复制病毒核酸根据基因组的指令在细胞内复制病毒核酸合成结构蛋白和非结构蛋白合成结构蛋白和非结构蛋白隐蔽期隐蔽期 根据基因组转录根据基因组转录mRNAmRNA及转译蛋白质的不同，及转译蛋白质的不同，生物合成可分六大类：生物合成可分六大类：DNADNA病毒病毒双链双链DNADNA病毒（多

15、数）病毒（多数）单链单链DNADNA病毒（很少）病毒（很少）RNARNA病毒病毒单正链单正链RNARNA病毒病毒单负链单负链RNARNA病毒病毒双链双链RNARNA病毒病毒逆转录病毒逆转录病毒1 1、DNADNA病毒（双链）：病毒（双链）： 细胞核内合成细胞核内合成DNADNA，细胞质内合成病毒蛋白。，细胞质内合成病毒蛋白。早期：早期：病毒病毒DNADNA依赖依赖DNA的的RNA多聚酶多聚酶早期早期mRNAmRNA转转 译译早期蛋白早期蛋白DNADNA多聚酶多聚酶脱氧胸腺嘧啶激酶脱氧胸腺嘧啶激酶调控病毒基因组转录的酶调控病毒基因组转录的酶抑制宿主细胞生物合成的酶抑制宿主细胞生物合成的酶药物作用

16、的靶药物作用的靶晚期：晚期：解链解链正链正链DNA负链负链DNADNADNA多聚酶多聚酶子代子代DNA转录转录晚期晚期mRNAmRNA晚期蛋白晚期蛋白病毒衣壳蛋白病毒衣壳蛋白及其他结构蛋白及其他结构蛋白2 2、RNARNA病毒（单链）：病毒（单链）： 多数在细胞质内合成子代多数在细胞质内合成子代RNARNA及病毒蛋白。及病毒蛋白。（1 1）正单链）正单链RNARNA病毒（病毒（有有mRNAmRNA功能功能）：）：正单链正单链RNARNA复制复制子代子代RNA结构蛋白（结构蛋白（衣壳蛋白等衣壳蛋白等）非结构蛋白非结构蛋白（依赖依赖RNA的的RNA多聚酶多聚酶） 双链双链RNARNA（复制中间型）

17、（复制中间型）药物作用的靶药物作用的靶（2 2）负单链）负单链RNARNA病毒病毒（有依赖有依赖RNA的的RNA多聚酶多聚酶）：负单链负单链RNARNA依赖依赖RNA的的RNA多聚酶多聚酶正单链正单链RNARNA（有（有mRNAmRNA功能）功能）子代子代RNA 结构蛋白结构蛋白（衣壳蛋白等衣壳蛋白等）双链双链RNARNA（复制中间型）（复制中间型）药物作用的靶药物作用的靶解链解链（3 3）逆转录病毒）逆转录病毒（有逆转录酶，即依赖有逆转录酶，即依赖RNA的的DNA多聚酶多聚酶）：单链单链RNARNA逆转录酶逆转录酶RNARNADNADNA（复制中间型）（复制中间型）进入细胞核进入细胞核双链双

18、链DNADNA整合（整合（前病毒前病毒）子代病毒子代病毒RNARNA病毒病毒mRNAmRNA病毒蛋白质病毒蛋白质DNADNA肿瘤发生肿瘤发生药物作用的靶药物作用的靶（四）装配与释放（四）装配与释放(assembly and release)(assembly and release)装配装配细胞核内细胞核内细胞质内细胞质内核膜上核膜上胞质膜上胞质膜上释放释放 裂解细胞释放裂解细胞释放（无包膜病毒无包膜病毒） 出芽释放出芽释放（有包膜病毒有包膜病毒） 裂解细胞后病毒释放出来裂解细胞后病毒释放出来三、病毒增殖的细胞效应：三、病毒增殖的细胞效应：（一）损伤：（一）损伤： 1、无包膜病毒：阻断或抑制细

