综合化学实验配位化学和生物无机化学部分课件.ppt
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1、综合化学实验配位化学和生物无机化学部分课件 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life, there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望实验1 氨酸铜配合物的合成和表征 模板合成 IR光谱表征 自由基的UV光谱检测实验4 DNA提取及其与氨酸铜配合物的作用 琼脂糖凝胶电泳 凝胶成像总学时:15 学时地点:丰盛堂212室实验内容实验内容 超螺旋超螺旋DNA 缺刻型缺刻型DNA 线型线型DNA自由基机理自由基机理自由基进攻糖环或碱基,导致氧化破坏酯水解机理酯水解机理亲核试剂进攻磷原子,发生亲核取代反应酯水解机理
2、优于自由基机理DNADNA结构及其断裂方式结构及其断裂方式l配合物与未受损的DNA表面结合并诱导其断裂l进一步在新的断裂处结合l断裂反应l互补链的断裂DNA的自由基断裂的自由基断裂实验背景实验背景模拟博莱霉素模拟博莱霉素 在天然物质中,由5 个氨基酸、2 个六碳糖和1 个氨基侧链构成的博来霉素(bleomycin)可导致DNA链的断裂,从而作为一族广谱抗菌抗肿瘤药物。 导致DNA链的断裂原因是由于博来霉素分子的一部分是铁或铜的配合物,这类配合物能够产生导致DNA链断裂的自由基。CuP-3A的配位结构示意图博莱霉素的活性中心博莱霉素的活性中心Pamatong, F. V.; Detmer. C.
3、 A., III; Bocarsly, J. R.; J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 5339.Detmer. C. A., III; Pamatong, F. V.; Bocarsly, J. R.; Inorg. Chem., 1996, 21, 6292.HNNHOCu(II)NH3+OOOHNNHOCu(II)NH3+OOO博莱霉素的模型化合物博莱霉素的模型化合物Cu2+ + e- = Cu+ Cu+ + H2O2 = Cu2+ + OH- + OHOHH2NOAOHH2NOAO2N2CH2OONHOAONHOAO2NCuCu2+NEt3ONHOAONHOA
4、-Cl+H3NCu+1 Zn/HCl2 Cu(NO3)2A = H, phen, .12氨基酸铜化合物的合成路线氨基酸铜化合物的合成路线OHH2NOAOHH2NOAOH2NOAOH2NOACuCu2+NEt3HCHOOH2NOAONOACuHHO2N-OH2NOAONHOAO2NCuONOAONHOAO2NCuH2C-ONHOAONHOAO2NCuHCHO模板反应的化学机理模板反应的化学机理化合物化合物1的红外光谱的红外光谱ONHOONHOO2NCu(COO-)(COO-)(NO2)(NO2)化合物化合物2的红外光谱的红外光谱ONHOONHO-Cl+H3NCu(COO-)(COO-)(NH2)
5、氢氧自由基的形成和氢氧自由基的形成和UV光谱检测光谱检测由于罗丹明由于罗丹明B可与可与HO迅速反应,并在迅速反应,并在553nm有强有强吸收,因此我们可以利用此反应采用分光光度法检吸收,因此我们可以利用此反应采用分光光度法检验验HO的生成。的生成。 琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法纯化和鉴定核酸的方法 琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物 根据琼溶解温度,把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼根据琼溶解温度,把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖脂糖 低熔点琼脂糖熔点
6、为低熔点琼脂糖熔点为6265,溶解后在,溶解后在37下维持液下维持液体状态约数小时,主要用于体状态约数小时,主要用于DNA片段的回收,质粒与外片段的回收,质粒与外源性源性DNA的快速连接等的快速连接等凝胶浓度选择凝胶浓度选择琼脂糖凝胶的浓度与琼脂糖凝胶的浓度与DNADNA分离范围分离范围琼脂糖浓度琼脂糖浓度(%)线型线型DNA分子的分离范围分子的分离范围(Kb)0.35600.61200.70.8100.90.571.20.961.50.2312.00.12电泳缓冲液电泳缓冲液 常用三种缓冲液常用三种缓冲液 Tris-硼酸硼酸(TBE)、Tris-乙酸乙酸(TAE)、Tris-磷酸磷酸(TPE
7、) TBE与与TPE:缓冲容量高,缓冲容量高,DNA分离效果好,但分离效果好,但TPE在在DNA片段回收时含磷酸盐浓度高,容易使片段回收时含磷酸盐浓度高,容易使DNA沉淀沉淀 TAE:缓冲容量低,但价格较便宜,因而推荐选用缓冲容量低,但价格较便宜,因而推荐选用TAE。缓冲液中的缓冲液中的 EDTA 可螯合二价阳离子,从而抑制可螯合二价阳离子,从而抑制DNA酶酶的活性,防止的活性,防止PCR扩增产物降解扩增产物降解核酸电泳的指示剂核酸电泳的指示剂 指示剂:溴酚兰、二甲苯青指示剂:溴酚兰、二甲苯青 溴酚兰溴酚兰:在碱性液体中呈紫兰色,电泳中,溴酚兰的迁移:在碱性液体中呈紫兰色,电泳中,溴酚兰的迁移
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- 综合 化学 实验 生物 无机化学 部分 课件
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