19、胞正常代谢，、无包膜病毒：阻断或抑制细胞正常代谢，裂解细胞；裂解细胞； 2、有包膜病毒：影响细胞功能及其正常代、有包膜病毒：影响细胞功能及其正常代谢可致细胞死亡；有些则形成细胞间桥或引起细谢可致细胞死亡；有些则形成细胞间桥或引起细胞融合而致细胞损伤等。胞融合而致细胞损伤等。 2 2、产生原因：、产生原因： （1 1）第一种病毒感染细胞后使细胞表面受体）第一种病毒感染细胞后使细胞表面受体或代谢途径发生变化；或代谢途径发生变化； （2 2）病毒感染细胞后可诱导细胞产生抑制病）病毒感染细胞后可诱导细胞产生抑制病毒复制的一组蛋白（干扰素，毒复制的一组蛋白（干扰素，interferoninterfero

20、n，IFNIFN） （二）干扰现象（二）干扰现象(interference)(interference)： 1 1、概念：两种病毒同时感染同一细胞时，、概念：两种病毒同时感染同一细胞时，可发生一种病毒的增殖抑制另一种病毒复制的现可发生一种病毒的增殖抑制另一种病毒复制的现象，即干扰现象。象，即干扰现象。四、病毒的异常增殖四、病毒的异常增殖 1 1、缺陷干扰颗粒（、缺陷干扰颗粒（defective interfering defective interfering particles,DIPparticles,DIP） 缺陷病毒缺陷病毒（defective virusdefective virus

21、）：）：带有不完整基带有不完整基因组的病毒；因组的病毒；当缺陷病毒不能复制但却能干扰同当缺陷病毒不能复制但却能干扰同种成熟病毒体进入细胞时称种成熟病毒体进入细胞时称DIPDIP；具有两面性具有两面性，一，一则干扰野毒株复制，二则在野毒株完整基因的辅则干扰野毒株复制，二则在野毒株完整基因的辅助下可增殖出完整病毒。助下可增殖出完整病毒。 2 2、顿挫感染（、顿挫感染（abortive infectionabortive infection） 病毒进入宿主细胞后，由于细胞缺乏病毒病毒进入宿主细胞后，由于细胞缺乏病毒复制所需的酶或能量等必要条件，使病毒在其复制所需的酶或能量等必要条件，使病毒在其中不能

22、合成自身成分，或虽合成病毒核酸及蛋中不能合成自身成分，或虽合成病毒核酸及蛋白质，却不能组装成完整的病毒体，是为顿挫白质，却不能组装成完整的病毒体，是为顿挫感染。感染。3、卫星病毒：基因组缺损的病毒卫星病毒：基因组缺损的病毒五、理化因素对病毒的影响五、理化因素对病毒的影响一、物理因素一、物理因素 温度、温度、PH、射线和紫外线、射线和紫外线二、化学因素二、化学因素 脂溶剂、氧化剂、卤素、醇类脂溶剂、氧化剂、卤素、醇类六六 病毒的遗传变异病毒的遗传变异（一）突变株：（一）突变株： 病毒基因改变而发生病毒生物学性状病毒基因改变而发生病毒生物学性状改变，该毒株若能稳定传代即为变异株改变，该毒株若能稳定

23、传代即为变异株（variant).variant).如：温度敏感突变株、如：温度敏感突变株、 宿主范围突变株、宿主范围突变株、 病毒毒力变异株、病毒毒力变异株、 抗原性变异株等。抗原性变异株等。（二）重组与重配：（二）重组与重配： 将有亲缘关系的两种病毒感染同一细胞将有亲缘关系的两种病毒感染同一细胞时，经相互作用后，病毒间交换核酸片段，时，经相互作用后，病毒间交换核酸片段，发生基因重组发生基因重组(recombination)(recombination)。 分节段基因组病毒的基因重组分节段基因组病毒的基因重组(交换基交换基因节段）称因节段）称重配重配(reassortment)(reasso

24、rtment)。发生几率。发生几率较高。较高。ABababABaBAb基因组不分节段的病毒的重组基因组不分节段的病毒的重组基因组分节段的病毒的重配基因组分节段的病毒的重配+（三）遗传变异意义：（三）遗传变异意义：1、变异使病毒逃逸免疫监视、变异使病毒逃逸免疫监视造成疾病流行造成疾病流行2、变异使抗病毒治疗造成困难、变异使抗病毒治疗造成困难 。 3、变异改变了病毒抗原抗体，造成检测的困难。、变异改变了病毒抗原抗体，造成检测的困难。4、变异改变了病毒的毒力、变异改变了病毒的毒力可获得减度疫苗可获得减度疫苗第三节第三节 病毒的感染与免疫病毒的感染与免疫1 1、水平传播、水平传播(horizontal

25、 transmission)(horizontal transmission) 病毒在人群不同个体间的传播，称水平传播。病毒在人群不同个体间的传播，称水平传播。 人群 人群 呼吸道、消化道皮肤粘膜、医源性第一节、病毒的第一节、病毒的传播方式传播方式2 2、垂直传播、垂直传播(vertical transmission)(vertical transmission) 病毒通过病毒通过胎盘胎盘或或产道产道，直接由亲代传给子代的方，直接由亲代传给子代的方式，称垂直传播。式，称垂直传播。 病毒 母体 新生儿 胎盘 显 隐 胎 受 先 流性 性 儿 染 天 产感 感 正 胎 畸 死染 染 常 儿 形 胎

26、经产道经血1、细胞水平的病毒感染、细胞水平的病毒感染2、整体水平的病毒感染、整体水平的病毒感染二二 病毒的致病机制病毒的致病机制一、细胞水平的致病机制一、细胞水平的致病机制（1 1）溶细胞型感染：）溶细胞型感染： 多见于无包膜、杀伤性强的病毒，常引起急性感染。多见于无包膜、杀伤性强的病毒，常引起急性感染。（2 2）改变细胞膜结构）改变细胞膜结构为特异性抗体或为特异性抗体或CTL细胞识别细胞识别抗原抗原（1）细胞膜表面出现嵌合有病毒特异抗原的蛋白成分）细胞膜表面出现嵌合有病毒特异抗原的蛋白成分多细胞核多细胞核（2）数个细胞间胞膜互相融和而形成多核巨细胞）数个细胞间胞膜互相融和而形成多核巨细胞（3

27、）大量子代病毒的释放及机体免疫因子介导细胞死亡）大量子代病毒的释放及机体免疫因子介导细胞死亡（3）包涵体形成）包涵体形成:病毒合成的场所病毒合成的场所病毒颗粒的堆积病毒颗粒的堆积 细胞对病毒感染的反应产物细胞对病毒感染的反应产物（4 4）细胞增生与细胞转化）细胞增生与细胞转化（1 1）细胞增生：）细胞增生：病毒病毒细胞细胞细胞内细胞内DNADNA合成加快合成加快细胞增生细胞增生可能与肿瘤的可能与肿瘤的发生有关发生有关细胞转化细胞转化病毒病毒培养细胞培养细胞细胞转化细胞转化 细胞形态变化细胞形态变化繁殖加快繁殖加快成堆生长成堆生长细胞核细胞核（5 5）病毒基因的整合：）病毒基因的整合：细胞核细胞

28、核细胞核细胞核 1 1、逆转录病毒复制时以、逆转录病毒复制时以DNADNA整合入细胞染色体中；整合入细胞染色体中； 2 2、失常式整合，、失常式整合，DNADNA病毒多见，病毒的病毒多见，病毒的DNADNA偶而以片偶而以片段整合入细胞的染色体段整合入细胞的染色体DNADNA中。中。(6)(6)细胞凋亡：细胞凋亡：诱导因子（如病毒等）诱导因子（如病毒等）细胞细胞死亡基因激活死亡基因激活细胞膜鼓泡细胞膜鼓泡细胞核浓缩细胞核浓缩染色体染色体DNADNA降解降解电泳时有电泳时有阶梯式条带阶梯式条带二、机体水平的致病机制二、机体水平的致病机制(1)病毒对免疫系统的损伤病毒对免疫系统的损伤(2)免疫复合物

29、引起的损伤免疫复合物引起的损伤(3)抗体增强病毒感染作用抗体增强病毒感染作用(4)病毒感染可引起免疫应答的功能紊乱病毒感染可引起免疫应答的功能紊乱三、病毒的感染类型三、病毒的感染类型隐性感染隐性感染 显性感染显性感染 急性感染急性感染 持续性感染持续性感染慢性感染慢性感染 (chronic infection)(chronic infection)潜伏感染潜伏感染 (latent infection)(latent infection) 慢发病毒感染慢发病毒感染 (slow virus infection(slow virus infection四四 抗病毒免疫抗病毒免疫非特异性免疫非特异性免

30、疫特异性免疫特异性免疫( (一一) )非特异性免疫非特异性免疫1 1、遗传因素：、遗传因素：2 2、宿主年龄及生理状态、宿主年龄及生理状态3 3、屏障作用：、屏障作用：4 4、细胞作用：巨噬细胞、细胞作用：巨噬细胞、NKNK细胞细胞等等5 5、病毒抑制物：、病毒抑制物：6 6、炎症反应：、炎症反应：7 7、干扰素（干扰素（IFNIFN）：）：1 1 、干扰素（干扰素（interferon,IFNinterferon,IFN）：）： ( (1)1)概念：是个体出生后，机体受到病概念：是个体出生后，机体受到病毒或其他干扰素诱生剂刺激巨噬细胞、淋毒或其他干扰素诱生剂刺激巨噬细胞、淋巴细胞以及体细胞等

31、多种细胞产生的一种巴细胞以及体细胞等多种细胞产生的一种糖蛋白。糖蛋白。(2)(2)抗病毒特点：抗病毒特点： A. A.广谱抗病毒活性，但只抑制病毒而无杀广谱抗病毒活性，但只抑制病毒而无杀病毒功能；病毒功能； B.B.抗病毒作用有相对的种属特异性，一般抗病毒作用有相对的种属特异性，一般在同种细胞中活性最高；在同种细胞中活性最高； C.C.调节免疫功能；调节免疫功能； D.D.抑制肿瘤细胞的作用抑制肿瘤细胞的作用 -IFN -IFN：人白细胞产生：人白细胞产生 -IFN-IFN：人成纤维细胞产生：人成纤维细胞产生 -IFN-IFN：T T细胞产生细胞产生(3)(3)种类：种类：型型IFNIFN型型

32、IFNIFN抗病毒作用抗病毒作用强于强于型型免疫调节作用强于免疫调节作用强于型，称免疫型，称免疫IFNIFN(4)(4)抗病毒作用机制：需由宿主细胞介导。抗病毒作用机制：需由宿主细胞介导。/干扰素干扰素/干扰素干扰素细胞的细胞的干扰素受体干扰素受体细胞合成细胞合成抗病毒蛋白抗病毒蛋白降解降解mRNAmRNA抑制多肽链延伸抑制多肽链延伸抑制转译抑制转译活化巨噬细胞和活化巨噬细胞和NKNK细胞细胞促进多种细胞促进多种细胞MHC-IMHC-I类抗原表达类抗原表达干扰素干扰素干扰素干扰素细胞的细胞的干扰素受体干扰素受体细胞合成细胞合成抗病毒蛋白抗病毒蛋白降解降解mRNAmRNA抑制多肽链延伸抑制多肽链

33、延伸抑制转译抑制转译促进多种细胞促进多种细胞MHC-IIMHC-II类抗原表达类抗原表达促进巨噬细胞表达促进巨噬细胞表达FcFc受体，协同诱导受体，协同诱导TNFTNF，促进巨噬细胞发挥抗病毒作用。，促进巨噬细胞发挥抗病毒作用。2 2 、 NKNK细胞：细胞：不受不受MHCMHC限制，也不依赖抗体。限制，也不依赖抗体。 IFN IFN等等细胞因子细胞因子NKNK细胞细胞激活激活 识别识别“靶靶”释放穿孔素释放穿孔素释放释放/TNF/TNF，靶细胞溶酶体破坏，靶细胞溶酶体破坏活化靶细胞核酸内切酶，降解自体活化靶细胞核酸内切酶，降解自体DNADNA杀伤肿瘤细胞及表达抗原的自体细胞杀伤肿瘤细胞及表达

34、抗原的自体细胞( (二二) )特异性免疫特异性免疫病毒病毒蛋白蛋白活化活化B细胞细胞活化活化T细胞细胞体液免疫体液免疫细胞免疫细胞免疫抗原的抗原的加工呈递加工呈递1 、单核、单核/ /巨噬细胞巨噬细胞: : 抗原的加工与呈递抗原的加工与呈递内源性抗原内源性抗原蛋白酶体蛋白酶体MHC-I病毒蛋白病毒蛋白CD8+T细胞细胞CTL杀伤病毒杀伤病毒清除病毒感染清除病毒感染的主要机制的主要机制A.与与MHC-I分子结合：分子结合：肽段肽段B、与、与MHC-II分子结合：分子结合：外源性抗原外源性抗原溶酶体溶酶体MHC-IICD4+T细胞细胞CD4+T活化活化吞噬吞噬溶酶体溶酶体合成和分合成和分泌大量泌大

35、量细胞因子细胞因子辅助辅助B细胞细胞成熟为浆细胞成熟为浆细胞形成形成DTH分泌抗体分泌抗体肽段肽段2.2.体液免疫：体液免疫：病毒病毒机体机体IgMIgM抗体：最早出现抗体：最早出现IgGIgG：出现晚：出现晚IgAIgA：粘膜感染：粘膜感染中和抗体中和抗体、非中和抗体非中和抗体1 1、中和抗体、中和抗体可中和病毒的感染可中和病毒的感染作用机制：作用机制： （1 1）改变病毒表面结构或与病毒表位结）改变病毒表面结构或与病毒表位结合以阻止病毒的吸附；合以阻止病毒的吸附； （2 2）与病毒形成免疫复合物有利于巨噬）与病毒形成免疫复合物有利于巨噬细胞的吞噬和清除；细胞的吞噬和清除； （3 3）有包膜

36、病毒与抗体结合后，激活补）有包膜病毒与抗体结合后，激活补体而使病毒裂解。体而使病毒裂解。激活补体激活补体病毒裂解病毒裂解有包膜病毒有包膜病毒2 2、非中和抗体：、非中和抗体： （1 1）因其产生抗原与病毒入侵细胞无）因其产生抗原与病毒入侵细胞无关，故不能中和病毒的感染；关，故不能中和病毒的感染； （2 2）有时有诊断价值；）有时有诊断价值； （3 3）常见种类有：血凝抑制抗体、补）常见种类有：血凝抑制抗体、补体结合抗体等。体结合抗体等。3 3、抗体介导对靶细胞的作用、抗体介导对靶细胞的作用NKNK细胞杀细胞杀伤靶细胞伤靶细胞NK细胞细胞ADCCADCC作用作用3.3.细胞免疫（特异性免疫以此为

37、主）细胞免疫（特异性免疫以此为主）病毒病毒机体机体致敏致敏TcTc细胞（细胞（CTLCTL）致敏致敏T TDTHDTH杀伤病毒感杀伤病毒感染的靶细胞染的靶细胞释放多种细胞因子，释放多种细胞因子，直接破坏病毒或调直接破坏病毒或调理吞噬的功能理吞噬的功能(1)(1)杀伤性杀伤性T T细胞（细胞（CTLCTL）：）：蛋白酶体蛋白酶体MHC-I病毒蛋白病毒蛋白肽段肽段CTLCTLCTL分泌细胞毒素分泌细胞毒素靶细胞破坏靶细胞破坏分泌穿孔素分泌穿孔素激活靶细胞内的酶激活靶细胞内的酶靶细胞裂解或凋亡靶细胞裂解或凋亡病毒感染恢复的主要机制病毒感染恢复的主要机制(2)(2)辅助性辅助性T T（T TH H）细

38、胞：）细胞：T TH H 细胞细胞辅助辅助B细胞细胞成熟为浆细胞成熟为浆细胞合成和分合成和分泌大量泌大量细胞因子细胞因子分泌抗体分泌抗体活化活化CTL及巨噬细胞及巨噬细胞(3)(3)细胞因子：细胞因子：CD4T细胞细胞病毒抗原病毒抗原分泌抗病毒因子（分泌抗病毒因子（IFN、TNF）激活激活CTL、TH、巨噬细胞、巨噬细胞、NK细胞细胞抑制病毒复制抑制病毒复制清除靶细胞的病毒清除靶细胞的病毒（四）免疫病理作用（四）免疫病理作用 1、CTL细胞在杀伤病毒感染的靶细胞的细胞在杀伤病毒感染的靶细胞的同时，也造成了细胞的损伤，并在感染局部引同时，也造成了细胞的损伤，并在感染局部引起炎症反应；起炎症反应；

39、 2、当病毒抗体亲和力底或与抗原比例不、当病毒抗体亲和力底或与抗原比例不当时，可在体内形成免疫复合物的沉积而引起当时，可在体内形成免疫复合物的沉积而引起III型超敏反应；型超敏反应； 3、病毒感染致、病毒感染致“隐蔽抗原隐蔽抗原”的暴露可诱的暴露可诱发自身免疫病。发自身免疫病。第四节第四节 病毒微生物学检查病毒微生物学检查（一）、选择采标本的时间：（一）、选择采标本的时间：1 1、病毒分离鉴定一般取发病初期或急性期标本；、病毒分离鉴定一般取发病初期或急性期标本；2 2、血清学诊断取患者早期（测、血清学诊断取患者早期（测IgM)IgM)和恢复期双份血液。和恢复期双份血液。（二）不同病毒感染采不同

40、标本：（二）不同病毒感染采不同标本： 呼吸道感染呼吸道感染采鼻咽分泌物；肺部感染采鼻咽分泌物；肺部感染采痰液采痰液 肠道感染肠道感染采粪便；采粪便； 病毒血症病毒血症采血液采血液 神经系统感染神经系统感染采脑脊液。采脑脊液。一、标本的采集与送检：一、标本的采集与送检：一一、病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法标本送检：标本送检： 1 1、标本采集后应尽快送检；、标本采集后应尽快送检； 2 2、如不能及时检查，标本宜置冰壶、如不能及时检查，标本宜置冰壶内保存，病变组织可置于内保存，病变组织可置于50%50%甘油盐水中甘油盐水中低温保存；低温保存； 3 3、标本的长期保存应置于、标本的长期保存应置

41、于-70-70低温低温冰箱，或冰箱，或-196-196液氮罐中。液氮罐中。病毒的分离培养和鉴定：病毒的分离培养和鉴定：（一）细胞培养（最常用）：（一）细胞培养（最常用）：标本标本原代细胞原代细胞传代细胞传代细胞细胞病变细胞病变血细胞吸附血细胞吸附PHPH值改变等值改变等特异性抗体鉴定特异性抗体鉴定（二）鸡胚接种（二）鸡胚接种尿囊腔接种尿囊腔接种羊膜腔接种羊膜腔接种流感病毒流感病毒流感病毒流感病毒尿液尿液羊水羊水血凝及血凝抑制试验血凝及血凝抑制试验 鉴定病毒鉴定病毒（三）动物培养（少用）（三）动物培养（少用）流感病毒流感病毒+红细胞红细胞 血凝血凝流感病毒流感病毒+特异抗体特异抗体 血凝被抑制血

42、凝被抑制二二、病毒感染的快速检查方法：病毒感染的快速检查方法：（一）测抗原：（一）测抗原：标本标本 + +荧光标记抗体（已知）荧光标记抗体（已知）酶标记抗体（已知）酶标记抗体（已知）荧光显微镜观察荧光显微镜观察加底物后观察加底物后观察ELISAELISA法：法：乳胶凝集法：乳胶凝集法：检查病毒抗原检查病毒抗原1、免疫荧光技术：、免疫荧光技术：直接法：标本直接法：标本+荧光标记抗体荧光标记抗体荧光显微镜观察荧光显微镜观察间接法：标本间接法：标本+抗体抗体+荧光标记二抗荧光标记二抗荧光显微镜观察荧光显微镜观察2、酶免疫技术：、酶免疫技术： 酶免疫组化法：酶免疫组化法： 标本标本+酶标抗体酶标抗体+

43、酶的底物酶的底物光学显微镜观察颜色变化光学显微镜观察颜色变化 ELISAELISA法：法：抗体或抗原（反应板）抗体或抗原（反应板）+ +待检抗原或抗体待检抗原或抗体+ +酶标抗体或抗原酶标抗体或抗原 + +底物底物 比色计测底物颜色比色计测底物颜色测抗体（多用测抗体（多用ELISAELISA法）：法）： IgMIgM型抗体型抗体：早期诊断价值；：早期诊断价值； IgGIgG型抗体型抗体：应用早期及恢复期双份血清，：应用早期及恢复期双份血清，后者抗体效价是前者的后者抗体效价是前者的4 4倍以上时，有辅助诊倍以上时，有辅助诊断价值；断价值； IgGIgG型抗体（感染后期）型抗体（感染后期）：随访测

44、抗体效：随访测抗体效价，如有价，如有4 4倍降低，有辅助诊断价值。倍降低，有辅助诊断价值。病毒感染的血清学诊断（双份血清）病毒感染的血清学诊断（双份血清） 、中和试验、中和试验病毒病毒+ +待检血清（系列稀释）待检血清（系列稀释）组织细胞组织细胞观察观察CPECPE 、血凝抑制试验、血凝抑制试验病毒红细胞（鸡、人等）病毒红细胞（鸡、人等）血凝现象血凝现象病毒待检血清红细胞（鸡、人等）病毒待检血清红细胞（鸡、人等）血凝现象消失血凝现象消失病毒核酸的测定：病毒核酸的测定：（一）病毒基因探针法：（一）病毒基因探针法： 1 1、标本、标本 病毒基因病毒基因探针（标记）探针（标记）+ +杂交杂交 放射自

45、显影放射自显影生物素生物素- -亲和素系统亲和素系统 2 2、SouthernSouthern印迹法印迹法标本标本DNADNA凝胶电泳凝胶电泳转移至膜上转移至膜上+ + 病毒探针病毒探针分析标本中核酸情况分析标本中核酸情况多聚酶链反应（多聚酶链反应（PCRPCR）：敏感度极高）：敏感度极高标本标本提取核酸提取核酸DNADNA+ + 耐热耐热DNADNA多聚酶多聚酶RNARNA转录转录DNADNADNADNA扩增扩增电泳电泳基因片段观察基因片段观察第五节第五节 病毒感染的防治原则病毒感染的防治原则一一.病毒感染的治疗病毒感染的治疗病毒病毒穿入穿入脱壳脱壳核酸复制、转录核酸复制、转录 及蛋白质合成

46、及蛋白质合成装配装配吸附吸附释放释放药物药物药物药物药物药物药物药物药物药物一、抗病毒药物一、抗病毒药物1、设计策略：、设计策略： 以合成的异常嘧啶取代病毒以合成的异常嘧啶取代病毒DNA前体的胸腺嘧啶，前体的胸腺嘧啶，病毒病毒DNA合成时，异常嘧啶即参入到子代合成时，异常嘧啶即参入到子代DNA中，阻中，阻止子代病毒基因结构的合成和表达，从而抑制病毒的止子代病毒基因结构的合成和表达，从而抑制病毒的复制或复制出失去感染性的病毒复制或复制出失去感染性的病毒DNAATC AGATTA异常异常C AGA异常异常异常异常疱疹净疱疹净无环鸟苷、丙氧鸟苷无环鸟苷、丙氧鸟苷2 2、常用药物：、常用药物：毒副作用

47、大毒副作用大病毒特异性病毒特异性胸苷激酶磷酸化胸苷激酶磷酸化后才起作用后才起作用AZTAZT（三磷酸化的三磷酸化的3-叠氮叠氮-2、3 二脱氧胸腺嘧啶核苷）：二脱氧胸腺嘧啶核苷）：， ， 作为类似病毒核苷酸的底物与之竞争并抑作为类似病毒核苷酸的底物与之竞争并抑制病毒的逆转录酶制病毒的逆转录酶3 、病毒蛋白酶的抑制物：、病毒蛋白酶的抑制物：(1)设计策略：设计策略： 以基因工程表达病毒蛋白酶后，取其结晶用以基因工程表达病毒蛋白酶后，取其结晶用X衍衍射及电脑模拟技术寻找酶的活性位点，然后设计出射及电脑模拟技术寻找酶的活性位点，然后设计出对蛋白酶活性位点的抑制剂。对蛋白酶活性位点的抑制剂。(2)“鸡

48、尾酒鸡尾酒”疗法治疗疗法治疗HIV： 3TC（核苷类药物）（核苷类药物）+蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂 （3 3）其他）其他生物制剂：生物制剂：干扰素、干扰素诱生剂、干扰素、干扰素诱生剂、IL-1IL-1、TNFTNF等；等；中草药：中草药：黄芪、板兰根、大青叶等。黄芪、板兰根、大青叶等。2 2 、抗病毒基因治疗抗病毒基因治疗2 21、设计策略：、设计策略： DNA病毒病毒：首先选择病毒基因组的靶基因，然：首先选择病毒基因组的靶基因，然后设计互补的后设计互补的DNA片段（片段（15-30个聚寡核苷酸），当个聚寡核苷酸），当它与病毒的关键基因结合后，就可阻抑病毒核酸的它与病毒的关键基因结合后，就可阻

49、抑病毒核酸的复制和转录。复制和转录。 RNA病毒病毒：主要通过与靶基因的：主要通过与靶基因的mRNA互补结互补结合后，一可阻碍合后，一可阻碍mRNA与核糖体结合而阻抑病毒蛋与核糖体结合而阻抑病毒蛋白的转译；二则因反义白的转译；二则因反义RNA与与mRNA结合物对核酸结合物对核酸没敏感而被降解，间接阻断病毒蛋白质的合成。没敏感而被降解，间接阻断病毒蛋白质的合成。2、存在问题：、存在问题： （1）合成反义）合成反义DNA或或RNA、核酶等所需成本高；、核酶等所需成本高； （2）制剂不稳定易被核酸酶降解及如何使制剂能有）制剂不稳定易被核酸酶降解及如何使制剂能有效地到达靶基因等。效地到达靶基因等。 二

50、、免疫制剂：二、免疫制剂： 1、抗病毒的特异免疫球蛋白；、抗病毒的特异免疫球蛋白； 2、治疗性疫苗；、治疗性疫苗； 3、细胞因子等。、细胞因子等。二二 病毒感染的预防病毒感染的预防(二二)灭活疫苗：灭活疫苗：(一一)减毒活疫苗（首选）：减毒活疫苗（首选）： (三三)、与人类病毒有交叉免疫原性的、与人类病毒有交叉免疫原性的动物病毒（减毒活疫苗）；动物病毒（减毒活疫苗）；(四四)基因工程疫苗：基因工程疫苗：合成编码保护性合成编码保护性抗原的基因片段抗原的基因片段克隆表达克隆表达于载体于载体细胞、真菌细胞、真菌细菌等细菌等大量增殖大量增殖基因重组疫苗基因重组疫苗纯化纯化(五五)核酸疫苗（核酸疫苗（D